O documento fornece instruções sobre o uso do meio de cultura BD EMB Agar, Modified para o isolamento e diferenciação de bactérias gram-negativas entéricas de amostras clínicas. O meio contém corantes que permitem distinguir colônias de diferentes bactérias e inibe parcialmente bactérias gram-positivas. Deve ser usado em conjunto com outros meios de cultura para identificação completa dos microrganismos.

1. INSTRUÇÕES DE
UTILIZAÇÃO – MEIOS EM
PLACAS PRONTOS A
USAR
PA-254014.06 Rev.: April 2013
PA-254014.06 - 1 -
BD EMB Agar (Eosin Methylene Blue Agar), Modified
UTILIZAÇÃO PRETENDIDA
O BD EMB Agar, Modified (formulação de Holt-Harris e Teague) é um meio para diferenciação
ligeiramente selectivo utilizado para o isolamento e diferenciação de bacilos entéricos gram-
negativos (Enterobacteriaceae e outros bastonetes gram-negativos) provenientes de amostras
clínicas.
PRINCIPIO E EXPLICAÇÃO DO PROCEDIMENTO
Método microbiológico
O agar EMB baseia-se numa formulação descrita inicialmente por Holt-Harris e Teague em
1916. 1
A formulação original de Holt-Harris e Teague foi modificada por Levine. 2
A principal diferença
entre as duas consiste na inclusão de sacarose no meio de Holt-Harris e Teague. A sacarose
é fermentada por determinados organismos entéricos de forma mais rápida do que a lactose.3
O BD EMB Agar, Modified contém corantes de eosina Y e azul-de-metileno que inibe as
bactérias gram-positivas num determinado grau. Os corantes funcionam também como
indicadores de diferenciação em resposta à fermentação da lactose e/ou sacarose por
microorganismos. Os coliformes produzem colónias pretas-azuladas, enquanto as colónias de
Salmonella e Shigella são incolores ou têm uma cor âmbar transparente. As colónias de
Escherichia coli poderão apresentar um reflexo verde metalizado característico, devido à
rápida fermentação da lactose.
O agar EMB (com ou sem sacarose) é incluído no conjunto de meios de isolamento de
selectividade reduzida para a Salmonella de amostras fecais e de outro tipo.4
As bactérias gram-positivas como, por exemplo, estafilococos, leveduras e estreptococos
fecais, poderão desenvolver-se neste meio e formar colónias punctiformes ou poderão ficar
inibidas.
REAGENTES
BD EMB Agar, Modified
Fórmula* por Litro de Água Purificada
Hidrolisado pancreático de gelatina 10,0 g
Lactose 5,0
Sacarose 5,0
Fosfato dipotássio 2,0
Agar 13,5
Eosina Y 0,4
Azul-de-metileno 0,065
pH 7,2 ± 0,2
*Ajustada e/ou suplementada conforme necessário para cumprir os critérios do desempenho.
PRECAUÇÕES
. Apenas para uso profissional.
Não utilizar as placas que apresentem sinais de contaminação microbiana, descoloração,
secura, fissuras ou outros sinais de deterioração.
Consultar as INSTRUÇÕES GERAIS DE UTILIZAÇÃO para informação sobre os
procedimentos de manuseamento asséptico, os riscos biológicos e os procedimentos de
eliminação do produto usado.

