O documento descreve vários meios de cultura para identificação de microrganismos em amostras de alimentos e ambientais. Inclui informações sobre a composição, uso e interpretação de resultados do Agar HiCrome ECC, que é usado para diferenciar Escherichia coli de outros coliformes, e do Agar Base HiCrome Seletivo ECC, recomendado para detecção simultânea de E. coli e coliformes totais.

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Código HiMedia (Meio em pó)
CHROMagar
Difco - BD
Merck Oxoid Remel
Agar HiCrome ECC
(HiCrome ECC Agar)
CHROMagar ECC
Cromogênico E.coli
/ Meio ColiformeM1293
Agar HiCrome Seletivo ECC
(HiCrome ECC Selective Agar)
Agar Chromocult
Coliform
Meio Cromogênico
Seletivo E.
coli Coliforme
M1294
Agar HiCrome Coliformes (com SLS)
(HiCrome Coliform Agar (W/ SLS)
Agar Chromocult
ColiformM1300
Caldo M-E.coli
(M-E.coli Broth)M1426
Agar HiCrome Sulfato Lauril
(HiCrome Lauryl Sulphate Agar)
M1569
Agar HiCrome E-coli / Modificado
(HiCrome E. coli Agar / Modified)
CHROMagar E.coli
Agar Chromocult
TBX Triptona Bile
X-Glucuoronida
Meio Triptona Bile
X-Glucuoronida
(TBX)
M1295 /
M1295i
Agar HiCrome M-TEC
(HiCrome M-TEC Agar)
Agar M-TECM1571
Agar Base HiCrome MacConkey Sorbitol
(HiCrome MacConkey Sorbitol Agar Base) CHROMagar. 0157
Agar Sorbiltol
MacConkey (c/ subs-
trato cromogênico)
Agar MacConkey
Sorbitol com BCIGM1340
Agar HiCrome EC.0157:H7
(HiCrome EC.0157:H7 Agar)
CHROMagar. 0157M1574
Agar Base HiCrome Seletivo EC.0157:H7 *
(HiCrome EC.0157:H7 Selective Agar Base)M1575
Caldo Base HiCrome de Enriquecimento ECO157:H7
(HiCrome Enrichment Broth Base for ECO157:H7)
M1598
Agar HiCrome Seletivo UTI
(HiCrome UTI Selective Agar)M1505
Agar HiCrome UTI Modificado
(HiCrome UTI Agar Modified)
M1418
Agar HiCrome UTI CHROMagar
Orientation
Meio Cromogênico
UTI
Meio Cromogênico
UTIM1353
Agar Diferencial Salmonella
Salmonella Differential Agar Agar Rambach Agar RambachM1078
Agar Diferencial Salmonella Modificado (pacote duplo)
Salmonella Differential Agar Modified (Twin pack)
M1082
Agar HiCrome Salmonella
(HiCrome Salmonella Agar)
CHROMagar
Salmonella
Agar Base
Cromogênico
Salmonella
Agar Cromogênico
SalmonellaM1296
Agar HiCrome MM
(HiCrome MM Agar)M1393
Agar HiCrome Enterococci
(HiCrome Enterococci Agar)
Caldo HiCrome Enterococci
(HiCrome Enterococci Broth)
Caldo Chromocult
Enterococci
M1414
M1376
Agar Base HiCrome Enterococcus feacium
HiCrome Enterococcus farcium Agar Base
M1580
Agar HiCrome Candida
(HiCrome Candida Agar)
CHROMagar
Candida
Agar Chromogênico
Candida
Agar Cromogênico
CandidaM1297A
Agar Base HiCrome OGYE
(HiCrome OGYE Agar Base)
M1467
Agar HiCrome Enterobacter sakazakii
(HiCrome Enterobacter sakazakii Agar)
Agar Cromogênico
Enterobacter sakazakii
Meio Chromo
E. sakazakiiM1577
Agar HiCrome Enterobacter sakazakii, Modificado
(HiCrome Enterobacter sakazakii Agar, Modified)
Agar Cromogênico
Enterobacter sakazakiiM1641
Agar Base HiCrome Seletivo Klebsiella
(HiCrome Klebsiella Sective Agar Base)M1573
Agar Base Diferencial L.mono
(L.mono Differential Agar Base)
CHROMagar
Listeria
M1540
Agar HiCrome Listeria, Modificado
(HiCrome Listeria Agar, Modified)
M1417
Agar MCP
(MCP Agar)M1354
Agar HiCrome Bacillus
(HiCrome Bacillus Agar)
Agar Cromogênico
Bacillus cereusM1651
Agar Base HiFluoro Pseudomonas
(HiFluoro Pseudomonas Agar Base)M1469
Agar HiColiformes Rápido
(Rapid HiColiform Agar)
* Similar ao Biosynth’s BCM 0157 Agar
M1465
Índice

4. M1293
AGAR HICROME ECC
AGARHICROMEECC
Composição Princípio e Interpretação
Procedimento de Preparo
Avaliação de Resultados
Controle de qualidade
Agar HiCrome ECC é um meio diferencial recomendado para a identificação presuntiva de Escherichia coli e outros coliformes em
amostras ambientais e alimentos.
Para Identificação e Diferenciação de E. coli e Coliformes totais.
Ingredientes g/L
Peptona especial 5.00
Extrato de levedura 3.00
Lactose 2.50
Fosfato dissódico 3.50
Fosfato ácido de potássio 1.50
Cloreto de sódio 5.00
Mistura cromogênica 20.30
Vermelho neutro 0.03
Ágar 15.00
pH Final (a 25°C): 6.8 ± 0.2
Dissolva 55.83 gramas em 1000 mL de água destilada. Ferva
gentilmente para dissolver o meio completamente. Esterilize por
autoclavação sob pressão de 1 atm a 121°C por 15 minutos. Resf-
rie a 50°C. Misture bem e distribua em placas de Petri estéreis.
Aparência do pó: Pó amarelo claro a rosado, homogêneo que flui
livremente.
Solidificação: Firme, comparável com Agar gel a 1.5%.
Cor e Transparência do meio preparado: Cor rosa avermelhado,
gel opaco em placas de Petri.
Reação: A solução aquosa de 5.58% (peso/volume) tem pH final de
6.8 ± 0.2 a 25°C.
Condições de Armazenamento: Armazenar o pó entre 2 e 8°C , em
frasco bem fechado . Utilize antes de expirar a data de validade.
Referências Bibliográficas:
1. Doyle M. P., (Ed.), 198, Foodborne Bacterial Pathogens Marcel Dekker, New York
2. Frampton E.W., Restaino L. and Blaszko N., (1988), J. Food Prot., 51:402.
3. Kilian M. and Bülow P., (1976), Acta. Pathol. Microbiol. Scand., Sect. B, 84:245.
4. Kilian M. and Bülow P., (1979), Acta. Pathol. Microbiol. Scand., Sect. B, 87:271.
Característica da cultura após incubação a 35-37°C por 18-24 horas.
E. coli, um membro da família Enterobacteriaceae, faz parte da
microbiota normal do trato intestinal de humanos e de uma
variedade de animais. Embora a maior parte das E. coli não
causem doenças gastrointestinais, certos grupos de E. coli
podem causar diarréias com risco de vida e seqüelas severas
ou deficiência (1). O Agar HiCrome ECC é um meio diferencial
recomendado para a identificação presuntiva de E. coli e outros
coliformes em alimentos e amostras ambientais (2). O meio
contém dois cromógenos. Um dos cromógenos é clivado pela
enzima glucoronidase produzida por E. coli e forma colônias de
cor azul a arroxeado enquanto que o outro cromógeno é clivado
pela enzima galactosidase, produzida pela maioria dos coliformes,
resultando em colônias rosa-choque (3,4).
A peptona especial e o extrato de levedura fornecem substâncias
nitrogenadas, vitaminas do complexo de B e outros nutrientes
essenciais ao crescimento. A lactose é um carboidrato fermen-
tável, o qual ajuda na detecção de fermentadores de lactose, com
o vermelho neutro como indicador. O fosfato dissódico e o fosfato
ácido de potássio tamponam bem o meio. O cloreto de sódio
mantém o equilíbrio osmótico. Antes do uso a superfície do meio
deve estar seca.
Dilua a amostra de alimento em 1:5 ou 1:10 com 0,1% de água
Peptonada estéril (M028) e homogeneíze em um liquidificador ou
em um homogeneizador. Espalhe 0,5 mL ou 1,0 mL do homoge-
neizado sobre a superfície do ágar com uma alça de Drygalski e
incube as placas a 37°C por 18-24 horas. Conte as colônias de cor
azul arroxeadas e multiplique pelo fator de diluição. O número de
E. coli é relatado por grama de alimento.
O meio deve ser usado apenas com o propósito de diagnóstico in
vitro. Use máscara enquanto manuseia o produto desidratado e
evite o contato com os olhos.
01
Organismos Inóculo Crescimento Recuperação Cor da colônia
Escherichia coli ATCC 25922 50-100 Abundante 70% Azul/roxo
Klebsiella pneumoniae ATCC13883 50-100 Abundante 70% Rosado/rosa pink
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 50-100 Bom-abundante 70% Palha
Salmonella Enteritidis ATCC 13076 50-100 Abundante 70% Rosa pink

5. M1294
02
AGAR BASE HICROME SELETIVO ECC
AGARBASEHICROMESELETIVOECC
ComposiçãoPrincípio e Interpretação
Procedimento de Preparo
Avaliação de Resultados
Controle de qualidade
Agar Base HiCrome Seletivo ECC é recomendado para detecção de Escherichia coli e coliformes em amostras de água e alimento.
Para Identificação e Diferenciação de E. coli e Coliformes totais.
Ingredientes g/L
Peptona especial 6.00
Hidrolisado enzimático de caseína 3.30
Fosfato ácido de sódio 0.60
Fosfato dissódico 1.00
Cloreto de sódio 2.00
Piruvato de sódio 1.00
L-Triptofano 1.00
Sorbitol 1.00
Tergitol 7 0.15
Mistura cromogênica 0.43
Ágar 10.00
pH Final (a 25°C): 6.8 ± 0.2
Dissolva 26.48 gramas em 1000 mL de água destilada. Aqueça em
Banho-Maria fervente com agitação ou em vapor fluente para
dissolver o meio completamente (aproximadamente 35 minutos).
NÃO AUTOCLAVE OU SUPERAQUEÇA. Se desejar, o meio sele-
tivo pode ser preparado adicionando assepticamente 1 frasco de
Suplemento Seletivo ECC HiCrome (FD190) ao meio previamente
esterilizado e resfriado. Misture bem e distribua em placas de Petri
estéreis. O meio pode se apresentar turvo, porém isto não afeta sua
performance.
Aparência do pó: Pó creme a amarelo, homogêneo que flui
livremente.
Solidificação: Firme, comparável com ágar gel a 1.0%.
Cor e Transparência do meio preparado: amarela clara, gel trans-
parente a levemente opalescente em placas de Petri.
Reação: A solução aquosa a 2.65% (peso/volume) apresenta pH
final de 6.8 ± 0.2 a 25°C.
Condições de Armazenamento: Armazenar o pó resfriado entre 2 e
8°C. Utilize antes de expirar a data de validade.
Referências Bibliográficas:
1. Frampton E.W., Restaino L. and Blaszko N., (1988), J. Food Prot., 51:402.
2. Kilian M. and Bülow P., (1976), Acta. Pathol. Microbiol. Scand., Sect. B, 84:245.
3. LeMinor L. and Hamida F., (1962), Ann. Inst. Pasteur (Paris), 102: 267.
4. Manafi M. and Kneifel W., (1989), Zentralbl. Hyg., 189:225.
* Confirmação da coloração vermelha em torno das colônias pela adição do reagente de Kovacs (R008)
Características da cultura após incubação a 35-37°C por 18-24 horas.
O Agar HiCrome Seletivo ECC é um meio recomendado para
detecções simultâneas de E. coli e coliformes totais em
amostras de água e alimento (1,2). A mistura
cromogênica contém dois substratos cromogênicos. A enzima
β-D-glucuronidase produzida por coliformes cliva um dos
cromógenos e forma colônias salmão a vermelhas. A enzima β
β-D-lucuronidase produzida por E. coli, cliva o X-glucuronide,
e outros cromógenos (4). As colônias de E. coli terão cor azul
escura a violeta devido à clivagem de ambos cromógenos. A
adição de L-Triptofano melhora a reação indol, aumentando a
fidelidade da reação. A peptona especial, piruvato de sódio e
o sorbitol fornecem substâncias nitrogenadas, carboidratos
fermentáveis e outros nutrientes essenciais para o crescimento
dos organismos. Os fosfatos tamponam o meio. A
formulação do meio auxilia coliformes danificados a se
recuperar e a crescer rapidamente. O Tergitol inibe tanto
bactérias gram-positivas como algumas bactérias
gram-negativas não coliformes (3). A adição de suplemento
seletivo ECC (Cefsulodina) (FD190) ajuda a inibir a microflora
heterogênea presente. O meio é inoculado por ambas as
técnicas, pour plate ou pela semeadura das amostras na
superfície da placa (spread plate). A técnica de filtração por
membrana também pode ser usada. Para confirmar E. coli,
adicione uma gota do reagente de Kovac sobre as colônias
azul-escuras a violeta. A formação da coloração vermelha-
cereja indica que a reação é positiva.
Organismos Inóculo Crescimento Recuperação IndolCor da colônia
Citrobacter freundii ATCC 8090 50-100 abundante ≥50% negativosalmão a vermelho (grande)
Enterobacter aerogenes ATCC 13048 50-100 abundante ≥50% negativosalmão a vermelho
Escherichia coli ATCC 25922 50-100 bom-abundante ≥50% positivo*azul escuro a violeta
Enterococcus faecalis ATCC 29212 ≥103
Inibido 0% --
Salmonella Enteritidis ATCC 13076 50-100 bom 40-50% negativoincolor
Shigella flexneri ATCC 29508 50-100 bom 40-50% negativoazul claro a turquesa
Escherichia coli O157:H7 (NCTC 12900) 50-100 abundante ≥50% positivo*salmão a vermelho

6. M1300
AGAR HICROME COLIFORMES COM LAURIL SULFATO DE SÓDIO (SLS)
AGARHICROMECOLIFORMESCOMLAURILSULFATODESÓDIO(SLS)
Composição Princípio e Interpretação
Procedimento de Preparo
Avaliação de Resultados
Controle de qualidade
O Agar HiCrome Coliformes com Lauril Sulfato de Sódio é um ágar seletivo recomendado para detecção simultânea de Escherichia coli
e coliformes totais em amostras de água e alimentos.
Para Identificação e Diferenciação de E. coli e Coliformes totais
Ingredientes g/L
Peptona especial 3.00
Cloreto de sódio 5.00
Fosfato dipotássico 3.00
Fosfato ácido de potássio 1.70
Piruvato de sódio 1.00
L-Triptofano 1.00
Lauril sulfato de sódio 0.10
Mistura cromogênica 0.20
Ágar 12.00
pH Final (a 25°C): 6.8 ± 0.2
Dissolva 27 gramas em 1000 mL de água destilada. Ferva até
dissolver o meio completamente. Esterilize autoclavando a 1atm de
pressão (121°C) por 15 minutos. Quando se espera a presença de
um alto número de bactérias gram-positivas, adicione 5 mg/L de
novobiocina antes de autoclavar o meio.
Aparência do pó: Pó amarelo a bege, homogêneo e livre circulante.
Solidificação: Firme, comparável com Agar gel 1.2%.
Cor e Transparência do meio preparado: Incolor, gel transparente
a levemente opalescente em placas de Petri.
Reação: A solução aquosa a 2.70% (peso/volume) apresenta pH
final de 6.8 ± 0.2 a 25°C.
Condições de Armazenamento: Armazenar o pó resfriado entre 2 e
8°C. Utilize antes de expirar a data de validade.
Referências Bibliográficas:
1. Frampton E.W., Restaino L. and Blaszko N., 1988, J. Food Prot., 51:402.
2. Kilian M. and Bülow P., 1976, Acta. Pathol. Microbiol. Scand., Sect. B, 84:245.
3. LeMinor L. and Hamida F., 1962, Ann. Inst. Pasteur (Paris), 102: 267.
4. Manafi M. and Kneifel W., 1989, Zentralbl. Hyg., 189:225.
Características da cultura após de 24 horas (48 horas se necessário) a 35-37°C.
* Confirmação da coloração vermelha em torno das colônias pela adição do reagente de Kovacs (R008)
O Agar Hicrome Coliforme com Lauril Sulfato de Sódio é um
meio seletivo recomendado para detecções simultâneas de
Escherichia coli e coliformes totais em amostras de água e
alimento (4). A peptona especial e o piruvato de sódio
fornecem nutrientes essenciais de crescimento para os
organismos. Os fosfatos tamponam o meio. A formulação do
meio auxilia mesmo coliformes danificados a se recuperar e a
crescer rapidamente. O lauril sulfato de sódio inibe organismos
gram-positivos. A mistura cromogênica contém dois
substratos cromogênicos. A enzima β-galactosidase,
produzida pelos coliformes, cliva um cromógeno resultando
na coloração púrpura das colônias de coliformes. A enzima β
β-glucuronidase produzida pela E. coli, cliva X-glucuronida.
E.coli forma colônias de coloração azul escuro a violeta devido
à clivagem de ambos os cromógenos (1,2,3). A adição de
triptofano melhora a reação de indol, e assim, aumenta a
confiabilidade da reação em combinação com os dois
cromógenos. Para confirmar E. coli, adicione uma gota de
reagente de Kovac (R008) sobre as colônias azul-escura ou
violeta. A formação de coloração vermelha cereja indica reação
positiva.
Organismos Inóculo Crescimento Recuperação IndolCor da colônia
Citrobacter freundii ATCC 8090 50-100 bom-abundante ≥50% negativosalmão a vermelho
E. coli ATCC 25922 50-100 bom-abundante ≥50% positivo*azul escuro a violeta
Enterobacter cloacae ATCC 23355 50-100 bom-abundante ≥50% negativosalmão a vermelho
Enterococcus faecalis ATCC 29212 ≥103
inibido 0% --
Klebsiella pneumoniae ATCC13883 50-100 bom-abundante ≥50% negativorosa claro
Salmonella Enteritidis ATCC 13076 50-100 bom 40-50% negativoincolor
Shigella flexneri ATCC 12022 50-100 bom 40-50% negativoincolor
03

