Seminario 05: Avaliação de Eficácia
•
1 gostou•404 visualizações
O documento discute os desafios da pesquisa e desenvolvimento de cosméticos, incluindo a necessidade de novos ativos e estudos de eficácia e segurança. Também aborda métodos para mensurar a resposta biológica a produtos, como ensaios moleculares e biofísicos.
Recomendados
Mais conteúdo relacionado
Destaque
Destaque (20)
Semelhante a Seminario 05: Avaliação de Eficácia
Semelhante a Seminario 05: Avaliação de Eficácia (20)
Seminario 05: Avaliação de Eficácia
- 1. Estrutura, fisiologia e bioquímica da pele aplicadas à ciência cosmética. Alexandre Ferreira Avaliação de eficácia
- 2. Desafios • Necessidade de novos Apelos • Busca por novos ativos – Cosméticos x “Cosmecêuticos” • Necessidade de pesquisa & desenvolvimento • Estudos de EFICÁCIA & SEGURANÇA • Investimento $$$$$
- 3. Considerações Gerais Diretriz Estratégica (Marketing) OBJETIVO Mercado Cliente Regulamentação Benefício (valor) Evidência (Comprovação) Apelo • Hidrata • Reduz Ruga • Energiza • Despigmenta • etc... Resposta Biológica Produto MENSURAR SIM NÃO OBJETIVO O QUE ESTÁ POR TRÁS DA MENSURAÇÃO!?!?!?!?
- 4. Senso Crítico CONHECIMENTO Método Sistemático Impessoal Apenas Operacional Como é CRIADO o conhecimento no Mundo Moderno???? Melhoria de Processos Permeia as Organizações Não está restrito à Pesquisa Básica Princípio de operação da Ciência Básica MÉTODO CIENTÍFICO Resposta: Ler MUITO!!!
- 5. Método Científico Observação Sistemática Fenômeno Hipótese Coerência Testável Bibliografia Teoria Científica Previsões Experimentação Resultados SIM NÃO Nova Hipótese Validam Hipótese? CONHECIMENTOLaboratórios
- 6. Aplicação em Processos Planejar PD(S/C)A Fazer Estudar Agir • Experimentação • Teste de novos processos Oportunidade • Definição de Hipóteses • Desenho experimental • Analise dos Resultados • Validação da Hipótese CheckStudy Implementação de melhorias SIMNÃO Nova Hipótese
- 8. Por Trás do Sim/Não MENSURAR SIM NÃO Falso Negativo ERROS ACONTECEM!!!!! Falso Positivo Impacto na Organização Impacto no Cliente Não Deixe de Acreditar Seja Desconfiado A INCERTEZA É INERENTE DA EXPERIMENTAÇÃO Prejuízo SENSO CRÍTICO NA INTERPRETAÇÃO DO RESULTADO
- 9. Experimentação • Por natureza é uma atividade artesanal • Objetivo: – Mensurar uma resposta e gerar evidências para testar uma hipótese • Muito dependente do pessoal (equipe) • Mais diversas fontes de variação • Como detectar falhas em uma única experimentação?? Não é possível!!! Desenvolvimento mais suscetível
- 10. O QUE ESTÁ POR TRÁS DA MENSURAÇÃO? Por trás da Mensuração MENSURAÇÃO DESENHO EXPERIMENTAL SIGNIFICADO BIOLÓGICO DO TESTE E RESULTADOS METODOLOGIA ANÁLISE ESTATISTICA INCERTEZA FORMA DE EXECUÇÃO ASPECTOS ÉTICOS O QUE FOI MEDIDO?
- 11. Escolhendo o Apelo Mercado APELO Diretriz Estratégica FÁCIL “Reduz Ruga” “Induz Colágeno” “Hidrata a pele” “Revitaliza a pele” “Induz a regeneração celular” “Energiza a pele” DIFÍCIL Mecanismo de Ação Produto É RELEVANTE??? Mecanismo biológico É COMPATÍVEL??