2. PA-254014.06 - 2 -
ARMAZENAMENTO E PRAZO DE VALIDADE
Após recepção das placas, conservar no escuro a uma temperatura entre 2 e 8°C, dentro do
invólucro original até ao momento da utilização. Evitar congelar e aquecer excessivamente. As
placas podem ser inoculadas até ao prazo de validade (ver a etiqueta da embalagem) e
incubadas durante o tempo de incubação recomendado.
As placas são fornecidas em pilhas de 10 placas e, quando uma destas pilhas é aberta, as
respectivas placas terão de ser utilizadas no prazo máximo de uma semana, se forem
conservadas em local limpo a uma temperatura entre 2 e 8°C.
CONTROLO DE QUALIDADE PELO UTILIZADOR
Inocular amostras representativas com as seguintes estirpes (para mais detalhes, consultar as
INSTRUÇÕES GERAIS DE UTILIZAÇÃO). Incubar as placas em condições aeróbias, a uma
temperatura de 35 ± 2°C, durante 18 a 24 horas.
Estirpes Resultados de Crescimento
Escherichia coli ATCC 25922 Crescimento bom a excelente; colónias pretas-
azuladas com reflexo verde metalizado
Salmonella Typhimurium ATCC 14028 Crescimento bom a excelente; colónias cinzentas
claras a âmbar
Shigella flexneri ATCC 12022 Crescimento razoável a bom; colónias incolores a
âmbar claro
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Inibição parcial; colónias incolores
Não inoculadas Cor púrpura com um tom laranja-esverdeado;
ligeiramente opalescente
PROCEDIMENTO
Materiais fornecidos
BD EMB Agar, Modified (placas Stacker de 90 mm). Microbiologicamente controlados.
Materiais não fornecidos
Meios de cultura auxiliares, reagentes e equipamento de laboratório conforme necessário.
Tipos de amostra
Este produto é um meio selectivo para bastonetes gram-negativos que pode ser utilizado para o
isolamento de bacilos entéricos gram-negativos provenientes de todos os tipos de amostras
clínicas (consultar também CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO E LIMITAÇÕES DO
PROCEDIMENTO).
Procedimento do teste
Espalhar a amostra para cultura imediatamente após esta ser recebida no laboratório. A placa
para cultura é usada principalmente para isolar culturas puras das amostras que contêm flora
misturada. Em alternativa, se o material estiver a ser cultivado directamente de uma
zaragatoa, fazer rolar a zaragatoa sobre uma pequena área da superfície, na extremidade; em
seguida, esfregar a partir desta área inoculada. Também deve ser feito o esfregaço de um
meio não selectivo, como é o caso do agar de Columbia com sangue de ovelha a 5%, para
fornecer uma indicação dos outros organismos presentes na amostra.
Incubar as placas, ao abrigo da luz, a uma temperatura de 35 ± 2°C, durante 18 a 24 horas.
Resultados
A morfologia típica das colónias é a seguinte:
Organismos BD EMB Agar, Modified
E. coli De grande dimensão, pretas-azuladas, reflexo verde
metalizado
Enterobacter/Klebsiella De grande dimensão, mucóides, pretas-azuladas
Proteus De grande dimensão, incolores
Salmonella De grande dimensão, incolores a âmbar
Shigella De grande dimensão, incolores a âmbar

3. PA-254014.06 - 3 -
Pseudomonas Irregulares, incolores
Bactérias gram-positivas Nenhum indício de crescimento a crescimento ligeiro
CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO E LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO
No agar BD EMB Agar, Modified, verificar-se-á o crescimento de organismos da família
Enterobacteriaceae e uma variedade de outros bastonetes gram-negativos como, por exemplo,
Pseudomonas e Aeromonas.3-5
Muitas vezes, os organismos gram-positivos não são completamente inibidos neste meio.
Embora possam ser realizados alguns testes de diagnóstico directamente neste meio, é
necessária a realização de testes bioquímicos para uma completa identificação e, se indicado,
a realização de testes imunológicos usando culturas puras. Consulte a bibliografia apropriada.
3-5
BIBLIOGRAFIA
1. Holt-Harris, J.E., and O. Teague. 1916. A new culture medium for the isolation of Bacillus
typhosus from stools. J. Infect. Dis. 18:596-600.
2. Levine, M. 1918. Differentiation of B. coli and B. aerogenes on a simplified eosin-methylene
blue agar. J. Infect. Dis. 23:43-47.
3. MacFaddin, J.F. 1985. Media for the isolation – cultivation – maintenance of medical
bacteria. Volume 1. Williams and Wilkins, Baltimore, London.
4. Farmer III, J.J. 2003. Enterobacteriaceae: introduction and identification. In: Murray, P. R.,
E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical
microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
5. Bopp, C.A., Brenner, F.W., Fields, P.I., Wells, J.G., and N.A. Strockbine. 2003. Escherichia,
Shigella, and Salmonella. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and
R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for
Microbiology, Washington, D.C.
EMBALAGEM / APRESENTAÇÃO
BD EMB Agar, Modified
Cat. No. 254014 Meios em placas prontos a usar, 20 placas
Cat. No. 254073 Meios em placas prontos a usar, 120 placas
INFORMAÇÕES ADICIONAIS
Para obter informações adicionais, contacte o representante local da BD.
Becton Dickinson GmbH
Tullastrasse 8 – 12
D-69126 Heidelberg/Germany
Phone: +49-62 21-30 50 Fax: +49-62 21-30 52 16
Reception_Germany@europe.bd.com
http://www.bd.com
http://www.bd.com/europe/regulatory/
ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection
BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company. © 2013 BD