7. M1426
CALDO M – E. COLI
CALDOM–E.COLI
ComposiçãoPrincípio e Interpretação
Procedimento de Preparo
Avaliação de Resultados
Controle de qualidade
Caldo recomendado para detecção, diferenciação e quantificação de Escherichia coli e coliformes em amostras de água usando a
técnica de filtração por membrana.
Para Identificação e Diferenciação de E. coli e Coliformes totais.
Ingredientes g/L
Hidrolisado enzimático de caseína 20.00
Mistura de sais biliares 1.50
Mistura cromogênica 0.175
pH Final (a 25°C): 7.2 ± 0.2
Dissolva 21.67 gramas em 1000mL de água destilada. Ferva para
dissolver o meio completamente. NÃO AUTOCLAVE OU SUPER-
AQUEÇA. Após resfriamento, adicione assepticamente a
quantidade desejada (2 a 5mL) do caldo em uma almofada de
algodão absorvente estéril até saturação. O meio deve ser usado
dentro de 24 horas da reidratação.
Aparência do pó: Cor amarela clara a bege, homogêneo e pó livre
circulante.
Cor e Transparência do meio preparado: Cor amarela claro,
solução transparente.
Reação: A solução aquosa a 2.16% (peso/volume) apresenta pH
final de 7.2 ± 0.2 a 25°C.
Condições de Armazenamento: Armazenar o pó resfriado entre 2 e
8°C. Utilize antes de expirar a data de validade.
Referências Bibliográficas:
1. Anderson J.M. and Baird Parker A.C., (1975), J. Appl. Bact., 39:111.
2. Hansen W. and Yourassawsky E., (1984), J. clin. Microbiol. 20:1177.
Características da cultura após incubação a 37°C por 18-24 horas.
O Caldo M-E. coli é usado na detecção e diferenciação de
Escherichia coli e coliformes em amostras de água usando a
técnica de filtração por membrana. O meio está baseado no
Agar Bile Triptona usado para detecção de Escherichia coli em
alimentos (1) onde a recuperação de Escherichia coli é mais
rápida, confiável e precisa.
A amostra de água é filtrada através de membranas e então
colocada sobre uma almofada de algodão saturado com Caldo
M E-coli e incubada a 37°C em placas de Petri seladas. O meio
contém mistura cromogênica a qual auxilia na detecção de
atividade glicuronidase de Escherichia coli (2). Esta enzima
específica diferencia Escherichia coli de outros coliformes.
Células de Escherichia coli quebram a mistura cromogênica
com auxílio da glicuronidase para dar coloração azul às
colônias. Outros coliformes que não sejam Escherichia
coli tornam-se vermelhos quando reduzem TTC (cloreto de
2,3,5-trifenil tetrazolio). Desta forma, a coloração resultante
distinta permite a interpretação simples do teste sem
necessidade de confirmações posteriores. O hidrolisado
enzimático de caseína fornece os nutrientes de crescimento
essenciais para os organismos. Os sais biliares inibem
organismos gram-positivos.
Organismos Crescimento Cor da colônia
Escherichia coli ATCC 25922 abundante Verde azulado
Enterobacter aerogenes ATCC 13048 abundante vermelha
-Staphylococcus aureus ATCC 25923 Inibido
Inóculo
50-100
50-100
3
≥10
04

8. M1569AGAR HICROME M-LAURIL SULFATO
AGARHICROMEM-LAURILSULFATO
Composição Princípio e Interpretação
Procedimento de Preparo
Avaliação de Resultados
Controle de qualidade
Recomendado para diferenciação e quantificação de Escherichia coli e outros coliformes por única técnica de filtração por membrana.
Para Identificação e Diferenciação de E. coli e Coliformes totais.
Ingredientes g/L
Digesto péptico de tecido animal 40.00
Extrato de levedura 6.00
Lactose 30.00
Vermelho de fenol 0.20
Lauril sulfato de sódio 1.00
Piruvato de sódio 0.50
Cromógeno 0.20
Agar 10.00
pH Final (a 25°C): 7.4 ± 0.2
Dissolva 87.9 gramas em 1000mL de água destilada. Aqueça até
ferver para dissolver o meio completamente. Mexa bem. Esterilize
autoclavando a 15lbs de pressão (121°C) por 15 minutos. Resfrie o
meio a 50°C e distribua em placas de Petri estéreis.
Aparência do pó: Pó amarelo claro a rosa, homogêneo e livre
circulante.
Solidificação: Firme, comparável com Agar gel 1.0%.
Cor e Transparência do meio preparado: Cor vermelha, gel
transparente a levemente opalescente em placas de Petri.
Reação: A solução aquosa a 8.8% (peso/volume) apresenta pH
final de 7.4 ± 0.2 a 25°C.
Condições de Armazenamento: Armazenar o pó resfriado entre 2 e
8ºC. Utilize antes de expirar a data de validade.
Referências Bibliográficas:
1. Mallman and Darby, 1941, Am. J. Public Health, 31:127.
2. Sartory D.P. and Howard L, 1992, Lett Appl. Microbiol. 15:273-276.
3. Methods for Examination of Waters and Associated Materials, Environment Agency,
1998, Standing Committee of Analysts.
Características da cultura após incubação a 35-37°C por 24 horas.
O Agar Hicrome M-Lauril Sulfato é uma modificação do Caldo
Lauril Triptose, formulado por Mallman e Darby (1). Este meio
cromogênico é recomendado para a identificação presuntiva
e diferenciação de E. coli de outros coliformes por uma única
técnica de filtração por membrana (2,3). A incorporação do
cromógeno X-glucuronida e do corante vermelho de fenol
favorecem a identificação de E. coli e de outros coliformes
baseado na coloração.
Digesto péptico de tecido animal e o extrato de levedura forne-
cem os nutrientes de crescimento essenciais para os
organismos. A lactose atua como uma fonte de açúcar
fermentável enquanto o lauril sulfato de sódio inibe outros
organismos que não são coliformes. A enzima β-glucuronidase
produzida por E. coli cliva X-glucuronida é detectada cor verde
para as colônias. A fermentação da lactose pelo indicador
vermelho de fenol.
Organismos Inóculo Crescimento Cor da colônia
Escherichia coli ATCC 25922 50-100 abundante verde
Klebsiella pneumoniae ATCC 13883 50-100 bom amarela, mucóide
Staphylococcus aureus ATCC 25923
50-100
inibido -
Salmonella Enteritidis ATCC 13076
≥10 3
bom rosa
05

9. M1295 / M1295I
AGAR HICROME E. coli
ComposiçãoPrincípio e Interpretação
Procedimento de Preparo
Avaliação de Resultados
Controle de qualidade
Agar HiCrome E. coli é recomendado para detecção e quantificação de Escherichia coli em amostras de alimentos sem
confirmação posterior em membrana filtrante ou pelo reagente de indol.
Para Identificação de E. coli.
M1295 M1295I
Ingredientes g/L g/L
Hidrolisado enzimático de caseína 14.00 20.00
Peptona especial 5.00 -
Mistura de sais biliares 1.50 1.50
Fosfato dissódico 1.00 -
Fosfato ácido de sódio 0.60 -
Cloreto de sódio 2.40 -
X-Glucuronida 0.075 0.075
Ágar 12.00 15.00
pH Final (a 25°C): 7.2 ± 0.2
Dissolva 36.57 gramas em 1000 mL de água destilada. Aqueça até
a fervura para dissolver completamente. Esterilize por autoclavação
sob pressão de 1atm a 121°C por 15 minutos. Resfrie a 50°C e
despeje em placa de Petri.
Aparência do pó: Pó creme a amarelo, homogêneo e livre circulante.
Solidificação: Firme, comparável com Agar gel 1.2% para M1295 ou
1.5% para M1295I.
Cor e Transparência do meio preparado: Amarelo claro, gel
transparente a levemente opalescente em placas de Petri.
Reação:A solução aquosa de 3.66% (peso/volume) tem pH final de
7.2 ± 0.2 a 25°C.
Condições de Armazenamento: Armazenar o pó resfriado entre 2 e
8°C. Utilize antes de expirar a data de validade.
Referências Bibliográficas:
1. Anderson J.M. and Baird-Parker A.C., (1975), J. Appl. Bact., 39.111.
2.Hansen W. and Yourassawsky E., (1984), J. Clin. Microbiol., 20:1117.
Características da cultura após incubação a 44°C por 18-24 horas.
O Agar HiCrome E. coli é baseado no Agar Bile Triptona para
detectar E. coli em alimentos (1) no qual a recuperação de E.
coli é mais rápida, confiável e precisa. A maioria das linhagens
de E. coli podem ser diferenciadas de outros coliformes pela
presença da enzima glucuronidase a qual é altamente
específica para E. coli (2). O agente cromogênico
X-glucuronide usado neste meio ajuda a detectar atividade
glucurodinase da E.coli. As células de E. coli absorvem
X-glucuronidase e a glucuronidase intercelular quebra a ligação
entre cromóforo e a glucuronida. O cromóforo liberado fornece
a coloração para as colônias de E. coli. O hidrolisado
enzimático de caseína e a peptona especial fornecem os
nutrientes de crescimento especiais para os organismos. A
mistura de sais biliares inibe organismos gram-positivos. O
cloreto de sódio e os fosfatos mantêm o balanço osmótico e
a ação de tamponamento respectivamente. Secar a superfície
do meio antes do uso. Dilua as amostras de alimento em 1:5
ou 1:10 com 0,1% (peso/volume) em Água Peptonada (M028)
estéril e homogeneizar em um liquidificador ou homoge-
neizador. Pipete 0.5 ml ou 1.0 ml de amostra de alimento
homogeneizada na placa e espalhe com uma alça de Drygalski
esterilizada. Incube as placas a 30°C por 4 horas e então 44°C
por 18 horas.
06
Organismos Inóculo Crescimento Recuperação Cor da colônia
Escherichia coli ATCC 25922 50-100 abundante ≥ 50% verde azulado
Salmonella Enteritidis ATCC13076 50-100 abundante ≥ 50% incolor
Staphylococcus aureus ATCC 25923 inibido 0%≥ 103
AGARHICROMEE.coli

10. M1571
AGAR HICROME M-TEC
AGARHICROMEM-TEC
Composição Princípio e Interpretação
Procedimento de Preparo
Avaliação de Resultados
Controle de qualidade
Agar recomendado pela Agência de Proteção Ambiental dos Estados Unidos (USEPA) para detecção de Escherichia coli termotolerante
em água pela técnica de filtragem por membrana.
Para Identificação de E. coli.
Ingredientes g/L
Protease Peptona 5.00
Extrato de Levedura 3.00
Lactose 10.00
Cloreto de Sódio 7.50
Fosfato dipotássico 3.30
Fosfato monopotássio 1.00
Lauril sulfato de sódio 0.20
Desoxicolato de sódio 0.10
Cromógeno 0.50
Agar 15.00
pH Final (a 25ºC): 7.3 ± 0.2
Dissolva 45.6 gramas em 1000mL de água destilada. Aqueça para
dissolver o meio completamente. Esterilizar autoclavando a 1atm
de pressão (121°C) por 15 minutos. Esfrie a 45°C e distribua em
placas de Petri.
Aparência do pó: Pó creme a amarelo, homogêneo e livre circulante.
Solidificação: Firme, comparável com um Agar gel 1.5%
Cor e Transparência do meio preparado: Cor âmbar claro, levemente
opalescente em placas de Petri.
Reação: A solução aquosa a 4.56% (peso/volume) apresenta pH final
de 7.3 ± 0.2 a 25°C.
Condições de Armazenamento: Armazenar o pó resfriado entre 2 e
8°C. Utilize antes de expirar a data de validade.
Referências Bibliográficas:
1. U.S. Environmental Protection Agency, 2002, Method 1603; Publication EPA-
821-R-02-023.
2. Dufour, Strickland e Cabelli,1981, Appl. Environ. Microbiol. 41:1152.
Características da cultura após de 22-24 horas a 44.5 ± 0.2°C.
O Agar Hicrome M-TEC é um meio cromogênico usado para
a detecção e contagem de E. coli termotolerante (TEC) em
amostras de água pela técnica de filtração por membrana
(1), desenvolvida por Dufour (2). O meio modificado contém
o cromógeno 5-bromo-6-cloro-3-indolil-β-X-Glucuronida
que é clivado pela enzima β-glucuronidase para formar ácido
glucurônico, produzido pelas cepas de E. coli. Este transmite a
cor púrpura-magenta apenas para as colônias de E. coli.
A protease peptona e o extrato de levedura fornecem os
nutrientes essenciais. A lactose é o carboidrato fermentável.
O cloreto de sódio mantém o equilíbrio osmótico. O fosfato
monopotássico e fosfato dipotássico fornecem um sistema de
tamponamento forte para controlar o pH na presença da ação
fermentativa. O lauril sulfato de sódio e o desoxicolato de sódio
tornam o meio mais seletivo inibindo bactérias gram-positivas.
07
Organismos (ATCC) Inóculo Crescimento Cor da colônia
Escherichia coli ATCC 25922 50-100 Bom a abundante Púrpura /magenta
Proteus mirabilis ATCC 25933 50-100 Bom Incolor a marrom claro
Klebsiella pneumoniae ATCC 13883 50-100 Bom Incolor a cor de canela
Enterococcus faecalis ATCC 29212 ≥103
Inibido -

11. M1340
AGAR HICROME MACCONKEY SORBITOL BASE
ComposiçãoPrincípio e Interpretação
Procedimento de Preparo
Avaliação de Resultados
Controle de qualidade
Agar HiCrome MacConkey Sorbitol é recomendado para o isolamento seletivo de Escherichia coli 0157:H7 de alimentos e ração para
animais.
Para Identificação de E. coli 0157:H7
Ingredientes g/L
Hidrolisado enzimático de caseína 17.00
Protease Peptona 3.00
Sorbitol 10.00
Mistura de sais biliares 1.50
Cloreto de sódio 5.00
Cristal Violeta 0.001
Vermelho neutro 0.03
Indicador B.C 0.10
Ágar 13.50
pH Final (a 25°C): 7.1 ± 0.2
Dissolva 25.06 gramas em 495 ml de água destilada. Ferva
gentilmente para dissolver o meio completamente. NÃO AUTO-
CLAVE. Resfrie a 50°C. Misture bem e dispense em placas de Petri
estéreis. Se desejar, pode adicionar assepticamente conteúdo
reidratado de 1 frasco de Suplemento Cefixima-Telurito (FD147)
a 495 mL de meio derretido e estéril, resfriado a 50°C, antes de
distribuir em placas de Petri.
Aparência do pó: Pó amarelo claro a roseo, homogêneo e livre
circulante.
Solidificação: Firme, comparável com Agar gel 1.35%.
Cor e Transparência do meio preparado: Cor vermelha púrpura,
transparente a ligeiramente opalescente.
Reação: A solução aquosa a 5.01% (peso/volume) apresenta pH
final de 7.1 ± 0.2 a 25°C.
Condições de Armazenamento: Armazenar o pó resfriado entre 2 e
8°C. Utilize antes de expirar a data de validade.
Referências Bibliográficas:
1. Rappaport F. and Henigh E., 1952, J. Clin. Path., 5:361.
2. March S.B. and Ratnam S., 1986: J. Clin. Microbiol. 23, 869-872.
3. Karmali M.A., Petric M., Lim C., et al, 1985, J. Infect. Dis., 151-775.
4. Hansen W. and Yourassawsky E., 1984, J. Clin. Microbiol., 20:1177.
5. Thompson et al. 1990. J. Clin. Microbiol. 29, 2165-2168.
6. Zadik P.M., Chapman P.A. and Siddons C.A., 1993, J. Med. Microbiol., 39, 155-158.
Características da cultura após incubação a 35-37°C por 18-24 horas (48 horas se necessário).
O Agar MacConkey Sorbitol está baseado na formulação descrita por
Rappaport e Henigh (1). O meio contém sorbitol ao invés de lactose
e é recomendado para detecção de cepas enteropatogênicas de
Escherichia coli 0157:H7 a qual fermenta lactose mas não fermenta
sorbitol (2) e então produzem colônias incolores. Cepas de Eschericia
coli que fermentam o sorbitol produzem colônias rosa avermelhadas.
A cor vermelha é devido a produção de ácido a partir do sorbitol,
absorção de vermelho neutro e a subseqüente mudança de cor do
corante quando o pH do meio cai abaixo de 6.8. A Escherichia coli
O157:H7 tem sido reconhecida como causadora de colite hemorrágica
(3). March e Ratnam (2) relataram que a detecção de Escherichia coli
O157:H7 teve uma sensibilidade de 100% e especificidade de 85% no
Agar MacConkey Sorbitol e eles recomendaram este meio como meio
confiável de triagem de Escherichia coli 0157:H7. O indicador B.C. é
adicionado para detectar a presença de enzima β-D-glucuronidase a
qual é específica de Escherichia coli (4). Cepas de Escherichia coli que
possuem β-D-glucurodinase aparecem como colônias de coloração
verde azulada no meio. Cepas de E. coli fermentadoras de sorbitol com
atividade de β-D-glucuronidase aparecem no meio na cor azul púrpura.
Cepas enteropatogênicas de E. coli O157:H7 não possuem atividade de
β-D-glucuronidase (5) e não fermentam o sorbitol, produzindo portanto
colônias incolores. O hidrolisado enzimático de caseína e a protease
peptona fornecem compostos de carbono, nitrogenados e outros
nutrientes de crescimento essenciais. A maioria dos organismos
gram-positivos é inibida pelo cristal Violeta e sais biliares. O cloreto de
sódio mantém o equilíbrio osmótico.
A adição de Suplemento Cefixima-Telurito (FD147) torna o meio
seletivo (6). A adição de telurito de potássio torna o meio seletivo, o
telurito de potássio seleciona os sorogrup O157 de outro sorogrupo e
inibe espécies Aeromonas e espécies Providecia. A cefixima inibe espé-
cies de Proteus. Espécies de Pseudomonas, se presentes, produzem
colônias incolores no meio. O teste de confirmação de oxidase pode ser
realizado com colônias suspeitas e os resultados devem ser observados
dentro de 5-10 segundos.
08
Organismos Inóculo Crescimento Recuperação OxidaseCor da colônia
E. coli 0157:H7 (NCTC 12900) 50-100 bom a abundante ≥ 50% negativaincolor
(sem adição do suplemento FD147)
E. coli ATCC 25922 50-100 bom 40-50% negativaazul esverdeado
P. aeruginosa ATCC 27853 50-100
50-100
tênue a bom 30-40% positiva - coloração azul púrpura
forte dentro de 10 segundos
incolor
K. pneumoniae ATCC 13883 bom 40-50% negativarosa avermelhado
AGARHICROMEMACCONKEYSORBITOLBASE