- 12. Base Científica FENÔMENO BIOLÓGICO J K E G I L M G H N A B C D E F PROCESSO FISIOLÓGICOMECANISMO DE AÇÃO RESPOSTA DESEJADA
- 13. O que será mensurado? J K E G I L M G H N A B C D E F PRODUTO J K E G I L M G H N A B C D E F APELO Resposta Biológica Medição direta Redução de Rugas ↑ Colágeno Tipo I ↑ RNA Colágeno Tipo 1 ↑ Glicosaminoglicanas ↓ ROS Medição Indireta Suporta o Apelo???
- 15. Pessoal • Qualificação • Treinamento – Validação do treinamento • Costuma ser uma das maiores fontes de variação dentro de um método
- 16. Equipamentos • $$$$$$$ • Precisão • Grau de automação • Qualidade da capacidade de mensuração • Passível de calibração • Disponibilidade manutenção • GRANDE GARGALO PARA MUITOS LABORATÓRIOS
- 17. Estrutura Física • Fluxo de circulação • Facilidade de limpeza • Qualidade da rede elétrica • Qualidade da fonte de água • Prática de segurança
- 18. Procedimento • Origem – Normas / Guias – Artigos científicos – Desenvolvimento interno • Aceitação – Aprovado pela comunidade científica – De acordo com as teorias vingentes – Regulamentado
- 19. Procedimento MENSURAÇÃO MODELO INDUÇÃOUSO DOS EQUIPAMENTOS DOCUMENTAÇÃO PREPARAÇÃO DOS REAGENTES DESENHO EXPERIMENTAL ANÁLISE DOS RESULTADOS RESULTADO CONCLUSÃO ou ????????
- 20. Modelo Animal In Vitro Humano Pré-Clínicos Clínicos
- 21. Obtenção das Culturas • Obtenção do explante • Separação do tecido • Digestão enzimática • Cultura em meio seletivo • Tripsinização diferencial • Obtenção de culturas puras
- 22. Tipos de culturas Queratinócitos FibroblastosMelanócitos
- 23. ATERAÇÃO FISIOLÓGICA MORTE MODELO MULTIPLICAÇÃO SECREÇÃO ADIÇÃO DE AGENTE INDUTOR PRODUTO Indução & Resposta RESPOSTA
- 24. Mensuração J K E G I L M G H N A B C D E F PROCESSO FISIOLÓGICO RESPOSTA DESEJADA MENSURAR SUBJETIVA OBJETIVA FORMA NÃO PARAMÉTRICA PARAMÉTRICA A, B, C, D, E ESCALA 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 INFLUENCIA FORTEMENTE O DESEMPENHO DO MÉTODO
- 25. A escolha do Método Qual método escolher???? RESPOSTA MÉTODO a PERGUNTA HIPÓTESE MÉTODO b MÉTODO c MÉTODO d etc... Relevância Preço Desempenho
- 26. Parâmetros de desemenho do Método MÉTODO Repetibilidade Reprodutibilidade VARIAÇÃO Exatidão Seletividade Robustez DESEMPENHO Linearidade Sensibilidade Limite de Detecção Limite de Quantificação Faixa de Trabalho CORRELAÇÃO INCERTEZAPRECISÃO Parâmetros
- 27. Parâmetros Interligados Repetibilidade Exatidão Reprodutibilidade Seletividade Linearidade Sensibilidade Limite de Detecção Limite de Quantificação Faixa de Trabalho Robustez PERFORMANCE
- 28. Exatidão e Precisão Exatidão Precisão EXATIDÃO: • Capacidade de entregar o valor verdadeiro • Desvios do método • Fácil correção PRECISÃO: • Capacidade de repetir o resultado • Inerente do método • Difícil correção
- 29. Precisão REPETITIVIDADE Reprodução do resultado após repetitivos experimentos REPRODUTIBILIDADE Reprodução do resultado em laboratórios Distintos Precisão Intermediária Reprodução dos resultados dentro de diferentes variáveis •Técnicos •Equipamentos •Dias Estudo de Proficiência Provedores de ensaios de proficiência Laboratório 1 Laboratório 2 Laboratório 3 Laboratório n Validação Treinamento Validação Equipamento • Coordena atividades • Oferece amostras de referência • Analisa os dados
- 31. A incerteza Método 1 Método 2 Resposta obtida em 1 experimento Universo de respostas possíveis Frequência Resposta Frequência Resposta Respostas unidimensionais
- 33. Seletividade • Capacidade de discriminar a resposta verdadeira de respostas falsas • Suscetibilidade a interferentes • Falso positivo Método Pouco Seletivo Método Muito Seletivo
- 34. Robustez • Capacidade de tolerar variações em parâmetros aos quais o método é sujeito Umidade Lote Reagentes pHReagentes Temperatura Parâmetros comuns Alterações na Rede elétrica
