O documento discute os fundamentos da engenharia genética, incluindo a clonagem molecular, vetores, enzimas e células hospedeiras usadas. Ele explica como os genes podem ser isolados, copiados e transferidos entre espécies usando estas ferramentas da biotecnologia, com aplicações como a produção de proteínas e organismos transgênicos.

1. Fundamentos de Engenharia Genética Curso de Biomedicina Prof. Dr. Eduardo Honda Porto Velho - RO 2008

2. Dogma Central da Biologia Molecular

5. Clonagem Molecular Isolamento de Novos organismos que produzem enzimas de interesse Biotecnológico.

6. Clonagem Molecular- Isolamento Gênico Isolamento do DNA: PCR, Banco de cDNA.

7. Isolamento do DNA- PCR Desnaturação do DNA Fita-Dupla

8. Isolamento do DNA- PCR Após vários ciclos... Amplificação do Fragmento gênico desejado !!!

12. Biblioteca de cDNA - mRNA de um tipo celular específico; - “primer” de oligo dT e transcriptase reversa; - DNA Polimerase I e dNTPs; - Clonagem em um vetor de escolha

14. Geração de moléculas recombinantes - Clonagem Molecular -

15. CLONAGEM

16. Ligação de extremidades compatíveis

17. Sítio Múltiplo de Clonagem (Polylinker)

18. As endonucleases de Restrição Clonagem Orientada

20. ENZIMAS

22. Enzymes for DNA manipulation – restriction enzymes Source: http://www.blc.arizona.edu/INTERACTIVE/recombinant3.dna/clones.html

28. VETORES

34. Sequências de DNA de um vetor de expressão de E. coli

35. Vetores de expressão

36. Transformação Bacteriana Source: http://www.blc.arizona.edu/INTERACTIVE/recombinant3.dna/clones.html Células podem ser selecionados em placas com antibiótico. Alguns plasmídios utilizam o gene da B-galactosidase.

37. O gene da beta-galactosidase é interrompido quando um fragmento de DNA é clonado. O substrato "X-gal“ fica azul se o gene da beta-gal permanece intacto, isto é a enzima está ativa. As colônias brancas na presença de X-gal significa a presença de DNA recombinante no plasmidio.

39. Clonagem de um fragmento de DNA exógeno em E. coli usando o pBR322 como vetor

40. Clonagem de um fragmento de DNA exógeno em E. coli usando o pBR322 como vetor

42. O Ciclo de vida de um bacteriófago

44. Clonando no Fago λ

48. Cromossomos artificiais

49. CÉLULAS HOSPEDEIRAS

53. Adapted from Human Genetics, Ricki Lewis Microinjeção

54. Transformação Bacteriana Source: http://www.blc.arizona.edu/INTERACTIVE/recombinant3.dna/clones.html Células podem ser selecionados em placas com antibiótico. Alguns plasmídios utilizam o gene da B-galactosidase.

55. Clonando no Fago λ

57. Screening Identificação de um clone de interesse - hibridação com sonda radioativa - anticorpo específico

58. Aplicações da Engenharia Genética

60. Plantas Transgênicas

62. Animais Transgênicos

64. Microinjeção de DNA no núcleo de ovo fertilizado de camundongo - gene do fator de crescimento humano

65. Biofármacos Recombinantes

68. Terapia Gênica

69. Adição do gene terapêutico Substituição do gene terapêutico

70. Uso de vírus