12. M1574AGAR HICROME EC O157:H7
AGARHICROMEECO157:H7
Composição Princípio e Interpretação
Procedimento de Preparo
Avaliação de Resultados
Controle de qualidade
Meio cromogênico usado para o isolamento e diferenciação de E. coli O157 de alimentos e amostras ambientais.
Para Identificação de E. coli 0157:H7
Ingredientes g/L
Hidrolisado enzimático caseína 8.00
Sorbitol 7.00
Mistura de sais biliares 1.50
Lauril sulfato de sódio 0.10
Mistura cromogênica 0.25
Agar 12.00
pH Final (a 25°C): 6.8 ± 0.2
Dissolva 28.85 gramas em 1000mL de água destilada. Aqueça até
a fervura para dissolver o meio completamente. NÃO AUTOCLAVE.
Resfrie a 50°C e distribua em placas de Petri. Esse meio pode se
tornar mais seletivo com a adição asséptica de 0.25mL da solução
telurito de potássio 1% (FD052) a 1000mL de meio derretido e
resfriado (45°C).
Aparência do pó: Cor creme a amarelo, homogêneo e pó livre
circulante.
Solidificação: Firme, comparável com Agar gel a 1.2%.
Cor e Transparência do meio preparado: Cor âmbar claro,
transparente a levemente opalescente em placas de Petri.
Reação: A solução aquosa a 2.88% (peso/volume) apresenta pH
final de 6.8 ± 0.2 a 25°C.
Condições de Armazenamento: Armazenar o pó resfriado entre 2 e
8°C. Utilize antes de expirar a data de validade.
Referências Bibliográficas:
1. Downes F.P. and Ito K., (ED.), 2001, Compendium of Microbiological Examination of
Foods, 4th Ed., American Health Association, Washington, D.C.
2. Rappaport F. and Henigh E. (1952), J. Clin. Path. 5:361.
Características da cultura após 18-24 horas a 35-37°C.
Escherichia coli O157:H7 pertence ao grupo de E. coli
enterohemorrágicas (EHEC) e predomina como patógeno de
alimentos. E. coli O157:H7 foi inicialmente reconhecida como
um patógeno humano em 1982 quando dois surtos de colite
hemorrágica foram associados com o consumo de carne
moída bovina mal cozida contaminada com este organismo
(1).
O Agar HiCrome EC O157:H7 é um meio cromogênico
recomendado para o isolamento e a diferenciação de E. coli
O157:H7 de alimentos e amostras de ambiente. Este meio está
baseado na formulação descrita por Rappaport e Henigh (2).
O meio contém sorbitol e uma mistura cromogênica ao invés
de lactose e um corante indicador respectivamente, como no
meio convencional. O substrato cromogênico é especifico e
seletivamente clivado por Escherichia coli 0157:H7 resultando
em uma cor púrpura escura a magenta. Escherichia coli forma
colônias rosa claro a lilás.
Hidrolisado enzimática de caseína fornece nutrientes de
carbono, nitrogenados e de crescimento. O cloreto de sódio
mantém o equilíbrio osmótico. A mistura de sais biliares e o
lauril sulfato de sódio inibem organismos gram-positivos.
Telurito de potássio seleciona os sorogrupos e inibe
Aeromonas spp e Providência spp.
09
Organismos (ATCC) Inóculo (UFC) Crescimento Recuperação Cor da colônia
Escherichia coli ATCC 25922 50-100 Abundante ≥ 50% Rosa claro a lilás
Escherichia coli 0157: H7 (NCTC 12900) 50-100 Abundante ≥ 50% Púrpura escuro a magenta
Klebsiella pneumonia (13883) 50-100 Abundante ≥ 50% Azul, mucóide
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Abundante ≥ 50% Incolor
Staphylococcus aureus ATCC 25923
50-100
Inibido 0% -Salmonella Enteritidis ATCC 3076
50-100 Abundante ≥ 50% Azul claro esverdeado
Bacillus subtilis ATCC 6633 Inibido 0% -
3
≥10
3
≥10

13. Para Identificação de E. coli 0157:H7
Ingredientes g/L
Hidrolisada enzimático de caseína 8.00
Sorbitol 7.00
Mistura de sais biliares 1.50
Lauril sulfato de sódio 0.10
Mistura cromogênica 0.25
Agar 15.00
pH Final (a 25°C): 6.8 ± 0.2
Dissolva 31.85 gramas em 990 mL de água destilada. Ferva para
dissolver o meio completamente. NÃO AUTOCLAVE. Esfrie a 50°C.
Adicione assepticamente o conteúdo desidratado de 1 frasco de
Suplemento Seletivo HiCrome EC 0157:H7 (FD187). Mexa bem e
dispense em placas de Petri.
Aparência do pó: Pó de cor creme a amarelo, homogêneo e livre
circulante.
Solidificação: Firme, comparável com um gel de agarose a 1.5%
Cor e Transparência do meio preparado: Cor âmbar claro,
transparente a levemente opalescente em placas de Petri.
Reação:A solução aquosa a 3.18% apresenta pH final de 6.8 ± 0.2
a 25°C.
Condições de Armazenamento: Armazenar o pó resfriado entre 2 e
8°C. Utilize antes de expirar a data de validade.
Referências Bibliográficas:
1. Rappaport F. and Henigh E. (1952), J. Clin. Path., 5:361.
2. Zadik P.M., Cahpman P.A. and Siddons C.A. (1993), J. Med. Microbiol., 39, 155-158.
3. Smith and Scottland, (1988), J. Med. Microbiol., 26:77-85.
Características da cultura após adição do suplemento FD187, incubação a 35-37°C por 18-24 horas.
Amostras de E. coli enterohemorrágica são chamadas de E.
coli produtotras de verotoxina (VTEC/EHEC). Embora muitos
sorotipos diferentes de E.coli são conhecidos por produzir
verotoxina (3), até o momento os sorotipos O157:H7 e O157:H
são os tipos comuns que causam infecções em humanos.
Cepas de O157:H7 VTEC apresentam várias características
bioquímicas pouco usuais e são explorados em métodos para
sua identificação laboratorial. Eles pertencem à minoria das
E.coli que são β-glucoronidase negativas e não fermentam o
sorbitol ou ramnose em 24 horas. Elas podem ser isoladas de
amostras fecais após semeadura em meios contendo
D-sorbitol ao invés de lactose.
O Agar HiCrome EC 0157:H7 baseia-se na formulação descrita
por Rappaport e Henigh (1). O meio contém sorbitol e mistura
cromogênica ao invés de lactose e corante indicador,
respectivamente. O substrato cromogênico é especifica e
seletivamente clivado por Escherichia coli 0157:H7 resultando
em uma cor púrpura escura a magenta. E. coli forma colônias
rosa claro a lilás.
O hidrolisado enzimático de caseína fornece os nutrientes de
carbono, nitrogenados e nutrientes de crescimento. O cloreto
de sódio mantém o equilíbrio osmótico. A adição de
Suplemento Seletivo HiCrome EC 0157:H7 (FD187) torna o
meio seletivo (2). O telurito de potássio inibe espécies de
Aeromonas spp e Providencia spp. A novobiocina inibe
bactérias gem-positivas. O lauril sulfato de sódio ajuda a inibir
a microbiota gram-positiva.
M1575 AGAR HICROME SELETIVO EC 0157:H7 BASE
ComposiçãoPrincípio e Interpretação
Procedimento de Preparo
Avaliação de Resultados
Controle de qualidade
Recomendado no isolamento seletivo e fácil detecção de Escherichia coli 0157:H7 de amostras de alimentos.
AGARHICROMESELETIVOEC0157:H7BASE
10
Organismos (ATCC) Inóculo (UFC) Crescimento Cor da colônia
Escherichia coli (25922) 50-100 Nenhum a pobre Rosa claro a lilás
Escherichia coli 0157: H7 (NCTC 12900) 50-100
50-100
Abundante Púrpura escuro a magenta
Klebsiella pneumonia (13883) Inibido
Pseudomonas aeruginosa (27853) Moderado a bom
Recuperação
Incolor
3
≥10
≥ 10%
≥ 50%
0%
30-40%

14. Para Identificação de E. coli 0157:H7
Ingredientes g/L
Hidrolisado Enzimático de Caseína 10.00
Sorbitol 10.00
Mistura de Sais Biliares 1.50
Mistura Cromogênica 1.30
pH Final (a 25°C): 7.1 ± 0.2
Dissolva 11.40 gramas em 500mL de água destilada. Ferva para
dissolver o meio completamente. NÃO AUTOCLAVE. Para
isolamento seletivo da Escherichia coli 0157:H7 adicione
assepticamente conteúdo de 1 frasco de Suplemento Seletivo
HiCrome EC 0157:H7 I (FD230) a 495mL de meio. Mexa bem e
dispense em tubos de ensaio estéreis.
Aparência do pó: Pó amarelo claro, homogêneo e livre circulante.
Cor e Transparência do meio preparado: Cor amarela clara,
solução clara sem nenhum precipitado.
Reação: A solução aquosa a 2.28% (peso/volume) apresenta pH
final de 7.1 ± 0.2 a 25°C.
Condições de Armazenamento: Armazenar o pó resfriado entre 2 e
8°C. Utilize antes de expirar a data de validade.
Referências Bibliográficas:
1. March S.B and Ratnam. S. 1986. J. Clin. Microbiol. 23:869-872.
2. Thompson J.S., Hodge, D. S., BOREZYK, A. A. 1990. J. Clin. Microbiol. 28, 2165-2168.
Características da cultura com adição do suplemento seletivo HiCrome O157:H7 (FD230), incubação a 35-37°C por 18-24 horas.
* Anteriormente denominado Enterobacter sakazakii.
** pode apresentar leve precipitado no crescimento.
March e Ratnam (1) reportaram a incapacidade da E. coli
O157:H7 em fermentar o sorbitol enquanto desenvolvia o Meio
MacConkey Sorbitol. Subseqüentemente Thomson et al. (2)
observaram a ausência da atividade β-glucoronidase em E.coli
0157:H7 de uma variedade de amostras pela cultura direta.
O meio contém hidrolisado enzimático de caseína a qual
fornece nitrogênio, compostos carbônicos e outros nutrientes
de crescimento essenciais. O sorbitol é um açúcar fermentável,
a mistura de sais biliares inibe a maioria dos organismos
gram-positivos. A adição de telurito (FD230) torna o meio mais
específico e seletivo. O desenvolvimento da coloração azulada
pela E. coli e pela Klebsiella no meio deve-se às enzimas
β-D-galactosidase e β-glucoronidase as quais clivam o
substrato cromogênico na mistura cromogênica. A cepa E. coli
0157:H7 fornece uma coloração púrpura ao meio na ausência
de β-glucoronidase e incapacidade de fermentar o sorbitol.
M1598
CALDO HICROME ENRIQUECIMENTO BASE PARA EC 0157: H7
CALDOHICROMEENRIQUECIMENTOBASEPARAEC0157:H7
Composição Princípio e Interpretação
Procedimento de Preparo
Avaliação de Resultados
Controle de qualidade
Caldo recomendado para isolamento e diferenciação seletiva de EC O157:H7 de alimentos e amostras ambientais pelo método
cromogênico.
11
Organismos (ATCC) Inóculo (UFC) Crescimento Coloração do meio
Escherichia coli ATCC 25922 50-100 Bom a Abundante **Azul
Escherichia coli 0157:H7 (NCTC 12900) 50-100 Bom a Abundante **Púrpura
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Inibido -
*Cronobacter sakazakii (12868) Bom a Abundante **Branco
Klebsiella pneumoniae ATCC 13883
50-100
Bom a Abundante **Verde azulado
Staphylococcus aureus ATCC 25923
50-100
50-100
50-100
Inibido -
Salmonella Enteritidis ATCC 13076 Bom a Abundante **Verde claro
Crescimento
(após adição do FD230) (após adição do FD230)
Coloração do meio
Inibido -
Bom a Abundante **Púrpura
Inibido -
Leve a nenhum **Incolor
Bom **Verde azulado
Inibido -
- **Verde claro
Shigella flexneri ATCC 12022 Bom Incolor Inibido -
3
≥10
3
≥10

15. M1505
AGAR HICROME SELETIVO UTI
ComposiçãoPrincípio e Interpretação
Procedimento de Preparo
Avaliação de Resultados
Controle de qualidade
Agar HiCrome Seletivo UTI é um meio cromogênico diferencial para identificação, diferenciação e confirmação de bactérias entéricas a partir de
amostras de urina, que contém grande número de espécies de Proteus bem como outros organismos gram-positivos potencialmente patogênicos.
Para Identificação e Diferenciação de organismos causadores de UTI
Ingredientes g/L
Digesto péptico de tecido animal 18.00
Hidrolisado enzimático de caseína 4.00
Extrato de carne 6.00
Sais biliares 1.50
Mistura cromogênica 12.44
Agar 15.00
pH Final (a 25°C): 7.2 ± 0.2
Dissolva 56.94 gramas em 1000mL de água destilada. Aqueça
até a fervura para dissolver o meio completamente. Esterilizar
autoclavando a 1atm de pressão (121°C) por 15 minutos. Esfrie a
45-50°C e distribua em placas de Petri.
Aparência do pó: Pó amarelo claro, homogêneo e livre circulante.
Solidificação: Firme, comparável com um Agar gel 1.5%
Cor e Transparência do meio preparado: Cor âmbar claro, gel
transparente a levemente opalescente em placas de Petri.
Reação: A solução aquosa a 5.69% apresenta pH final de 7.2 ± 0.2
a 25°C.
Condições de Armazenamento: Armazenar o pó resfriado entre 2 e
8°C. Utilize antes de expirar a data de validade.
Referências Bibliográficas:
1. Pezzlo M, 1998, Clin Microbiol Rev., 1:268-280
2. Wikie M.E., Almond M.K. and Marsh F.P., 1992, British Medical Journal, 305:1137-1141
3. Friedman M.P. et al., 1991, J Clin Microbiol, 29:2385-2389
4. Murray P., Traynor P. and Ponte C., J Clin Microbiol, 30:1600-1601
5. Soriano F. and Ponte C., 1992, J Clin Microbio, 30:3033-3034.
6. Merlino et al., 1995, Abstr. Austr. Microbiol., 16(4): 17-3.
Características da cultura após incubação a 35-37°C por 24 horas.
* Podem ser observados pigmentos esverdeados. ** Adicionar 1-2 gotas do reativo sobre as colônias.
O Agar Hicrome Seletivo UTI foi formulado baseado no trabalho
executado por Pezzlo (1), Wilkie et al. (2), Friedman et al. (3), Murray et
al. (4), Soriano e Ponte (5) e Merlino et al. (6). Este meio é uma
modificação do Agar Hicrome UTI (M1353), o qual pode ser usado no
lugar do Agar MacConkey (M081) para o isolamento e identificação de
vários microrganismos. O meio facilita e acelera a identificação de
algumas espécies de bactérias gram-negativas e bactérias
gram-positivas com base nas cores diferentes das colônias produzidas
pela reação de enzimas específicas de gêneros ou espécies com dois
substratos cromogênicos.
Enzimas produzidas pelas espécies de Enterococcus, Escherichia coli e
coliformes clivam os substratos cromogênicos incorporados no meio.
A presença de uma fonte rica em fenilalanina e triptofano proveniente
de digesto péptico de tecido animal e hidrolisado enzimático de caseína
fornecem uma indicação da atividade da triptofano deaminase, revelada
com o Reagente TDA (R036) indicando a presença de espécies de Pro-
teus, Morganella e Providencia, que aparecem na cor marrom. Um sub-
strato cromogênico é clivado pela β-glucosidase presente em Entero-
coccus resultando na formação das colônias azuis. A Escherichia coli
produz colônias rosa-avermelhada devido à enzima β-D-Galactosidase,
a qual cliva o substrato cromogênico. A confirmação posterior de Esch-
erichia coli pode ser feita pelo teste de indol usando o Reagente DMACA
(R035). Além disso, algumas cepas de Enterobacter cloacae desprovidas
de β-Galactosidase mostram colônias rosa indistinguível de Escherichia
coli. O reagente DMACA para teste de indol (deve ser realizado em papel
filtro) distingue entre Escherichia coli e Enterobacter, e também entre
Proteus mirabilis e outras espécies. Os coliformes produzem colônias
púrpura devido à clivagem de ambos os substratos cromogênicos.
A digestão péptica de tecido animal, extrato de carne e o hidrolisado
enzimático de caseína fornecem os compostos nitrogenados, compostos
de carbono e outros nutrientes essenciais de crescimento. O meio torna-
se mais seletivo devido à presença de sais biliares que inibem bactérias
gram-positivas.
12
AGARHICROMESELETIVOUTI
Organismos Inóculo (UFC) Crescimento Recuperação Triptofano desaminase
(TDA)**Cor da colônia
Escherichia coli ATCC 25922 50-100 Abundante ≥ 50% NegativaRosa-avermelhada
Enterococcus faecalis ATCC 29212 50-100 Moderado 20-30% NegativaAzul (pequenas)
Klebsiella pneumoniae ATCC13883 50-100 Abundante ≥ 50% NegativaAzul a púrpura,mucoides
Proteus mirabilis ATCC 12453 Abundante ≥ 50% Positiva - marromMarrom claro
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
50-100
Abundante ≥ 50% NegativaIncolores*
Staphylococcus aureus ATCC 25923
50-100
Inibido 0% --
DMACA
(em papel filtro)
Positiva - azul púrpura em
torno do crescimento
Negativa
Negativa
Negativa
Negativa
-3
≥10