- 35. Desenho Experimental • Garantir obtenção da resposta real – Definição dos controles – Necessidade de brancos / Placebo • Garantir que resultado represente o que seria obtido em uma população – Número de réplicas – Aleatorização • Evitar tendencia – Estudo mono ou duplo cego
- 36. Análise de Resultados CONCLUSÃO RESULTADO NÃO SIM TALVEZ ANÁLISE CRÍTICA GESTÃO DE RISCOS
- 37. Tipos de Distribuição de Dados Frequência Resposta Resposta Frequência Normal Não Normal • Resultados paramétricos • Médias • Métodos analíticos • Resultados não paramétricos • Análises sensoriais
- 38. Distribuição Normal Frequência Resposta População de n respostas obtidas Resposta média 99% 0,5%0,5% 0,01 95% 2,5%2,5% 0,05 p-valor Intervalo de Confiança
- 39. A Variação Frequência Resposta Método 1 Método 2 Resposta Esperada X R Y
- 40. Comparando Dois Resultados Frequência Resposta Dado 1 Análise Estatística X R X = R ou X ≠ R Teste T de Student X < R X > R Bilateral Unilateral X Dado 2
- 41. Dado 2 R2 Analisando Vários Resultados Frequência Resposta Dado 1 ANOVA (Análise de Variância) R1 Dado 2 R2
- 42. Apresentação dos resultados * Resultado = X ± Y Valor Resposta Grupo 1 Grupo 2 Valor Resposta Amostra 1 Grupo 2 Grupo 3 a a,b b Amostra Resultado 1 5 ± 1 a,b 2 8 ± 2 c 3 6 ± 1 c 4 4 ± 2 a,c Nível de Significância: 5; 1; 0,1% Melhor se Incerteza
- 43. Conclusões • Não terceirize a responsabilidade • ANALISE OS RESULTADOS CRITICAMENTE • Exija apresentação clara dos resultados através de relatório detalhado (caso se trate de uma pesquisa) • Ensaios – sempre que disponível apenas acreditados • Fundamental uma análise estatística
- 44. Classes de Experimentação Ensaio Pesquisa • Controle de qualidade • Desenvolvimento • POPs • Protocolo + POPs • Experimentação Única • Múltiplos experimentos • Sujeito a validação • Não validável • Rigidez • Flexibilidade • Sem margem a interpretação • Com margem a interpretação • Pessoal treinado na execução • Pessoal com conhecimento no tema
- 45. Garantia da qualidade Controle de Qualidade Pesquisa Inovadoras NÃO Estudo com Animais Estudo in vitro Estudo Clínico Boas Práticas Laboratoriais (BPL) (Guia) Boas Práticas Clínicas (BPC) (Guia) Certificação PesquisasEnsaios Acreditação ISO 17.025 SIM (Norma)
- 46. Características Gerais • Foco na operação (laboratório) • Estratégia (comercial / Administrativa) não é abordada – Exceto o que impacta no laboratório • Estrutura da documentação • Organização da Equipe • Fluxo geral de trabalho • Adequação de parte física laboratorial
- 48. Boas Práticas Laboratoriais Laboratório Patrocinador Equipe Pesquisador Principal Demais Membros
- 49. Boas Práticas Clinicas Laboratório CEP Patrocinador Sujeito de Pesquisa Equipe Pesquisador Principal Demais Membros
- 51. Conflito de Interesse Laboratório Fabricante OBJETIVO Cliente OBJETIVO Cliente Pressão
- 52. Escolha de um laboratório • Visite o laboratório • Quando disponível preferência para contratar laboratórios certificados/acreditados • Qualifique o laboratório através de uma auditoria – Sistema de documentação – Acompanhamento do teste
- 53. Medidas Biofísicas • Medidas da elasticidade da pele • Medidas da hidratação da pele • Medidas da oleosidade da pele • Avaliação clínica do estado da pele • Diminuição da irregularidade de rugas
- 54. Medidas Biofísicas • Vantagem: – utiliza como modelo experimental sistema in vivo • Desvantagem: – não permite compreender ao nível molecular a ação do produto
- 55. Ensaios Moleculares • Estimulo produção de proteínas de MEC • Inibição da produção e atividade das MMPs • Inibição da produção de RL • Estímulo a proliferação celular • Entre outros...
