O documento descreve o processo de sequenciamento de DNA, que determina a ordem das bases nitrogenadas no DNA. Ele explica que o DNA é colocado em tubos de PCR com primers, DNA polimerase e dNTPs marcados com fluorescência. A reação faz cópias parciais do DNA e a eletróforse capilar separa os fragmentos fluorescentes por tamanho para determinar a sequência do DNA.

1. Sequenciamento do DNA
Tutor Presencial Bruno Ribeiro
São Gonçalo
2016

2. Definição
Processo que determina a sequência (ordem) de
bases da molécula de DNA, utilizando
nucleotídeos artificialmente alterados
(SADAVA et al., 2009).
ClustalX, 2016

3. Reação de sequenciamento
• Colocar em um tubo de PCR:
DNA
Fonte:frr.wikipedi
a.org/wiki/DNA
Primers DNA polimerase
Fonte:www.labbu
lletin.com
dNTP
ddNTP
Desoxirribonucleosí
deos trifosfato
Didesoxirribonucleo
sídeos trifosfato

4. Procedimento
• DNA desnaturado (tubo teste)
http://docplayer.com.br/6745095-Estrutura-e-funcao-de-acidos-nucleicos.html

5. Procedimento
• DNA-polimerase síntese da fita complementar

6. Procedimento
• Inserir os dNTP (dATP, dGTP, dCTP e dTTP)
• Pequenas quantidades de ddNTP (Marcado
com uma fluorescente)
Ivone et al., 2014

7. Importância do ddNTP

8. Eletroforese capilar
• Desnaturação das fitas de DNA
Fonte: www.genomic.com.br/index.jsp?conteudo=17

9. Referência
Ivone U. S. Leong, Jonathan R. Skinner and
Donald R. Love. Application of Massively
Parallel Sequencing in the Clinical Diagnostic
Testing of Inherited Cardiac Conditions.
Revista Medical Sciencs, v. 2, n.2, p. 98-126,
2014.
SADAVA, David; HELLER, H. Craig; ORIANS,
Gordon H., PURVES, William K. & HILLIS, David
M. Vida: a ciência da Biologia. Volume I, 8ª
Edição, 2009.

10. Referência
Ivone U. S. Leong, Jonathan R. Skinner and
Donald R. Love. Application of Massively
Parallel Sequencing in the Clinical Diagnostic
Testing of Inherited Cardiac Conditions.
Revista Medical Sciencs, v. 2, n.2, p. 98-126,
2014.
SADAVA, David; HELLER, H. Craig; ORIANS,
Gordon H., PURVES, William K. & HILLIS, David
M. Vida: a ciência da Biologia. Volume I, 8ª
Edição, 2009.