16. * Podem ser observados pigmentos esverdeados.
M1418
AGAR HICROME UTI MODIFICADO
AGARHICROMEUTIMODIFICADO
Composição Princípio e Interpretação
Procedimento de Preparo
Avaliação de Resultados
Controle de qualidade
O Agar HiCrome UTI Modificado é um meio cromogênico diferencial para a identificação, diferenciação e confirmação de bacterias entéricas de
amostras tais como urina que podem conter um grande número de Proteus bem como espécies de gram-positivos potencialmente patogênicas.
Para Identificação e Diferenciação de organismos causadores de UTI.
Ingredientes g/L
Digesto péptico de tecido animal 18.00
Hidrolisado enzimático de caseína 4.00
Extrato de carne 6.00
Mistura cromogênica 12.44
Ágar 15.00
pH Final (a 25°C): 7.2 ± 0.2
Dissolva 55.44 gramas em 1000 mL de água destilada. Aqueça
até a fervura para dissolver o meio completamente. Esterilizar
autoclavando a 15 lbs de pressão a 121°C por 15 minutos. Esfrie a
50°C e distribua em placas de Petri.
Aparência do pó: Pó de cor creme a amarelo, homogêneo e livre circulante.
Solidificação: Firme, comparável com Agar gel 1.5%
Cor e Transparência do meio preparado: Cor âmbar claro, transparente a levemente opalescente em placas de Petri.
Reação: A solução aquosa a 5.54% (peso/volume) apresenta pH 7.2 a 25°C.
Condições de Armazenamento: Armazenar o pó em temperatura refrigerada (abaixo de 8°C) e o meio preparado de 2 a 8°C. Utilize antes
de expirar a data de validade.
Referências Bibliográficas:
1. Pezzlo M., 1998, Clin. Microbiol. Rev., 1:268-280
2. Wilkie M.E., Almond M.K. and Marsh F.P., (1992), British Medical Journal, 305:1137-1141
3. Friedman M.P. et al. (1991), J Clin Microbiol, 29:2385-2389
4. Murray P., Traynor P. and Ponte C., J Clin Microbiol, 30:1600-1601
5. Soriano F. and Ponte C., (1992), Journal of clinical Microbiology, 30:3033-3034.
6. Merlino et al., 1995, Abstr. Austr. Microbiol. 16 (4):17-3.
Características da cultura após incubação a 35-37°C por 24 horas.
O Agar HiCrome UTI Modificado é formulado com base no
trabalho realizado por Pezzlo (1) Wilkie et al (2), Friedman et
al (3), Murray et al (4), Soriano e Ponte (5) e Merlino et al (6).
Esse meio é uma modificação do Agar HiCrome UTI (M1353), o
qual pode ser usado substituindo o Ágar MacConkey para isola-
mento e confirmação de vários microorganismos. O meio facilita
e acelera a identificação de algumas bactérias gram-negativas e
gram-positivas com base no contraste entre as diferentes cores
das colônias, produzido por reações enzimáticas específicas
para gênero ou espécies com dois substratos cromatogênicos.
Enzimas produzidas por Enterococcus spp, Escherichia coli e
coliformes clivam os substratos cromogênicos incorporados
no meio. A presença de fonte rica em fenilalanina e triptofano,
provenientes do digesto péptico de tecido animal e hidrolisado
enzimático de caseína, fornecem um indicador de atividade de
triptofano desaminase, revelada com o indicador (R036), indi-
cando a presenca de Proteus spp, Morganella sp e Providencia
spp, as quais aparecem marrons. E. coli produzem colônias
róseas devido a enzima β-D-galactosidade que cliva o outro
substrato cromogenico. Confirmacao posterior de E. coli pode
ser feita realizando o teste de indol utilizando o reagente DMACA
(R035). Também, algumas cepas de Enterobacter cloacae,
desprovidas de β-galactosidade apresentam colônias rosas
indistingüível de Escherichia coli. O reagente DMACA (R035)
para o teste de indol (feito em filtro de papel) destingue a
Escherichia coli de Enterobactee e também entre Proteus
mirabilis e outras espécies. Coliformes produzem colônias púr-
puras devido a clivagem de ambos os substratos cromogenicos.
A digestão peptídica de tecido animal, o extrato de carne e o
hidrolizado enzimático de caseina fornecem nitrogênio, carbono
e outros nutrientes de crescimento essenciais.
Organismos Inóculo (UFC) Crescimento Recuperação Triptofano desaminase
(TDA)**Cor da colônia
Enterococcus faecalis ATCC 29212 50-100 Abundante ≥ 70% NegativaAzul esverdeada pequena
Escherichia coli ATCC 25922 50-100 Abundante ≥ 70% NegativaPurpura a magenta
Klebsiella pneumoniae ATCC13883 50-100 Abundante ≥ 70% NegativaAzul a púrpura - mucóide
Proteus mirabilis ATCC 12453 Abundante ≥ 70% Positiva - marromMarrom claro
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
50-100
Abundante ≥ 70% NegativaIncolor*
Staphylococcus aureus ATCC 25923
50-100
50-100 Abundante ≥ 70% NegativaAmarelo dourado
DMACA
(em papel filtro)
Positiva - azul púrpura em
torno do crescimento
Negativa
Negativa
Negativa
Negativa
Negativa
13

17. M1353
AGAR HICROME UTI
ComposiçãoPrincípio e Interpretação
Procedimento de Preparo
Avaliação de Resultados
Controle de qualidade
O Agar HiCrome UTI é um meio diferencial recomendado para a identificação presuntiva de microorganismos que causam infecção
urinária.
Para Identificação e Diferenciação de organismos causadores de UTI.
Ingredientes g/L
Peptona especial 15.00
Mistura cromogênica 2.45
Agar 15.00
pH Final (a 25°C): 6.8 ± 0.2
Dissolva 32.45 gramas em 1000 mL de água destilada. Aqueça o
meio gentilmente até a fervura para dissolver o meio
completamente. Esterilizar autoclavando a 1atm de pressão a 121°C
por 15 minutos. Esfrie a 50°C, misture bem e distribua em placas
de Petri.
Aparência do pó: Pó creme a amarelo, homogêneo e livre circulante.
Solidificação: Firme, comparável com Agar gel 1.5%
Cor e Transparência do meio preparado: Cor âmbar claro, claro a
levemente opalescente em placas de Petri.
Reação: A solução aquosa a 3.24% (peso/volume) apresenta pH 6.8
± 0.2 a 25°C.
Condições de Armazenamento: Armazenar o pó e o meio preparado
entre 2 a 8°C. Utilize antes de expirar a data de validade.
Referências Bibliográficas:
1. Collee J.G., Fraser A.G., Marmion B. P., Simmons A., (Eds.), Mackie and McCartney,
Practical Medical Microbiology, 1996, 14th Edition, Churchill Livingstone. / 2. Pezzlo M.,
1998, Clin. Microbiol. Rev., 1:268-280 / 3. Wilkie M.E., Almond M.K. and Marsh F.P.,
1992, British Medical Journal, 305:1137-1141 / 4. Friedman M.P. et al. (1991), J. Clin. Mi-
crobiol., 29:2385-2389 / 5. Murray P., Traynor P. and Hopson D., 1992, J. Clin. Microbiol.,
30:1600-1601 / 6. Soriano F. and Ponte C., (1992), J. Clin. Microbiol., 30:3033-3034 /
7. Merlino et al., 1995, Abstr. Austr. Microbiol. 16 (4):17-3.
Características da cultura após incubação a 35-37°C por 24 horas.
*pode ser observado pigmento esverdeado
As infecções do trato urinário são infecções bacterianas que afetam o
trato urinário. Os sintomas comuns são a urgência e freqüência miccio-
nal, associadas a dor e desconforto. A infecção mais comum é a cistite,
causada por infecção da bexiga por bactérias uropatogênicas, das quais
a mais freqüente é Escherichia coli, mas algumas vezes Staphylococcus
saprophyticus ou especialmente em infecções adquiridas em hospitais,
Klebsiella, Proteus mirabilis, outros coliformes, Pseudomonas aeruginosa
ou Enterococcus faecalis podem ocorrer (1). Este meio é formulado com
base no trabalho realizado por Pezzlo (2) Wilkie et al (3), Friedman et al
(4), Murray et al (5), Soriano e Ponte (6) e Merlino et al (7). Esse meio
é recomendado para a detecção de patógenos do trato urinários, onde
tem ampla aplicação como um ágar nutriente geral para o isolamento de
vários microrganismos. Isso facilita e ascelera a identificação de algumas
bactérias gram-negativas e gram-positivas com base no contraste da
diferença de cores das colônias, produzidas por reações de gênero ou
enzimas espécie-específicas com dois substratos cromogênicos. Os
substratos cromogênicos são especificamente clivados por enzimas
produzidas por espécies de Enterococcus, Escherichia coli e coliformes. A
presença de aminoácidos como a fenilalanina e o triptofano das peptonas
ajudam na detecção da atividade de triptofano desaminase, indicando a
presença de espécies de Proteus, Morganella e Providencia.
Um substrato cromogênico é rompido pela β-glucosidase presente em
Enterococcus resultam na formação de colônias azuis. Encherichia coli
produz colônias rosa devido à enzima β-D-galactosidase que cliva o outro
substrato cromatogênico. A confirmação adicional de Escherichia coli
pode ser feita realizando o teste de indol. Coliformes produzem colônias
de cor púrpura pela clivagem de ambos os substratos cromogênicos.
Colônias de espécies de Proteus, Morganella e Providência aparecem em
cor marron devido à atividade de triptofano desaminase. Peptona especial
fornece compostos nitrogenadas, compostos de carbono e outros
nutrientes essenciais de crescimento. O meio pode tornar-se seletivo pela
suplementação com antimicrobianos para a detecção de microroganis-
mos associados com infecções hospitalares.
AGARHICROMEUTI
Organismos Inóculo (UFC) Crescimento Recuperação Cor da colônia
Enterococcus faecalis ATCC 29212 50-100 Abundante ≥70% Azul, pequena
Escherichia coli ATCC 25922 50-100 Abundante ≥70% Rosa-púrpura
Klebsiella pneumoniae ATCC13883 50-100
50-100
Abundante ≥70% Azul a púrpura - mucóide
Proteus mirabilis ATCC 12453 Abundante ≥70% Marrom claro
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 50-100 Abundante ≥70% Transparente*
Staphylococcus aureus ATCC 25923 50-100 Abundante ≥70% Amarelo dourado
14

18. M1078
AGAR SALMONELLA DIFERENCIAL (Meio RajHans)
AGARSALMONELLADIFERENCIAL(MeioRajHans)
Composição Princípio e Interpretação
Procedimento de Preparo
Avaliação de Resultados
Controle de qualidade
Agar Salmonella Diferencial é recomendado para identificação e diferenciação de espécies de Salmonella de outras espécies do membro
Enterobacteriaceae, especialmente espécies de Proteus.
Para Identificação e Diferenciação de espécies de Salmonella
Ingredientes g/L
Parte A
Peptona, especial 8.00
Extrato de Levedura 2.00
Desoxicolato de Sódio 1.00
Indicador B.C. 2.00
Ágar 12.00
Parte B
Propileno glicol 10.00
pH Final (a 25°C): 7.3 ± 0.2
Dissolva 10 gramas de fluído da parte B em 1000 mL de água
destilada. Adicione 25 gramas da parte A (M1078). Misture bem
e ferva até dissolver o meio completamente. NÃO AUTOCLAVE.
Esfrie a 45-50°C. Misture bem antes de distribua em placas de Petri
esterilizadas.
Aparência do pó: Parte A: Pó amarelo claro a rosa claro,
homogêneo que flui livremente. Parte B: Solução incolor viscosa.
Solidificação: Gel firme, comparável com Agar gel a 1.2 %.
Cor e Transparência do meio preparado: Cor laranja clara, gel
transparente a levemente opalescente em placas de Petri.
Reação: A reação da solução aquosa a 2.5% (peso/volume) da
Parte A (M1078) apresenta pH final de 7.3 ± 0.2 a 25°C.
Condições de Armazenamento: Armazenar o pó entre 2 e 8°C , em
frasco bem fechado . Utilize antes de expirar a data de validade.
Referências Bibliográficas:
1. Rambach A., (1990), Environ. Microbiol., 56:301.
2. Eaton A. D., Clesceri L. S., Rice E. W. and Greenberg A. W., (Eds), (2005), Standard
Methods for the Examination of Water and Wastewater, 21st ed., APHA, Washington DC.
3. Greenwald, R., Henderson R. W. and Yappaw S., (1991), J. Clin. Microbiol., 29:2354.
4. Kilian M. and Bülow P., (1979), Acta. Pathol. Microbiol. Scand., Sect. B, 87:271.
Característica da cultura após incubação a 35-37°C por 24-48 horas
O meio Agar Salmonella Diferencial é uma pequena
modificação da formulação original de Rambach (1) usada
para diferenciação de espécies de Salmonella de espécies de
Proteus e outras bactérias entéricas. A produção de ácido a
partir do propileno glicol é uma nova característica de espécies
de Salmonella e é utilizada neste meio. Muito meios tais como
Agar SS, Agar XLD são recomendados para a identificação
e diferenciação de espécies de Salmonella (2) são basea-
dos na fermentação da lactose e na produção de sulfeto de
hidrogênio. A peptona especial e extrato de levedura pro-
movem o crescimento abundante de bactérias, enquanto que
o desoxicolato de sódio inibe os organismos gram-positivos
tornando o meio seletivo para microorganismos entéricos. O
indicador BC torna se rosa na presença de ácido produzido
pelo propileno glicol. A habilidade de fermentação da lactose
é determinada pelo uso de um indicador que pode detectar a
presença da enzima β-galactosidase. Bactérias produtoras de
lactose (produtoras de β-galactosidase) resultam em colônias
de cor azul violeta (3). Salmonellae forma ácido a partir do
propileno glicol e combinando-se com o indicador de pH,
formando colônias rosa avermelhas típicas. Outras bactérias
gram-negativas entéricas formam colônias incolores. A
Salmonellae Typhimurium e a Salmonellae Enteritidis
produzem colônias róseas a vermelhas.
Organismos Inóculo (UFC) Crescimento Recuperação Cor da colônia
Escherichia coli ATCC 25922 50-100 Abundante ≥50% Azul verde
Klebsiella pneumoniae ATCC 13883 50-100 Abundante ≥50% Azul violeta
Proteus mirabilis ATCC 25933 50-100
50-100
Abundante ≥50% Incolor
Salmonella Typhimurium ATCC 14028 Abundante ≥50% Rosa avermelhado
Salmonella Enteritidis ATCC 13076 50-100 Abundante ≥50% Rosa avermelhado
Salmonella Typhi ATCC 6539 50-100 Abundante ≥50% Incolor
Shigella flexneri ATCC 12022 50-100 Abundante ≥50% Incolor
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Inibido 0% -3
≥10
15