- 56. Ensaios Moleculares • Vantagens – Possível medir parâmetros que não podem ser medidos in vivo – Podem ser feitos em larga escala – No geral são altamente reprodutíveis com baixa variabilidade • Desvantagens – Geralmente é sistema longe do in vivo – Necessário, desenvolvimento e domínio de técnicas envolvendo alta tecnologia
- 57. Quando usar • Como teste pré-clínicos de eficácia • Para a substituição de modelos animais • Quando o parâmetro não pode ser medido in vivo • Para prospecção de ativos
- 58. Desenvolvimento • Conhecimento do processo biológico a ser medido. – Anti-envelhecimento – envelhecimento – Clareamento cutâneo – melanogêneses – Proteção Solar – produção de ROS por incidência de UV, danos ao DNA e reposta imunológica associada. • Identificação do ponto no processo que é o alicerce da resposta biológica de interesse. • Validação da técnica a ser usada.
- 59. Eficácia via tópica • Não prevê se ele permeia até o local de ação • Necessário avaliar a entrega do ativo via tópica • A eficácia de um ativo: in vitro x in vivo • Determinação de permeação percutânea in vitro
- 60. Testes in vitro • Simular in vitro processos biológicos do envelhecimento • Medir esses processos • Avaliar resposta induzida por ativo • Inferir a eficácia
- 61. Uso de Culturas de células e pele • Usadas para: – Teste eficácia – Teste de segurança • Permitem medir: – Alterações da fisiologia intra e extra celular – Indução de morte
- 62. Estresse oxidativo • Determinação da inibição do efeito biológicos de ROS – Indução de MMPs; morte celular; fatores de transcrição AP1. • Quantificação do ROS – Indireto: usando moléculas específica – Direto: EPR (Electron paramagnetic resonance)
- 63. Determinação de No. Células • Aplicado a culturas • Indicativo de proliferação, inibição de crescimento e morte – Contagem de células – Incorporação de DNA (Timina marcada) – Exclusão de corantes – Trypan Blue; – Metabolismo celular – MTT • Redução de corante pelo metabolismo celular
- 64. Danos ao DNA • Danos oxidativos ou por UV • Ensaio do cometa
- 65. Matriz Extracelular • Indução ou inibição da produção: – Proteínas de matriz – MMPs – TIMPs ADIÇÃO DE AGENTE INDUTOR
- 66. Componentes Matriz Extracelular • MMPs – atividade enzimática • Dosagem bioquímicas específicas • Técnicas imunológicas – Western Blots – Elisa (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay) • Quantificação de mRNA – Northern blots – RTPCR
- 67. Vias de Sinalização Intracelular • Fosforilação • Expressão de proteínas da via • Translocação citoplasma/núcleo
- 68. Determinação Enzimáticas • Detecção do produto – Absorção – Fluorescência – Luminescência + ENZIMA SUBSTRATO PRODUTOS
- 69. Determinação Bioquímicas • Detecção do produto – Espectroscopia – Fluorescência + COLÁGENO LIGANTE
- 71. ELISA LAVAGEM ANTICORPOREVELAÇÃO ADIÇÃO DA AMOSTRA PLACA CONTENDO ANTICORPO • Leitura – Absorção – Fluorescência – Luminescência
- 72. Northern Blot +ELETROFORESE - TRANSFERÊNCIA HIBRIDIZAÇÃO LAVAGEM REVELAÇÃO SONDA
- 74. KnowWhy treinamentos especializados Alexandre HP Ferreira, Ph.D. www.linkedin.com/company/knowwhy alexhpf@yahoo.com.br Campinas - SP www.facebook.com/KnowWhy.br twitter.com/knowwhy_br br.linkedin.com/in/alexandrehpferreira/