19. M1082
AGAR SALMONELLA DIFERENCIAL MODIFICADO
ComposiçãoPrincípio e Interpretação
Procedimento de Preparo
Avaliação de Resultados
Controle de qualidade
Agar Salmonella Diferencial é recomendado para identificação e diferenciação de espécies de Salmonella de outras espécies do membro
Enterobacteriaceae, especialmente espécies de Proteus.
Para Identificação e Diferenciação de espécies de Salmonella
Ingredientes g/L
Parte A
Peptona, especial 8.00
Extrato de Levedura 3.00
Desoxicolato de Sódio 1.00
Cloreto de sódio 5.00
Indicador B.C. 2.00
Ágar 12.00
Parte B
Propileno glicol 10.00
pH Final (a 25°C): 7.3 ± 0.2
Dissolva 10 gramas de fluído da parte B em 1000 mL de água
destilada. Adicione 31 gramas da parte A. Misture bem e ferva
até dissolver o meio completamente. NÃO AUTOCLAVE. Esfrie
a 45-50°C. Misture bem antes de distribuir em placas de Petri
esterilizadas.
Aparência do pó: Parte A: Pó amarelo claro a rosa claro,
homogêneo que flui livremente. Parte B: Solução incolor viscosa.
Solidificação: Gel firme, comparável com Agar gel a 1.2 %.
Cor e Transparência do meio preparado: Cor laranja clara, gel
transparente a levemente opalescente em placas de Petri.
Reação: A reação da solução aquosa a 3.1% (peso/volume) da
Parte A apresenta pH final de 7.3 ± 0.2 a 25°C.
Condições de Armazenamento: Armazenar o pó resfriado entre 2 e
8°C. Utilize antes de expirar a data de validade.
Referências Bibliográficas:
1. Rambach A., (1990), Environ. Microbiol., 56:301.
2. Eaton A. D., Clesceri L. S., Rice E. W. and Greenberg A. W., (Eds), (2005), Standard
Methods for the Examination of Water and Wastewater, 21st ed., APHA, Washington DC.
3. Greenwald, R., Henderson R. W. and Yappaw S., (1991), J. Clin. Microbiol., 29:2354.
Característica da cultura após incubação a 35-37°C por 24-48 horas.
O meio Agar Salmonella Diferencial é uma pequena
modificação da formulação original de Rambach (1) usada
para diferenciação de espécies de Salmonella de espécies de
Proteus e outras bactérias entéricas. A produção de ácido a
partir do propileno glicol é uma nova característica de espécies
de Salmonella e é utilizada neste meio. Muito meios tais como
Agar SS, Agar XLD são recomendados para a identificação
e diferenciação de espécies de Salmonella (2) são basea-
dos na fermentação da lactose e na produção de sulfeto de
hidrogênio. A peptona especial e extrato de levedura
promovem o crescimento abundante de bactérias, enquanto
que o desoxicolato de sódio inibe os organismos
gram-positivos tornando o meio seletivo para
microorganismos entéricos. Cloreto de sódio mantém o equilí-
brio osmótico. O indicador BC torna se rosa na presença de
ácido produzido pelo propileno glicol. A habilidade de fermen-
tação da lactose é determinada pelo uso de um indicador que
pode detectar a presença da enzima β-galactosidase. Bactérias
fermentadoras de lactose (produtoras de β-galactosidase)
produzem colônias de cor azul violeta (3). Salmonellae forma
ácido a partir do propileno glicol e combinando-se com o
indicador de pH produz colônias rosa avermelhas típicas.
Outras bactérias gram-negativas entéricas formam colônias
incolores. A Salmonellae Typhimurium e a Salmonellae
enteritidis produzem colônias róseas a vermelhas.
16
AGARSALMONELLADIFERENCIALMODIFICADO
Organismos Inóculo (UFC) Crescimento Recuperação Cor da colônia
Escherichia coli ATCC 25922 50-100 Abundante ≥50% Azul verde
Klebsiella pneumoniae ATCC 13883 50-100 Abundante ≥50% Azul violeta
Proteus mirabilis ATCC 25933 50-100
50-100
Abundante ≥50% Incolor
Salmonella Typhimurium ATCC 14028 Abundante ≥50% Rosa avermelhado
Salmonella Enteritidis ATCC 13076 50-100 Abundante ≥50% Rosa avermelhado
Salmonella Typhi ATCC 6539 50-100 Abundante ≥50% Incolor
Shigella flexneri ATCC 12022 50-100 Abundante ≥50% Incolor
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Inibido 0% -3
≥10

20. M1296
AGAR HICROME SALMONELLA
AGARHICROMESALMONELLA
Composição Princípio e Interpretação
Procedimento de Preparo
Avaliação de Resultados
Controle de qualidade
Agar Hicrome Salmonella é usado para o isolamento e diferenciação de espécies de Salmonella de coliformes por método cromogênico.
Para Identificação e Diferenciação de espécies de Salmonella
Ingredientes g/L
Digesto péptico de tecido animal 6.00
Extrato de levedura 2.50
Mistura de sais biliares 1.00
Mistura cromogênica 5.40
Àgar 13.00
pH Final (a 25°C): 7.7 ± 0.2
Dissolva 27.9 gramas em 1000 mL de água destilada. Ferva
gentilmente para dissolver o meio completamente. NÃO
AUTOCLAVE. Resfrie a 50°C. Misture bem e distribua em placas de
Petri estéreis.
Aparência do pó: Pó creme a amarelo (M1296), homogêneo e livre
circulante.
Solidificação: Firme, comparável com Agar gel 1.3% (M1296).
Cor e Transparência do meio preparado: Cor âmbar claro
(M1296), gel levemente opalescente em placas de Petri.
Reação: A solução aquosa a 2.79% (peso/volume) tem pH final de
7.7 ± 0.2 a 25°C.
Condições de Armazenamento: Armazenar o pó resfriado entre 2 e
8°C. Utilize antes de expirar a data de validade.
Referências Bibliográficas:
1. Murray P.R., Baron J.H., Pfaller M. A., Jorgensen J.H. and Yolken R. H., (Ed.), 2003,
Manual of Clinial Microbiology, 8th Ed., American Society for Microbiology, Washington, D.C.
2. Rambach A., (1990), Appl. Environ, Microbiol., 56:301.
3. Greenwald R., Henderson R.W. and Yappan S., (1991), J. Clin. Microbiol. 29:2354.
Características da cultura após de 24-48 horas a 35-37°C.
Espécies de Salmonella tem sido isoladas de homem e de
quase todos os animais ao redor do mundo. Elas causam
muitos tipos de infecções desde leves, gastroenterites
auto-limitadas até doenças que põem em risco a vida, como
a febre tifóide. Salmonella Typhi e Salmonella Paratyphi A & B
causam gastroenterite, bacteremiae febre entérica. Salmonella
Cholerasuis causa gastroenterite e febre entérica especial-
mente em crianças. Salmonella Typhimurium é o sorotipo de
Salmonella mais frequentemente isolado(1). Os meios Agar
HiCrome Salmonella é uma modificação da fórmula original do
Rambach (2) usado para diferenciação de espécies Salmonella
e de outras bactérias entéricas. A formulação do Rambach
diferencia a Salmonella baseado na utilização do
propilenoglicol na presença de um indicador cromogênico.
Entretanto, o Agar HiCrome Salmonella usa somente a mistura
cromogênica para a identificação e diferenciação de espécies
Salmonella. A digesto péptico de tecido animal e a peptona
especial fornecem compostos nitrogenados e compostos
carbonatos e outros nutrientes essenciais para o crescimento.
A Escherichia coli e Salmonella são facilmente diferencia-
das devido a suas características coloniais. As espécies de
Salmonella formam colônias púrpura-claro com halo
púrpura. E. coli apresenta coloração azul, devido a presença da
enzima β-glucoronidase. Outros organismos formam colônias
incolores. A característica púrpura-claro e azul ocorrem devido
à mistura cromogênica (3). A mistura de sais biliares inibe
organismos gram-positivos.
17Organismos Inóculo (UFC) Crescimento Recuperação Cor da colônia
Bacillus subtilis ATCC 6633 Inibido 0% -
Escherichia coli ATCC 25922 50-100 Abundante ≥50% Azul
Proteus vulgaris ATCC 13315 50-100
50-100
Bom 40-50% Transparente
Salmonella Typhimurium ATCC 14028 Abundante ≥50% Púrpura claro com halo
Salmonella Enteritidis ATCC 13076 50-100 Abundante ≥50% Púrpura claro com halo
Salmonella Typhi ATCC 6539 50-100 Bom-abundante ≥50% Púrpura claro com halo
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Inibido 0% -
3
≥10
3
≥10

21. M1393
AGAR HICROME MM
ComposiçãoPrincípio e Interpretação
Procedimento de Preparo
Avaliação de Resultados
Controle de qualidade
Agar HiCrome MM é recomendado para identificação e diferenciação de Salmonella e não-Salmonella e Citrobacter de amostras clínicas
de alimento e água.
Para Identificação e Diferenciação de espécies de Salmonella
Ingredientes g/L
Digesto péptico de tecido animal 10.00
Extrato de carne 2.00
D-Celobiose 3.00
Lactose 10.00
D-Manitol 1.20
D-Trealose 1.33
Mistura cromogênica 6.60
Agar: 15.00
pH Final (a 25°C): 7.6 ± 0.2
Dissolva 49.13 gramas em 1000 mL de água destilada. Ferva para
dissolver o meio completamente. NÃO AUTOCLAVE OU
SUPERAQUEÇA. Resfrie a 45-50°C e distribua em placas de Petri
estéreis.
Aparência do pó: Pó creme amarelado, homogêneo e livre circulante.
Solidificação: Firme, comparável com Agar gel 1.5%.
Cor e Transparência do meio preparado: Cor âmbar claro, gel trans-
parente a levemente apalescente em placas de Petri.
Reação: A solução aquosa a 4.91% (peso/volume) apresenta pH
final de 7.6 ± 0.2 a 25°C.
Condições de Armazenamento: Armazenar o pó resfriado entre 2 e
8°C. Utilize antes de expirar a data de validade.
Referências Bibliográficas:
1. Miller R.G. and Mallinson E.T. (2000), J. Food Protection, 63 (10), 1443-46.
2. Miller R.G., Tate C.R., Mallinson E.T. and Scherrer J.A. (1991), Pault Sa, 70:2429-32.
Características da cultura após incubação a 35-37°C por 18-24 horas.
O Agar HiCrome MM foi formulado por Miller e Mallison (1)
para isolamento específico e detecção de Salmonella. Este
meio é superior ao Agar XLT4 para suportar o crescimento
de Salmonella devido a presença de proporção apropriada de
quatro açúcares. A maioria dos meios diferenciais e seletivos
são formulados com um ou mais açucares e indicadores de
pH respectivamente. A utilização de açúcares por organismos
resulta na mudança de pH. Este é usado com uma forma de
distinguir Salmonella de outras bactérias competidoras com
base na coloração da colônia. Salmonella spp geralmente são
incapazes de fermentar estes açúcares (2) que suportam o
crescimento de bactérias competidoras. Dessa forma outras
bactérias tendem a sobrepor-se a Salmonella, mascarando sua
presença. A inclusão de açúcares como manitol, celobiose e
trealose estimulam melhor crescimento inicial das células de
Salmonella. Entretanto, baixas concentrações destes açúcares
não interferem com a utilização de proteína e produção de
H2S. A presença da lactose suprime a produção de H2S por
espécies não-Salmonella como Citrobacter freundii.
Uma mistura cromogênica presente neste meio ajuda a dife-
renciação de fermentadores de lactose e não fermentadores.
Fermentadores de lactose dão colônias de coloração verde
azuladas, as quais teriam sido impossíveis de diferenciar com
o indicador baseado em mudança de pH. A inclusão de tergitol
4 no meio suprime a presença de colônias Proteus e
Providencia. O digesto péptico de tecido animal e extrato de
carne bovina fornecem compostos nitrogenados essenciais.
18
AGARHICROMEMM
Organismos Inóculo (UFC) Crescimento Recuperação Cor da colônia
Escherichia coli ATCC 25922 Abundante ≥50%
Salmonella sorotipo Enteritidis ATCC 13076 50-100 Abundante ≥50% Centro preto
Azul esverdeado
S. sorotipo Typhimurium ATCC 14028 50-100
50-100
50-100
Abundante ≥50% Centro preto
Citrobacter freundii ATCC 8090 Bom a abundante ≥50% Incolor*
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Inibido 0% -
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 50-100 Bom a abundante ≥50% Incolor
3
≥10
* Pode apresentar coloração verde quando a incubação for prolongada.

22. M1414
RAPID HIENTEROCOCCUS AGAR
RAPIDHIENTEROCOCCUSAGAR
Composição Princípio e Interpretação
Procedimento de Preparo
Avaliação de Resultados
Controle de qualidade
Meio de cultura usado para a rápida e fácil identificação e diferenciação de Enterococcus de amostras de água.
Para Identificação de espécies de Enterococcus
Ingredientes g/L
Peptona especial 10.00
Cloreto de sódio 5.00
Ázida sódica 0.30
Mistura cromogênica 0.06
Polisorbato 80 2.00
Fosfato dissódico 1.25
Agar 15.00
pH Final (a 25°C): 7.5 ± 0.2
Dissolva 33.61 gramas em 1000mL de água destilada. Ferva para
dissolver o meio completamente. Esterilize autoclavando a 1atm
de pressão (121°C) por 15 minutos. Misture bem e distribua em
placas de Petri.
Cuidado: A azida sódica tem a tendência de formar azidas me-
tálicas explosivas em materiais de encanamento. É aconselhável
utilizar bastante água suficiente para enxaguar o material utilizado.
Aparência do pó: Pó de cor creme a amarelo, homogêneo e livre
circulante.
Solidificação: Firme, comparável com gel agarose 1.5%.
Cor e Transparência do meio preparado: Cor âmbar clara, gel
transparente a levemente opalescente em placas de Petri.
Reação: A solução aquosa a 3.36% tem pH final de 7.5. ± 0.2 a
25°C.
Condições de Armazenamento: Armazenar o pó resfriado entre 2 e
8°C. Utilize antes de expirar a data de validade.
Referências Bibliográficas:
1. Litsky W., Mallmann W.L. and Fifield C.W., (1953), Amer. J. Pbl. Hlth., 43:873-879.
2. Manafi M. and Sommer R., (1993), Wat. Sci. Tech., 27:271-274.
Características da cultura após incubação a 35-37°C por 18-24 horas.
Enterococcus são comumente encontrados em fazes de
humanos e outros animais de sangue quente. Apesar de
algumas cepas sejam onipresentes e não relacionadas com a
poluição fecal, a presença de Enterococcus na água é uma
indicação de poluição fecal e da possível presença de
patógenos entéricos. A pesquisa de Enterococcus é
recomendada para o controle de qualidade de águas doce e
marinha para recreação. Estudos epidemiológicos levaram ao
desenvolvimento de critérios que podem ser usados para
estabelecer normas para água recreacionais com base em
relações estabelecidas entre os efeitos a saúde e a qualidade
da água. O significado de encontrar Enterococcus em amostras
de água recreacional, doce e marinha está diretamente
relacionada entre a densidade de Enterococcus e os riscos de
adquirir doenças gastrointestinais associadas à natação (1,
2). O Agar HiEnterococos Rápido permite a rápida identifica-
ção e diferenciação de Enterococcus em amostras de água. A
peptona fornece compostos nitrogenados e o cloreto de sódio
mantém o equilíbrio osmótico do meio para o crescimento
rápido de Enterococcus. A azida sódica inibe a microbiota
contaminante, especialmente organismos gram-negativos. A
enzima β-D-glucosidase presente em Enterococcus cliva o
substrato cromogênico, resultando em colônias com a
coloração verde azuladas. O polisorbato 80 age como fonte de
ácidos graxos.
Organismos Inóculo (UFC) Crescimento Recuperação Cor da colônia
Escherichia coli ATCC 25922 Nenhum a pobre ≤10% -
Enterococcus faecalis ATCC 29212 50-100
50-100
Bom 40-50% Azul esverdeada
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 50-100
50-100
Nenhum a pobre ≤10% -
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Bom 40-50% Incolor
19

23. M1376 CALDO HICROME ENTEROCOCCUS
ComposiçãoPrincípio e Interpretação
Procedimento de Preparo
Avaliação de Resultados
Controle de qualidade
Meio de cultura usado é recomendado para a identificação e diferenciação de Enterococcus de amostras de água.
Para Identificação de espécies de Enterococcus
Ingredientes g/L
Peptona especial 10.00
Cloreto de sódio 5.00
Azida sódica 0.30
Substrato cromogênico 0.04
Polisorbato 80 2.00
Fosfato dissódico 1.25
Ágar -
pH Final (a 25°C): 7.5 ± 0.2
Dissolva 37.18 gramas (concentração dupla) ou 18,59 gramas
(concentração simples) em 1000 mL de água destilada. Ferva para
dissolver o meio completamente. Distribua em tubos e esterilize por
autoclavação a 1atm de pressão (121°C) por 15 minutos.
Cuidado: A azida sódica tem a tendência de formar azidas metálicas
explosivas em materiais de encanamento. É aconselhável utilizar
bastante água para enxaguar o material utilizado.
Aparência do pó: Pó creme a amarelo, homogêneo e livre circulante.
Cor e Transparência do meio preparado: Cor âmbar clara de aspecto transparente.
Reação: A solução aquosa a 185% apresenta pH final de 7.5. ± 0.2 a 25°C.
Condições de Armazenamento: Armazenar o pó resfriado entre 2 e 8°C. Utilize antes de expirar a data de validade.
Referências Bibliográficas:
1. Althous H., Dott W., Havemeister G., Muller H.E. & Sacre’ C., 1982, Zbl. Bakt. Hyg. I. Abt. Orig. A., 252:154-165.
2. Amoras I., 1995, Poster Presentation Congress of Spanish Society of Microbiology, Madrid.
3. Litsky W., Mallmann W.L. and Fifield C.W., 1953, Amer. J. Pbl. Hlth., 43:873-879.
4. Manafi M. and Sommer R., 1993, Wat. Sci. Tech., 27:271-274.
5. Snyder M.L. and Lichstein H.C., 1940, J. Infect. Dis., 67:113-115.
6. Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, 20th Edition, Edited by L.S. Clesceri, A.E. Greenberg and A.D. Eaton, Published by APHA, AWWA and WEF (1998).
Características da cultura após incubação a 35-37°C por 18-24 horas.
Caldo HiCrome Enterococcus é formulado com base no
trabalho realizado por Althouse et al (1), Amoras (2), Litsky
et al (3) e Manafi & Sommer (4) e Snyder & Lichstein (5).
Este meio é recomendado para a rápida detecção de
Enterococcus em amostras de água. A presença do grupo
Enterococcus, o qual é um subgrupo dos estreptococos fecais,
serve como valioso indicador para a determinação da extensão
da contaminação fecal (1,6) e é mais específico que a determi-
nação de coliformes, os quais podem ser originários de fonte
não fecal. A enzima β-glucosidase produzida por Enterococcus
cliva o substrato cromogênico, resultando em colônias com a
coloração verde azulada. O meio contém peptona especial, que
fornece compostos nitrogenados e outros nutrientes
essenciais. O cloreto de sódio mantém o equilíbrio osmótico
do meio. A azida sódica inibe a microbiota contaminante,
especialmente organismos gram-negativos. O polisorbato 80
age como fonte de ácidos graxos.
20
CALDOHICROMEENTEROCOCCUS
Organismos Inóculo (UFC) Crescimento Cor do meio
Escherichia coli ATCC 25922 Nenhum a pobre -
Enterococcus faecalis ATCC 29212 50-100
50-100
Bom Azul-verde
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 50-100
50-100
Nenhum a pobre -
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Bom Incolor

24. M1580AGAR HICROME ENTEROCOCCUS FAECIUM BASE
AGARHICROMEENTEROCOCCUSFAECIUMBASE
Composição Princípio e Interpretação
Procedimento de Preparo
Avaliação de Resultados
Controle de qualidade
Agar recomendado para identificação cromogênica de Enterococcus faecium de amostras de fezes, esgoto e de água.
Para Identificação de espécies de Enterococcus
Ingredientes g/L
Peptona especial 23.00
Amido de milho 1.00
Cloreto de sódio 5.00
Substrato cromogênico 0.10
Arabinose 10.00
Vermelho Fenol 0.10
Agar 15.00
pH Final (a 25°C): 7.8 ± 0.2
Dissolva 27.1 gramas em 500 mL de água destilada. Ferva para
dissolver o meio completamente. NÃO AUTOCLAVE. Resfrie 45-
50°C e adicione assepticamente o conteúdo reidratado de 1 frasco
de Suplemento Seletivo Enterococcus faecium (FD226). Misture
bem e despeje em placas de Petri estéreis.
Aparência do pó: Pó amarelo claro a bege rosado, homogêneo e
livre circulante.
Solidificação: Firme, comparável com Agar gel 1.5%.
Cor e Transparência do meio preparado: Cor vermelha, gel trans-
parente a levemente opalescente em placas de Petri.
Reação: A solução aquosa a 5.42% (peso/volume) apresenta pH
final de 7.8 ± 0.2 a 25°C.
Condições de Armazenamento: Armazenar o pó resfriado entre 2 e
8°C. Utilize antes de expirar a data de validade.
Referências Bibliográficas:
1. Skenner F. A. and Quesnel L.B., (1978), Streptococci. Academic Press, Inc. (London)
Ltd., London United Kingdom, p. 245-261.
2. Chenoweth C, Schaberg D: Eur J Clin Microbiol Infect Dis 9:80-89, 1990.
3. Moellering. 1992. Clin. Infect. Dis. 14: 1173.
4. Williger B. and Manafi M. 1995. Lett. Appl. Microbiol., 20:300-302.
Características da cultura com adição do Suplemento Seletivo E. faecium (FD226) e incubação a 35-37°C por 18-24 horas.
O Agar HiCrome Enterococcus faecium é recomendado para
a detecção cromogênica de E. faecium de urina, fezes, solo,
alimentos, água, plantas e animais. E. faecium é comumente
encontrado no trato gastrointestinal de humanos (1). A
resistência exibida pelos Enterococcus a vários
antimicrobianos tem transformado esses microrganismos na
maior causa de infecções humanas incluindo infecções
hospitalares (2). Enterococcus faecalis causa 80-90% das
infecções enquanto E. faecium causa a maioria dos casos
restantes (3). O uso de um meio seletivo para o isolamento de
Enterococcus tem sido pesquisado, incluindo todos aqueles
contendo substrato cromogênico (4) e meios contendo suple-
mentos cefalexina-aztreonam. As espécies de Enterococcus
possuem a enzima β-glicosidase, a qual cliva especificamente
o substrato cromogênico para produzir colônias de cor azul. E.
faecium fermenta arabinose e cliva o substrato cromogênico
presente no meio para produzir colônias de cor verde. E.
faecalis não fermenta arabinose e então retém a cor azul.
A peptona especial serve como a fonte de carbono, nitrogênio
e outros nutrientes de crescimento. O amido de milho
neutraliza os metabólitos tóxicos, enquanto cloreto de sódio
mantém o equilíbrio osmótico. O vermelho de fenol serve
como um indicador de pH com arabinose sendo o carboidrato
fermentável.
21
Organismos Inóculo Crescimento Recuperação Cor da colônia
Escherichia coli ATCC 25922 Inibido 0% -
Enterococcus faecalis ATCC 29212 50-100 Abundante ≥50% Azul
Enterococcus faecium ATCC 19434 50-100 Abundante ≥50% Verde
Enterococcus hirae ATCC 10541 Abundante ≥50% Azul
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
50-100
Inibido 0% -
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Inibido 0% -
3
≥10
3
≥10
3
≥10

25. M1297A AGAR HICROME CANDIDA DIFERENCIAL
ComposiçãoPrincípio e Interpretação
Procedimento de Preparo
Avaliação de Resultados
Controle de qualidade
O Agar HiCrome Candida é recomendado para o isolamento rápido e identificação de espécies de Candida de culturas mistas.
Para Identificação e Diferenciação de Bolores e Leveduras
Ingredientes g/L
Peptona especial 15.00
Extrato de levedura 4.00
Fosfato dipotássico 1.00
Mistura cromogênica 7.22
Cloranfenicol 0.50
Agar 15.00
pH Final (a 25°C): 6.3 ± 0.2
Dissolva 42.72 gramas do pó em 1000mL de água destilada.
Aqueça até a fervura para dissolver o meio completamente. NÃO
AUTOCLAVE. Esfrie a 50°C e distribua em placas de Petri estéreis.
Aparência do pó: Pó creme a bege, homogêneo e livre circulante.
Solidificação: Firme, comparável com Agar gel 1.5%.
Cor e Transparência do meio preparado: Cor âmbar, límpido a
levemente opalescente em placas de Petri.
Reação: A solução aquosa a 4.27% (peso/voulme) apresenta pH
final de 6.3 + 0.2 a 25°C.
Condições de Armazenamento: Armazenar o pó resfriado entre 2 e
8°C. Utilize antes de expirar a data de validade.
Referências Bibliográficas:
1. Perry J.L. and Miller G.R., (1987), J. Clini Microbiol., 25:2424-2425
2. Rouselle P., Freydiere A., Couillerot P., de Montclos H. and Gille Y., (1994), J. Clin MIcro-
biol, 32:3034-3036.
Características da cultura após incubação de 30°C por 40-48 horas.
Perry e Miller (1) relataram que as espécies de Candida
albicans produzem uma enzima β-N-acetilgalactosaminidase, e
de acordo com Rousselle et al (2) a incorporação de substrato
hexosaminidase cromogênico ou fluorogênico, no meio de
crescimento do ajuda na identificação de isolados de Candida
albicans diretamente no isolamento primário. O Agar HiCrome
Candida Diferencial é um meio seletivo e diferencial que facilita
o rápido isolamento de leveduras de culturas mistas e permite
a diferenciação de espécies de candida como Candida albicans,
Candida krusei, Candida tropicalis e Candida glabata com base
na coloração e morfologia da colônia. Neste meio são obtidos
resultados dentro de 48 horas e isso é útil para identificação
rápida e presuntiva de leveduras comuns na Micologia e em
laboratórios de Microbiologia Clínica. A peptona especial e o
extrato de levedura fornece m componentes de nitrogenados,
compostos de carbono e outros nutrientes de crescimento
essenciais.
O fosfato tamponam bem o meio. O cloranfenicol suprime
a microbiota bacteriana. A C.albicans produz colônias lisas
de cor verde clara, a C. tropicalis produz colônias azul a azul
metálica elevadas. As colônias de C. glabrata são lisas e com
coloração creme a branco enquanto que em C. krusei as
colônias são púrpuras frisados.
22
AGARHICROMECANDIDADIFERENCIAL
Organismos Inóculo (UFC) Crescimento Recuperação Cor da colônia
C. albicans ATCC 10231 Bom a abundante ≥50% Verde claro
C. glabrata ATCC 15126 50-100
50-100
Bom a abundante ≥50% Creme a branco
Candida kruzei ATCC 24408 50-100
50-100
Bom a abundante ≥50% Púrpura, Fuzzi
Candida tropicalis ATCC 750 Bom a abundante ≥50% Azul a púrpura
Escherichia coli ATCC 25922 Inibido 0% -
S. aureus ATCC 25923 Inibido 0% -
3
≥10
3
≥10

26. M1467AGAR HICROME OGYE BASE
AGARHICROMEOGYEBASE
Composição Princípio e Interpretação
Procedimento de Preparo
Avaliação de Resultados
Controle de qualidade
Agar recomendado para isolamento e quantificação de bolores e leveduras do leite e derivados do leite através do método cromogênico.
Para Identificação e Diferenciação de Bolores e Leveduras
Ingredientes g/L
Extrato de levedura 4.00
Dextrose 20.00
Mistura cromogênica 1.10
Agar 12.00
pH Final (a 25°C): 7.0 ± 0.2
Dissolva 18,55 gramas em 1000mL de água destilada. Ferva para
dissolver o meio completamente. Esterilize autoclavando a pressão
de 1atm (121°C) por 15 minutos. Resfrie a 50°C e adicione
assepticamente conteúdo reconstituído de 1 frasco de Suplemento
Seletivo Oxitetra (FD032). Mexa bem e distribua em placas de Petri
estéreis.
Aparência do pó: Pó de cor creme a amarelo homogêneo e livre
circulante.
Solidificação: Firme, comparável com gel agarose 1.2%.
Cor e Transparência do meio preparado: Cor âmbar claro, gel
transparente levemente opalescente.
Reação: A solução aquosa a 3.71% apresenta pH final de 7.0 ± 0.2
a 25°C.
Condições de Armazenamento: Armazenar o pó resfriado entre 2 e
8°C. Utilize antes de expirar a data de validade.
Referências Bibliográficas:
1. Mossel D.A.A. et al., 1970, J. Appl. Bact. 33:454.
2. Mossel D.A.A., Harrewijn G.A. and Elzebrock J.M., 1973, UNICEF.
3. Mossel D.A.A., Visser M. and Mengerink W.H.J., 1962, Lab, Prac. 11:109.
Características da cultura observada com a adição do Suplemento Seletivo Oxitetra (FD032), após incubação de 2-3 dias a 25-30°C.
* Anteriormente conhecido como Aspergillus niger
O Agar HiCrome OGYE Base foi originalmente formulado por
Mossel et al. (1,2) para o isolamento e quantificação de
bolores e leveduras de alimentos. Mossel et al. (3)
posteriormente adicionou Oxitetraciclina como um agente
seletivo e descobriram que o uso de Oxitetraciclina em um
meio com pH neutro fornece uma contagem maior de bolores
e leveduras quando comparado ao meio que tem pH baixo para
suprimir o crescimento bacteriano. O Agar HiCrome OGYE
é um meio diferencial e seletivo o qual facilita o isolamento
rápido de bolores e leveduras de produtos como o leite e seus
derivados.
O extrato de levedura fornece os nutrientes de crescimento
essenciais. A dextrose atua como fonte de energia e carbono.
O pH baixo ajuda a reduzir a microbiota bacteriana. A
Oxitetraciclina faz o meio mais seletivo por inibir o crescimento
de Lactobacillus encontrados no leite e em produtos derivados
em pH baixo. A incorporação de compostos cromogênicos
no meio de crescimento auxilia na identificação de bolores e
leveduras diretamente no isolamento primário. *Aspergillus
brasiliensis aparecem como colônias de cor azul clara com
esporos pretos devido à presença de mistura cromogênica.
Candida albicans apresenta colônias de cor verde e S.
cerevisiae colônias incolores.
Organismos Inóculo Crescimento Recuperação Cor da colônia
Escherichia coli ATCC 25922 Inibido 0% -
*Aspergillus brasiliensis ATCC 16404 50-100 Abundante ≥50% Azul claro com esporos pretos
Candida albicans ATCC 10231 50-100
50-100
Abundante ≥50% Verde
Saccharomyces cerevisiae ATCC19615 Abundante ≥50% Incolor
3
≥10
23

27. M1577 AGAR HICROME ENTEROBACTER SAKAZAKII
ComposiçãoPrincípio e Interpretação
Procedimento de Preparo
Avaliação de Resultados
Controle de qualidade
gar recomendado para isolamento e identificação de *Cronobacter sakazakii em amostras de alimentos, água, esgoto, urina e fezes.
Para Identificação de Enterobacter sakazakii
Ingredientes g/L
Hidrolisado enzimático de caseína 15.00
Digesto papaico de farinha de soja 5.00
Cloreto de sódio 5.00
Desoxicolato de sódio 0.50
Tiosulfato de sódio 1.00
Mistura cromogênica 10.17
Agar 15.00
pH Final (a 25°C): 7.3 ± 0.2
Dissolva 51.67 gramas em 1000 mL de água destilada. Ferva para
dissolver o meio completamente. Esterilize autoclavando a 1atm de
pressão (121°C) por 15 minutos. Resfrie a 45-50°C e distribua em
placas de Petri estéreis.
Aparência do pó: Pó amarelo claro a rosa, homogêneo e livre
circulante.
Solidificação: Firme, comparável com Agar gel 1.5%.
Cor e Transparência do meio preparado: Cor púrpura, gel
transparente a levemente opalescente.
Reação: A solução aquosa a 5.16% (peso/volume) apresenta pH
final de 7.3. ± 0.2 a 25°C.
Condições de Armazenamento: Armazenar o pó resfriado entre 2 e
8°C. Utilize antes de expirar a data de validade.
Referências Bibliográficas:
1. Muytjens HL, Zanen HC, Sonderkamp HJ et al. J. Clin Microbiol 18:115-120, 1983.
2. Isenberg (ed.), 1992. Clinical microbiology procedures handbook, vol.1. American
Society for Microbiology, Washington, DC.
Características da cultura após incubação a 37°C por 18-24 horas.
*Anteriormente denominado Enterobacter Sakasakii.
Espécies de Enterobacter são amplamente distribuídas na
natureza ocorrendo em água fresca, solo, água de esgoto,
plantas, vegetais, animais e fezes humanas. Espécies de
Cronobacter sakazakii têm sido intimamente associadas com
meningite neonatal e sepsis (1). O substrato cromogênico é
especificamente clivado (2) pela enzima glicosidase presente
em espécies de Enterobacter resultando na formação de
colônias azul-esverdeadas. Outros organismos, os quais não
clivam este substrato produzem colônias amarelas. A incorpo-
ração de mistura cromogênica no meio produz uma cor azul
intensa para as colônias de Cronobacter sakazakii enquanto a
cor azul esverdeada para outras espécies de Enterobacter.
O hidrolisado enzimático de caseína e o digesto papaico de
farinha de soja fornecem os nutrientes de crescimento es-
senciais junto com os compostos de carbono e nitrogenados.
O cloreto de sódio ajuda a manter o equilíbrio osmótico do
meio. O desoxicolato de sódio inibe a microbiota gram-positiva
contaminante.
24
AGARHICROMEENTEROBACTERSAKAZAKII
Organismos Inóculo (UFC) Crescimento Recuperação Cor da colônia
Escherichia coli ATCC 25922 50-100 Bom a abundante ≥50% Amarela
Enterobacter aerogenes ATCC 13048 50-100 Bom a abundante ≥50% Verde azulado
Enterococcus faecalis ATCC 29212
50-100
Inibido 0% -
Cronobacgter sakasakii ATCC 12868 Bom a abundante ≥50% Azul
Klebsiella pneumoniae ATCC13883 50-100 Bom a abundante ≥50% Amarela (mucóide)
≥103

28. M1641
AGAR HICROME ENTEROBACTER SAKAZAKII MODIFICADO
AGARHICROMEENTEROBACTERSAKAZAKIIMODIFICADO
Composição Princípio e Interpretação
Procedimento de Preparo
Avaliação de Resultados
Controle de qualidade
O Agar HiCrome Enterobacter Sakazakii Modificado é recomendado para o isolamento e identificação de *Cronobacter sakazakii a partir
de leite e produtos lácteos.
Para Identificação de Enterobacter sakazakii
Ingredientes g/L
Hidrolisado enzimático de caseína 7.00
Extrato de levedura 3.00
Cloreto de sódio 5.00
Desoxicolato de sódio 0.60
Substrato cromogênico 0.15
Cristal violeta 0.002
Agar 15.00
pH Final (a 25°C): 7.0 ± 0.2
Dissolva 30.75 gramas em 1000 mL de água destilada. Ferva para
dissolver o meio completamente. Esterilize autoclavando a 1atm de
pressão (121°C) por 15 minutos. Resfrie a 45-50°C e dispense em
placas de Petri estéreis.
Aparência do pó: Pó amarelo claro a roseo, homogêneo e livre
circulante.
Solidificação: Firme, comparável com Agar gel 1.5%.
Cor e Transparência do meio preparado: Cor púrpura, gel claro a
levemente opalescente.
Reação: A solução aquosa a 3.07% (peso/volume) apresenta pH
final de 7.0 ± 0.2 a 25°C.
Condições de Armazenamento: Armazenar o pó resfriado entre 2 e
8°C. Utilize antes de expirar a data de validade.
Referências Bibliográficas:
1. Muytjens HL, Zanen HC, Sonderkamp HJ et al. J. Clin Microbiol 18:115-120, 1983.
2. International Organization for Standardization Draft ISO/TS 22964, 2006 (E).
Características da cultura após incubação a 44 ± 1°C por 18-24 horas.
* Anteriormente denominado Enterobacter sakasakii
Espécies de Enterobacter estão amplamente distribuídas na
natureza ocorrendo em água, solo, esgoto, plantas, vegetais,
leite e produtos lacticínios, fezes humanas e animais. *C.
sakazakii tem sido associada com meningites neonatal e
sepsis (1). Este meio é recomendado pelo comitê ISO para o
isolamento e identificação de *C. sakazakii (2). O substrato
cromogênico é clivado especificamente (3) por *C. sakazakii
resultando em colônias azul-esverdeadas. Outros organismos,
os quais não clivam este substrato, produzem colônias incolo-
res à violeta claro.
A incorporação de mistura cromogênica no meio cria uma cor
azul intensa a verde azulada para as colônias de *C. sakazakii
onde outras espécies de Enterobacter apresentam colônias
incolores ou azul centralizadas.
O hidrolisado enzimático de caseína e o extrato de levedura
fornecem os nutrientes de crescimento essenciais junto com
compostos carbônicos e de nitrogênio. O Cloreto de Sódio
auxilia na manutenção do equilíbrio osmótico do meio. O
Desoxicolato de sódio inibe a microbiota gram-positiva
associada.
25
Organismos Inóculo (UFC) Crescimento Recuperação Cor da colônia
Escherichia coli ATCC 25922 50-100 Bom a abundante ≥50% Incolor
Enterobacter aerogenes ATCC 13048 50-100 Bom a abundante ≥50% Incolor com centro azul
Enterococcus faecalis ATCC 29212
50-100
Inibido 0% -
*Cronobacgter sakasakii ATCC 12868 Bom a abundante ≥50% Azul-esverdeado
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Inibido 0% -
≥103
≥103

29. M1573
AGAR HICROME KLEBSIELLA SELETIVO BASE
ComposiçãoPrincípio e Interpretação
Procedimento de Preparo
Avaliação de Resultados
Controle de qualidade
Agar usado para isolamento e detecção de espécies de Klebsiella de água e outras fontes. Esse meio também pode ser usado no
método de processo de filtração por membrana.
Para Identificação de Klebsiella
Ingredientes g/L
Peptona especial 12.00
Extrato de levedura 7.00
Cloreto de sódio 5.00
Mistura de sais biliares 1.50
Lauril Sulfato de Sódio (SLS) 0.10
Mistura cromogênica 0.20
Agar 15.00
pH Final (a 25°C): 7.1 ± 0.2
Dissolva 20.4 gramas em 500 mL de água destilada. Ferva para
dissolver o meio completamente. NÃO AUTOCLAVE. Resfrie a 50°C
e adicione assepticamente o conteúdo reidratado de um frasco de
Suplemento Seletivo Klebsiella (FD225). Mexa bem e distribua em
placas de Petri estéreis.
Aparência do pó: Pó creme a amarelo, homogêneo e livre
circulante.
Solidificação: Firme, comparável com Agar gel 1.5%.
Cor e Transparência do meio preparado: Cor âmbar claro, gel
transparente a levemente opalescente.
Reação: A solução aquosa a 4.08% (peso/volume) apresenta pH
final de 7.1 ± 0.2 a 25°C.
Condições de Armazenamento: Armazenar o pó resfriado entre 2 e
8°C. Utilize antes de expirar a data de validade.
Referências Bibliográficas:
1. Krieg, N.R., and J.G. Holt (ed.). 1984 Bergey’s Manual of systematic Bacteriology, vol. 1,
p. 408 – 516. The Williams and Wilkins Co., Baltimore, Md.
2. Wyngaarden J. B., Smith L. H., (Eds.), Cecil Text book of Medicine, 16th Ed. Pp 1430-
1432, Philadelphia, W. B. Saunders, 1982.
Características da cultura com adição do Suplemento Seletivo Klebsiella (FD225) e incubação a 35-37°C por 18-24 horas.
O Agar Base HiCrome Klebsiella Seletivo é recomendado
para o isolamento e contagem de espécies de Klebsiella
baseado na diferenciação cromogênica. As cepas de Klebsiella
pneumoniae são amplamente distribuídas no meio ambiente
e contribuem para os processos bioquímicos e geoquímicos
(1). K. pneumoniae causa pneumonia grave freqüentemente
fatal. Também mostrou ser a fonte de infecções do pulmão que
geralmente ocorre em pacientes com condições debilitadas
tal como alcoolismo, diabetes mellitus e doenças pulmonares
obstrutivas crônicas (2). O substrato cromogênico incorporado
ao meio é especificamente clivado pelas espécies de Klebsiella.
Klebsiella pneumoniae, agente causador de pneumonia, forma
colônias púrpuras-magenta facilitando a detecção dos organ-
ismos. A maioria dos contaminantes gram-negativos fecais
freqüentemente encontrados são inibidos neste meio usando
um suplemento seletivo.
A peptona especial e o extrato de levedura fornecem os nutri-
entes essenciais requeridos para o crescimento dos organ-
ismos. O cloreto de sódio mantém o equilíbrio osmótico do
meio. A mistura de sais biliares e lauril sulfato de sódio inibem
a maioria da microbiota contaminante. A adição de suplemento
seletivo promove o aumento da seletividade do meio.
26
AGARHICROMEKLEBSIELLASELETIVOBASE
Organismos Inóculo (UFC) Crescimento Recuperação Cor da colônia
Enterobacter aerogenes ATCC 13048 Inibido 0% -
Escherichia coli ATCC 25922 Inibido 0% -
Klebsiella pneumoniae ATCC13883 50-100 Abundante ≥50% Púrpura-magenta (mucóide)
Serratia marcescens ATCC 8100 Inibido 0% -
Shigella flexneri ATCC 12022 Inibido 0% -≥103
≥103
≥103
≥103

30. M1540
AGAR DIFERENCIAL L. MONO BASE
AGARDIFERENCIALL.MONOBASE
Composição Princípio e Interpretação
Procedimento de Preparo
Avaliação de Resultados
Controle de qualidade
Agar recomendado pelo Comitê ISO para isolamento seletivo e diferencial de Listeria monocytogenes.
Para Identificação de Listeria monocytogenes
Ingredientes g/L
Hidrolisada enzimático de caseína 6.00
Extrato de Levedura 10.00
Peptona de Carne 18.00
Fosfato dissódico, anidro 2.50
Glicerofosfato de Magnésio 1.00
Substrato Cromogênico 0.05
Piruvato de Sódio 2.00
Sulfato de Magnésio 0.50
Glicose 2.00
Cloreto de Sódio 5.00
Cloreto de Lítio 10.00
Agar 15.00
pH Final (a 25°C): 7.2 ± 0.2
Dissolva 36 gramas em 460mL de água destilada. Ferva até dissolver o
meio completamente. Esterilize autoclavando a 1atm de pressão a (121°C)
por 15 minutos. Resfrie a 45-50°C. Adicione assepticamente o conteúdo
de um frasco de Suplemento Enriquecimento L. mono I (FD214) e o
conteúdo reidratado e estéril de Suplemento Seletivo L. mono I (FD212),
Suplemento Seletivo L. mono II (FD213). Misture bem e distribua em
placas de Petri estéreis.
Cuidado: O cloreto de lítio é perigoso. Evite o contato com o corpo e inala-
ção dos vapores. Em contato com a pele, lave com água em abundância
imediatamente.
Aparência do pó: Cor creme a amarelo, homogêneo e livre circu-
lante.
Solidificação: Firme, comparável com Agar gel 1.5%.
Cor e Transparência do meio preparado: Cor âmbar claro, gel
levemente opalescente em placas de Petri.
Reação: A solução aquosa a 7.2% (peso/volume) apresenta pH
final de 7.2 a 25°C.
Condições de Armazenamento: Armazenar o pó resfriado entre 2 e
8°C. Utilize antes de expirar a data de validade.
Referências Bibliográficas:
1. Draft Amendment ISO 11290-2: 1996/DAM 1.
2. Ottaviani F., Ottaviani M., and Agosti M. (1997 a), Industrie Alimentari 36, 1-3.
3. Ottaviani F., Ottaviani M., and Agosti M. (1997 b), Quimper Froid Symposium Proceed-
ings p. 6, A.D.R.I.A. Quimper, France, 16-18 June 1997.
Características da cultura após adição de Suplemento Seletivo L. mono (FD212), Seletivo Suplemento L.mono II (FD213) E L. mopno
Suplemento de Enriquecimento L. mono I (FD214) e incubação a 35-37°C por 24-48 horas
O Agar Base Diferencial L. Mono está baseado na formula-
ção de Ottoviani e Agosti (2, 3) para o isolamento seletivo e
diferencial de Listeria monocytogenes de alimentos e rações de
animais o qual é adotado pelo Comitê ISO (1).
A peptona de carne, e hidrolisado enzimático de caseína, ex-
trato de levedura e piruvato de sódio fornecem os nutrientes de
crescimento essenciais e substâncias nitrogenadas. A glicose
é o carboidrato fermentável. O cloreto de sódio mantém o
equilíbrio osmótico. Os fosfatos tamponam o meio. O cloreto
de lítio e os suplementos seletivos (FD212 e FD213) inibem a
microflora contaminante e permitem o crescimento das espé-
cies de Listeria. As espécies de Listeria hidrolisam o substrato
cromogênico o qual produz colônias de cor azul esverdeadas.
A diferenciação de Listeria monocytogenes de outras espécies
de Listeria está baseada na atividade da fosfolipase C (PIPLC)
fosfatidilinositol específica. A enzima fosfolipase C hidrolisa o
substrato purificado (FD214) adicionado ao meio resultando
em um halo opaco ao redor das colônias de Listeria monocy-
togenes.
27
Organismos Inóculo (UFC) Crescimento Recuperação Cor da colônia Atividade do PIPLC
Candida albicans ATCC 10231 Inibido 0% -
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Inibido 0% -
Escherichia coli 25922
50-100
50-100
50-100
50-100
50-100
50-100
Inibido 0% -
Azul esverdeado
Azul esverdeado
Azul esverdeado
Azul esverdeado
-
Listeria innocua ATCC 33090 Abundante
Abundante
Abundante
Abundante
Abundante
Abundante
≥50%
≥50%
≥50%
≥50%
≥50%
≥50%
Azul esverdeado
Listeria grayi ATCC 19120
Listeria ivanovii ATCC 19119
Listeria monocytogenes ATCC 19112
Listeria seeligeri ATCC 35967
Listeria welshimeri ATCC 43549
Pseudomonas auruginosa ATCC 27853 Inibido -
Azul esverdeado
Negativa
Negativa
Negativa
Positiva
Positiva
Negativa
Negativa
-
Negativa
Negativa
≥10
3
≥103
≥10
3
≥10
3

31. M1417 AGAR HICROME LISTERIA BASE MODIFICADO
ComposiçãoPrincípio e Interpretação
Procedimento de Preparo
Avaliação de Resultados
Controle de qualidade
Agar seletivo e diferencial recomendado para identificação rápida e direta identificação de espécies de Listeria spp.
Para Identificação de espécies de Listeria
Ingredientes g/L
Peptona especial 23.00
Cloreto de sódio 5.00
Extrato de levedura 1.00
Extrato de carne 5.00
Cloreto de lítio 5.00
Ramnose 10.00
Vermelho de fenol 0.12
Mistura cromogênica 5.13
Agar 13.00
pH Final (a 25°C): 7.3 ± 0.2
Dissolva 33.62 gramas em 500mL de água destilada.Aqueça até a
agitação até a fervura para dissolver o meio completamente.
Esterilize autoclavando a 1atm de pressão a (121°C) por 15 minutos.
Resfrie a 50°C. Adicione assepticamente o conteúdo reidratado de 1
frasco de Suplemento Seletivo HiCrome Listeria (FD181). Mexa bem
e distribua em placas de Petri estéreis.
Cuidado: Cloreto de lítio é perigoso. Evite contato corporal e inala-
ção dos vapores. Se ocorrer contato com pele, lave imediatamente
com grande quantidade de água.
Aparência do pó: Pó amarelo claro a rosa, homogêneo e livre
circulante.
Solidificação: Firme, comparável com Agar gel 1.3%.
Cor e Transparência do meio preparado: Cor vermelha, gel trans-
parente a levemente opalescente em placas de Petri.
Reação: A solução aquosa a 6.72% (peso/volume) apresenta pH
final de 7.3 ± 0.2 a 25°C.
Condições de Armazenamento: Armazenar o pó resfriado entre 2 e
8°C. Utilize antes de expirar a data de validade.
Referências Bibliográficas:
1. Notermans S.H. and Dufrenne J., 1991, Applied and Environmental Microbiology,
57(09):2666-70.
2. Mengaud J., Braun-Breton C. and Cossart P., 1991, Molecular Microbiology, 5(2):367-372.
Características da cultura após a adição do Suplemento Seletivo HiCrome Listeria (FD181), incubação a 35-37°C por 24-48 horas.
O Agar Base HiCrome Listeria Modificado é uma modificação
de um meio primeiramente desenvolvido por Notermans et
al (1) e Mengaud et al (2) para a detecção de Listeria spp em
alimentos. O Agar Base HiCrome Listeria Modificado permite
somente o crescimento de espécies de Listeria e fornece uma
identificação direta e específica de L. monocytogenes dentro
de 24-48 horas após pré-enriquecimento. Este meio está
baseado na detecção cromogênica específica da atividade de
β-glucosidase e também na fermentação da ramnose. Espécies
de Listeria hidrolisam o substrato cromogênico purificado no
meio produzindo colônias de cor azul. Uma vez que a atividade
de β-glucosidase é específica para espécies de Listeria, outros
organismos não podem utilizar o substrato cromogênico,
portanto produzem colônias brancas. A diferenciação entre as
espécies de Listeria está baseada na fermentação da
ramanose. As colônias de L. monocytogenes e L. innocua são
azuis com um halo amarelo (Ramnose positiva), enquanto que
as colônias de L. ivanovii aparecem azuis sem o halo amarelo
(Ramnose - negativa).
A peptona, o extrato de levedura e o extrato de carne
fornecem as substâncias nitrogenadas, vitaminas do complexo
B e outros nutrientes essenciais. A Ramnose é o carboidrato
fermentável com e o vermelho fenol é o indicador. O cloreto de
sódio mantém o equilíbrio osmótico. O cloreto de lítio
adicionado e o Suplemento Seletivo HiCrome Listeria (FD181)
inibe o crescimento da maioria das bactérias gram-positivas,
bactérias gram-negativas, leveduras e bolores.
28
AGARHICROMELISTERIABASEMODIFICADO
Organismos Inóculo (UFC) Crescimento Recuperação Cor da colônia
Listeria monocytogenes ATCC 19118 50-100 Abundante ≥ 50% Verde azulado
Listeria ivanovii ATCC 19119 50-100 Abundante ≥ 50% Verde azulado
Listeria innocua ATCC 33090 50-100 Abundante ≥ 50% Verde azulado
E. coli ATCC 25922 Inibido 0% -
B. subtilis ATCC 6633 Inibido 0% -
P. aeruginosa ATCC 27853 Inibido 0% -
C. albicans ATCC 10231 Inibido 0% -
Fermentação da Ramnose
Positiva (halo amarelo)
Negativa
Positiva (halo amarelo)
-
-
-
-
3
≥10
3
≥10
3
≥10
3
≥10

32. M1354
AGAR M-CP BASE
AGARM-CPBASE
Composição Princípio e Interpretação
Procedimento de Preparo
Avaliação de Resultados
Controle de qualidade
O Agar M-CP Base com suplemento seletivo é recomendado pela Diretiva 98/83 /EC do Conselho da União Européia para isolamento e
contagem de Clostridium perfringens de amostras de água utilizando o método de filtração por membrana.
Para Identificação de Clostridium perfringens
Ingredientes g/L
Triptose 30.00
Extrato de levedura 20.00
Sacarose 5.00
L-Cisteína (hidrocloridrato) 1.00
Sulfato de magnésio, 7H2O 0.10
Púrpura de Bromocresol 0.04
Cloreto férrico, 6H2O 0.09
Indoxil-β-D-glucosídeo 0.06
Agar 15.00
pH Final (a 25°C): 7.6 ± 0.2
Dissolva 35.6 gramas do pó desidratado em 485 mL de água
destilada. Aqueça até a fervura para obter completa dissolução.
Esterilizar autoclavando a 1atm de pressão (121°C) por 15 minutos.
Esfrie até 50°C. Adicione assepticamente o conteúdo reidratado de
um frasco do suplemento seletivo M-CP I (FD153) e um frasco do
suplemento seletivo M-CP II (FD154) ou o conteúdo reidratado de
1 frasco de Suplemento Seletivo M-CP II, Modificado (FD154A).
Misture bem e distribua em placas de Petri.
Aparência do pó: Cor amarela clara a verde clara, homogêneo e pó
livre circulante.
Solidificação: Firme, comparável com Agar gel 1.5%.
Cor e Transparência do meio preparado: Cor púrpura, gel trans-
parente a levemente opalescente em placas de Petri.
Reação: A solução aquosa a 7.12% (peso/volume) apresenta pH
final de 7.6 ± 0.2 a 25°C.
Condições de Armazenamento: Armazenar o pó resfriado entre 2 e
8°C. Utilize antes de expirar a data de validade.
Referências Bibliográficas:
1. Czeczulin J. R., Hamon P.C., Mcclane B. A., 1993, Infec. Immun., 61: 3429-3439.
2. Armon R. and Payment P., (1988), Can. J. Microbiol., 34:78-79.
3. Directive of the Council of the European Union 98/83/EC.
4. Sartory D. P., Field M. Curbishley S. M., Pritchard A. M.., 1998, Lett. Appl. Microbiol.,
27:323-327.
Características da cultura observadas após incubação a 44°C por 24-48 horas com adição de 1 frasco do suplemento seletivo M-CP (FD153) e
1 frasco do suplemento seletivo M-CP II (FD154) ou o conteúdo reidratado de 1 frasco do suplemento seletivo M-CP II, modificado (FD154A),
sob condições anaeróbicas.
*colônias tornam-se rosa envelhecido a rosa avermelhadas sob exposição do vapor de amônio por 30 segundos.
Clostridium spp é umas das principais causas de intoxicação alimentar/
doenças gastrintestinais. Eles são bactérias gram-positivas, formadoras de
esporos que ocorrem naturalmente no solo (1). A familia compreende Clos-
tridium botulinum, que produz uma das toxinas mais potentes existentes;
Clostridium tetani, agente causador do tétano e Clostridium perfringens
são comumente encontrados em infecções de feridas e casos de diarréia. O
uso de toxinas para causar danos ao hospedeiro é um método empregado
por muitos patógenos bacterianos. O principal fator da virulência de C.
perfringens é a enterotoxina CPE, secretada no intestino do hospedeiro e
contribui para a intoxicação alimentar e outras doenças gastrintestinais (1).
Vários meios sólidos têm sido desenvolvidos para a quantificação de C.
perfringens. A seletividade do meio ocorre pela incorporação de um ou mais
antibióticos que inibem certos anaeróbios ou anaeróbios facultativos.
O Agar M-CP Base é preparado conforme a fórmula de Armon e Payment
(2). Também é recomendado pela Diretiva 98/83/EC do Conselho da União
Européia (3) para isolamento e contagem de C. perfringens de amostras de
água usando técnica de filtro de membrana.
A triptose e o extrato de levedura fornecem compostos nitrogenados,
enquanto que a sacarose é o carboidrato fermentável. O corante Púrpura de
bromocresol serve como um indicador de pH, o indoxil-β-D-glucorosideo é
um substrato cromogênico para β-D-glucuronidase ou celobiose e difosfato
de fenolftaleína para a detecção de fosfatase ácida. A adição de D-cicloserina
e polimixina B (FD153) torna o meio inibitório para microbiota não clos-
tridial, de modo que, permite a análise das células vegetativas e esporos de
Clostridium. Seletividade adicional é obtida pela incubação sob condições
de anaerobiose. Colônias amarelas (celobiose negativa) tornam-se rosa
envelhecida a rosa avermelhadas após exposição de vapor de amônio por 30
segundos são considerados presuntivos de C. perfringens. Algumas vezes
a diferenciação da coloração no Agar Base M-CP é difícil, assim colônias
típicas (amarelas tornando-se rosa) como também colônias atípicas (verde
ou aquelas que permaneceram amarelas sob exposição de vapor de amônio)
são escolhidas para confirmação. A identificação presuntiva de C. perfrin-
gens pode ser feita pela redução de sulfito, reacão de gram-positiva, bacilos
esporulados, motilidade negativa, redução de nitrato, liquefação da gelatina,
fermentação da lactose e outros testes bioquímicos (4).
29
Organismos Inóculo (UFC) Crescimento Recuperação Cor da colônia
Bacillus subtilis ATCC 6633 Inibido 0% -
Clostridium perfringens ATCC 12924 Bom ≥40% -
Salmonella Typhi ATCC 6539 50-100
50-100
50-100
50-100
Inibido 0% *Amarela
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Inibido 0% -

33. M1651
AGAR HICROME BACILLUS
ComposiçãoPrincípio e Interpretação
Procedimento de Preparo
Avaliação de Resultados
Controle de qualidade
O Agar HiCrome Bacillus é um meio diferencial recomendado para rápida identificação de espécies de Bacillus de culturas mista pelo
método cromogênico.
Para Identificação de espécies de Bacillus.
Ingredientes g/L
Digesto Péptico de Tecido Animal 10.00
Extrato de Carne 1.00
D-Manitol 10.00
Cloreto de Sódio 10.00
Mistura Cromogênica 3.20
Vermelho Fenol 0.025
Agar 15.00
pH Final (a 25°C): 7.1 ± 0.2
Dissolva 49.22 gramas em 1000mL de água destilada. Aqueça até
ferver para dissolver o meio completamente. NÃO AUTOCLAVE.
Resfrie a 50°C e se desejar adicione assepticamente 1 frasco de
Suplemento Seletivo Polimixina B (FD003) reidratado. Misture bem
e distribua em placas de Petri estéreis.
Aparência do pó: Pó amarelo claro a rosa, homogêneo e pó livre
circulante.
Solidificação: Firme, comparável com um gel de agar 1.5%.
Cor e Transparência do meio preparado: vermelha, claro a leve-
mente opalescente em placas de Petri.
Reação: A solução aquosa a 4.92% (peso/volume) apresenta pH
final de 7.1 ± 0.2 a 25°C.
Condições de Armazenamento: Armazenar o pó resfriado entre 2 e
8ºC. Utilize antes de expirar a data de validade.
Referências Bibliográficas:
1. Murray P.R., Baron J. H., Pfaller M.A., Jorgensen J.H., and Yolken R.H., (Eds), 2003,
Manual of Clinical Microbiology, 8th Ed. American Society for Microbiology, Washington,
D.C. / 2. Mossel D.A.A., Koopman M. J. and Jongerium E., 1976, Appl. Microbiol., 15:650.
/ 3. Mortimer P.R. and McCann G., 1974, Lancet, 1043. / 4. Bouza E., Grant S., Jordan C.,
et al, 1979, Arch Ophthamol., 97:488. / 5. Wohlgemuth K., Kirkbride, C.A., Bicknell, E.J.
and Ellis, R.P., 1972 Am. Vet. Met, Ass. 61:1691.
Características da cultura após incubação a 30°C por 24-48 horas.
A maioria das espécies de Bacillus aparentemente tem pequeno
ou nenhum potencial patogênico e raramente estão associados
com doenças em humanos ou animais. A principal exceção é o
Bacillus anthracis, o agente do anthrax, e o Bacillus cereus, mas
um número de outras espécies, particularmente os pertencentes
ao grupo Bacillus subtilis, implicados em intoxicação alimentar
e outras infecções em humanos e animais (1). B. cereus causa
intoxicação alimentar devido ao consumo de arroz contaminado
(3, 4, 5), e outros alimentos amilaceos como batata, massa e
queijo também tem sido implicados, infecções oculares e uma
ampla linhagem de outras condições clínicas como a formação
de abcessos (pus), meningites, septicemia e infecções de feridas.
O Agar Hicrome Bacillus é baseado na formulação do ágar MYP
formulado por Mossel et al. (2) sendo usado para contagem
de Bacillus cereus e Bacillus thuringiensis quando presente em
grande numero em determinados alimentos.
O meio contém digesto péptico de tecidos animais e extratos de
carne, que fornecem os compostos nitrogenados. O manitol é a
fonte de carboidratos fermentáveis, fermentação esta que pode
ser detectada pelo vermelho fenol. Organismos fermentadores
de manitol como B. megateruim formam colônias de coloração
amarela.
A mistura cromogênica presente no meio é clivada pela enzima β
β-glucosidase encontrada em B. cereus, resultando na forma-
ção de colônias azuis. B. thuringiensis também crescem como
colônias azuis-esverdeadas neste meio já que B, cereus e B.
thuringiensis são bioquimicamente idênticas. Se for necessário
realizar o isolamento seletivo de B. cereus e B. thuringiensis,
adicione assepticamente polimixina-B (FD003).
30
AGARHICROMEBACILLUS
Organismos Inóculo (UFC) Crescimento
(s/ suplemento FD003)
Recuperação
(s/ suplemento FD003)
Cor da colônia
Bacillus subtilis ATCC 6633 50-100 Moderado 20-30% Verde amarelada a verde
Bacillus cereus ATCC 10876 50-100 Bom a abundante ≥50% Azul clara, grande, plana
e com centro azul
Bacillus thuringiensis ATCC 10792 50-100
50-100
Bom a abundante ≥50% Azul claro, grande e plana e
com margens irregulares
Bacillus megaterium ATCC 14581 Bom a abundante ≥50% Amarela, mucóide
Bacillus coagulans ATCC 7050 50-100 Bom a abundante ≥50% Rosa, pequena e elevada
Bacillus pumilis ATCC 14884 50-100 Bom a abundante ≥50% Verde-clara a verde
Staphylococcus aureus ATCC 25923 50-100 Abundante ≥50% Amarela
Enterococcus faecalis ATCC 29212 50-100 Abundante ≥50%
Crescimento
(c/ suplemento FD003)
Recuperação
(c/ suplemento FD003)
Inibido 0%
Bom a abundante ≥50%
Bom-abundante ≥50%
Inibido 0%
Inibido 0%
Pobre 10-20%
Inibido 0%
Inibido 0% Amarela

36. M1469
AGAR HIFLUORO PSEUDOMONAS BASE
AGARHIFLUOROPSEUDOMONASBASE
Composição Princípio e Interpretação
Procedimento de Preparo
Avaliação de Resultados
Controle de qualidade
Agar recomendado para isolamento seletivo de Pseudomonas aeruginosa a partir de espécimes clínicos e não clínicos pelo método
fluorogênico.
Para Identificação Fluorogênica de Pseudomonas
Ingredientes g/L
Digesto pancreático de gelatina 18.00
Cloreto de magnésio 1.40
Sulfato de potássio 10.00
Cetrimida 0.30
Mistura Fluorigênica 2.05
Agar 15.00
pH Final (a 25°C): 7.2 ± 0.2
Dissolva 46.75 gramas em 1000mL de água destilada contendo
10mL de glicerol. Ferva para dissolver o meio completamente.
Esterilize autoclavando a 1atm de pressão a (121°C) por 15
minutos. Misture bem e distribua em placas de Petri estéreis.
Aparência do pó: Pó de cor creme a amarela, homogêneo e pó livre
circulante.
Solidificação: Firme, comparável com Agar gel 1.5%.
Cor e Transparência do meio preparado: Cor âmbar claro, gel
opalescente com ligeira precipitação em placas de Petri.
Reação: A reação da solução aquosa de 4.67% apresenta pH final
de 7.2 ± 0.2 a 25°C.
Condições de Armazenamento: Armazenar o pó resfriado entre 2 e
8°C. Utilize antes de expirar a data de validade.
Referências Bibliográficas:
1. King, Ward and Raney, 1954. J. Lab. Clin. Méd., 44:301.
Características da cultura após incubação a 35-37ºC por 24-48 horas.
Pseudomonas aeruginosa (também conhecida como Pseudo-
monas pyocyanea) é um bacilo gram-negativo aeróbio.
Como outras Pseudomonas, P. aeruginosa secreta uma varie-
dade de pigmentos, incluindo a piocianina (azul-esverdeada),
a fluoresceína (verde-amarelada e fluorescente) e a piorubina
(vermelho castanho). King et al. desenvolveram o Agar Pseu-
domonas P (Meio King A) para aumentar a produção pio-
cianina e piorubina e Agar Pseudomonas F (Meio King B) para
o aumento da produção de fluoresceína (1). O Agar HiFluoro
Pseudomonas Base foi elaborado baseado na fórmula descrita
por King et al. (1), exceto pela mistura fluorogênica. Este é um
usado como meio seletivo para o isolamento de P. aeruginosa
de amostras de pus, escarro e drenos etc.
A cetrimida (brometo de cetiltrimetilamônio) foi incorporada
para inibir bactérias que não sejam Pseudomonas aeruginosa.
Este atua como um composto quaternário de amônio, deter-
gente catiônico, o qual causa liberação de nitrogênio e fósforo
das outras células bacterianas que não sejam Pseudomonas
aeruginosa. Pseudomonas aeruginosa quebra o composto
fluorogênico liberando o fluorógeno, o qual produz uma fluo-
rescência visível sobre luz UV de comprimento de onda longo.
33
Organismos Inóculo (UFC) Crescimento Recuperação Fluoresceína (sob UV)
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 50-100 Bom a abundante ≥50% Positiva
Stenotrophomas maltophila ATCC 13637 Inibido 0% -
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Inibido 0% -
Escherichia coli ATCC 25922 Inibido 0% -
≥103
≥103
≥103

37. M1465
AGAR HICOLIFORME RÁPIDO
ComposiçãoPrincípio e Interpretação
Procedimento de Preparo
Avaliação de Resultados
Controle de qualidade
Agar utilizado para identificação de Escherichia coli e coliformes totais, que utilizam a combinação cromogênica e fluorogênica como
substrato em amostras de água.
Para Identificação e Diferenciação Fluorogênica de E. coli e Coliformes.
Ingredientes g/L
Peptona especial 5.00
Cloreto de Sódio 5.00
Sorbitol 1.00
Fosfato dipotássico 2.70
Fosfato ácido de potássio 2.00
Lauril sulfato de sódio 0.10
Substrato cromogênico 0.08
Substrato fluorogênico 0.05
IPTG (1-Isopropil-D- 1- tiogalactopiranosideo) 0.10
Agar 15.00
pH Final (a 25°C): 6.8 ± 0.2
Dissolva 31.03 gramas do meio em 1000mL de água destilada.
Aqueça para dissolver o meio completamente. Esterilizar
autoclavando a 1atm de pressão a (121°C) por 15 minutos.
Dispense como desejar.
Aparência do pó: Pó creme a bege, homogêneo e livre circulante.
Solidificação: Gel firme comparável a um Agar gel 1.5%.
Cor e Transparência do meio preparado: Cor amarela clara, gel
claro a levemente opalescente em placas de Petri.
Reação: A solução aquosa a 3.1% (peso/volume) apresenta pH
final de 6.8+0.2 a 25°C.
Condições de Armazenamento: Armazenar o pó resfriado entre 2 e
8°C. Utilize antes de expirar a data de validade.
Referências Bibliográficas:
1. Hahn G. And Wittrock E., (1991), Acta Microbiologica Hungarica 38 (3-4): 265-271
2. Manafi. M. and Kneifel W., (1989), Zbl. Hygiene and Umweltemedizin 189:225-234
3. Manafi M., (1990), Forum Stadte-Hygiene 41:181-184.
4. Manafi M., (1991), Ernahrung / Nutrition, 15, Nr. 10.
5. Manafi M. and Kneifel W., (1991), Acta Microbiologica Hungarica 33(3-4):293-304.
6. Manafi M., Kneifel B. and Bascon S., (1991), Microbiol. Rev., 55:335-348.
Características da cultura após incubação a 35-37°C por 18-24 horas.
O Meio HiColiformes Rápido é a modificação do caldo LMX
descrito por Manafi e Kneifel (2). Este meio é usado para a
detecção simultânea de coliformes totais e Escherichia coli em
amostras de água com base nos substratos cromogênicos e
fluorogênicos (1-6).
A peptona especial é rica em triptofano e fornece nutrientes
essenciais para o crescimento e permite a detecção simultânea
da produção indol. O sorbitol fornece uma fonte de carbono.
Os sais de fosfato proporcionam o tamponamento para
crescimento rápido de coliformes. O lauril sulfato de sódio
torna o meio seletivo inibindo a microflora contaminante,
especialmente organismos gram-positivos. O Substrato
fluorogênico é clivado pela enzima β-D-glicuronidase, o qual
é especificamente encontrada em Escherichia coli. A reação é
indicada por uma fluorescência azul sob luz UV. A presença de
coliformes totais é indicada por um coloração das colônias de
azul-esverdeada devido a clivagem do substrato cromogênico.
O IPTG amplifica a síntese da enzima e aumenta atividade
da β-D-galactosidase. Para confirmar a presença de E. coli,
adicione 2-3 gotas de reagente Kovac sob a colônia suspeita.
A mudança da coloração da colônia para vermelho confirma a
presença de E. coli.
34
AGARHICOLIFORMERÁPIDO
Organismos Inóculo (UFC) Crescimento Recuperação Fluorescência (sob UV)
Enterobacter aerogenes ATCC 13048 50-100
50-100
50-100
50-100
Abundante ≥50% Negativa
Escherichia coli ATCC 25922 Abundante ≥50% Positiva
Klebsiella pneumoniae ATCC 13883 Abundante ≥50% Negativa
Salmonella Typhimurium ATCC 14028 Abundante ≥50%
Indol
Negativo
Positivo
Negativo
NegativoNegativa
Cor da colônia
Azul-verde
Azul-verde
Azul-verde
Amarela