O documento discute identificação por DNA em odontologia forense. Apresenta princípios de polimorfismo e DNA, explicando que o DNA nuclear e mitocondrial possuem características únicas que permitem identificação. Também descreve técnicas como RFLP e PCR usadas para análise de DNA, e responsabilidades do odontolegista no manuseio correto de provas para preservação do DNA.

1. ODONTOLOGIA SOCIAL
Docente: Luciano Ladeia Jr Discentes: Bianca Bonfim
Bruna Bonfim
Enilda Gusmão
Fabrícia Santos
Geferson Santana
Iasmin Sacramento
Jessica Evans Ferraz
Maria Gabriela
Neyanne Pardim
Vitória da Conquista – BA
2017

2. IDENTIFICAÇÃO PELO DNA
EM ODONTOLOGIA
FORENSE
Vitória da Conquista – BA
24-11-2017

3. INTRODUÇÃO
• Identificação forense baseia-se no achado de
semelhanças ou de diferenças entre
individuos diferentes.
POLIMORFISMO

4. POLIMORFISMO
Podem assumir as mais formas variadas.
Somáticas
Corpóreas
Faciais
Digitais
Dentais
Algumas dessas variações são únicas, já outras não.

5. Princípios básicos exigíveis do sistema ou
procedimento identificatório:
Individualidade
Imutabilidade
PerenidadePraticabilidade
Classificação
UNICIDADE =

6. MOLÉCULA DE
DNA
Suas características são únicas para cada indivíduo, com
exceção dos gêmeos idênticos ou univitelinos.

7. • Nem todos os polimorfismos são herdados, como poderia
fazer pensar o fato de termos mencionados o DNA, existem
polimorfismos que são adquiridas ao longo da vida do
individuo e que a partir de então, se originam em marcas
diferenciadoras (cicatrizes, amputações etc.).
‘’ Marcas e Sinais individuais ’’

8. Os polimorfismos na molécula de DNA, se
encontram na base de todas as características
herdadas e não mudam ao longo do tempo,
permanecendo idênticos durante toda vida.

9. ‘’O Médico-legista é o único que pode afirmar
de que morreu um individuo, enquanto o
dentista é o único que pode dizer quem era o
individuo’’.

10. A identificação odontológica é um procedimento
excelente, embora ofereça algumas limitações.

11. Identificação dentária
Radiografias de boa qualidade
e recentes.
Encontrar profissional que tenha
nos seus arquivos as radiografias.

12. Identificação dentária
Em face de fluoretização da água, o
número de cáries e consequentes
restaurações eram em grandes auxiliares
na maioria das identificação
odontológica.Os traumatismos cranioencefálicos graves
podem tornar impossível a identificação
radiográfica.A decapitação, proposital ou acidental, da
vitima faz desaparecerem os arcos dentários
e, como consequência. A possibilidade de
identificação pelos dentes.

13. Ainda que as estruturas dentárias sejam mais resistentes ás
alterações traumáticas ou aos processos putrefativos que os
outros meios de identificação perecíveis (cicatrização,
impressões digitais etc.), é o DNA que tem maiores chances de
sobrevivência
Tecido
orgânicos e
fragmento de
osso.
Carbonizados e
imersão
profunda
DNA

14. Dermatóglifos Arcos dentais

15. O QUE É O DNA ?
O Ácido desoxirribonucleico, comumente conhecido como
DNA. É um complexo de moléculas que contém todas as
informações necessárias para construir e manter um
organismo.

16. • Estruturalmente os ácidos nucléicos encontram-se
constituídos por polímeros, isto é, cadeias de
nucleotídeos ligados entre si.
DNA RNA
Ácidos Nucléicos:

17. A Molécula de DNA – DNA Nuclear
• Estrutura química:
FOSFATO
PENTOSE
BASES
NITROGENADAS
NUCLEOTÍDEO

18. PENTOSE
DNA
RNA
DESOXIRRIBOSE
RIBOSE
PENTOSE

19. BASES NITROGENADAS
• Adenina (A)
• Guanina (G)
• Timina (T)
• Citosina (C)

20. DNA NUCLEAR
• As bases nitrogenadas
podem pertencer ao grupo
das pirimidinas –
Timina, Citosina e Uracila.
Duas bases que possui um
conteúdo hidrogênio e um
anel de nitrocarbonato.
• As bases nitrogenadas das
purinas, apresentam dois
anéis de nitrocarbonatos na
sua molécula - Guanina e
Adenina.

21. DNA NUCLEAR

22. DNA Mitocondrial (mtDNA)
Mitocôndrias são organelas extremamente
dinâmicas e que não podem estar submetidas ao
retardo, a distância da cópia, transferência,
leitura e polimerização das proteínas
enzimáticas
Necessitam de mecanismos próprios e
fisicamente mais próximos de modo a acelerar
os processos metabólicos.

23. DNA Mitocondrial (mtDNA)

24. DNA NUCLEAR DNA MITOCONDRIAL
No núcleo No citoplasma celular
Nos cromossomos Limitado às mitocôndrias
Dupla hélice linear Dupla hélice circular
Contém 6 x 10º pares de
bases
Contém 16.569 pares de
bases
Herança paterna e
materna
Herança exclusivamente
materna
Permite a identificação
somente de gerações
próximas de ambas as
linhas
Permite a identificação
através de gerações
distantes na linha
materna
Somente duas cópias em
cada célula
Centenas de cópias em
cada célula

25. DNA NUCLEAR DNA MITOCONDRIAL
Somente em células
nucleadas
Presente em células
anucleadas desde que
tenham mitocôndrias
Não se pode localizar em
hemácias
Pode-se localizar em
hemácias em sangue total
e urina
Pequenas quantidades em
restos humanos
Abundante em restos
humanos

26. UTILIDADE DO DNA
A maior utilidade do modelo de pareamento de
bases e subsequente polimerização é que uma
metade da molécula de DNA pode ser
produzida a partir da outra metade. Assim, a
sequência de bases em um filamento pode ser
utilizada para determinar a sequência de bases
do filamento oposto, ou parar criar um DNA
especifico que possa ser usado como sonda
(pobre) de hibridização.

27. ESTABILIDADE DO DNA
A molécula de DNA é extremamente resistente,
tolerado uma larga variação de temperatura,
pH, sais e outros fatores que seriam fatais para
qualquer outro dos marcadores genéticos
sorológicos
Assim, resulta fácil compreender que tanto
ossos como outros tecidos que ficaram
enterrados no solo por longos períodos por
vezes não permitem fazer a identificação pelos
meios convencionais, mormente quando o solo
é úmido.

28. POLIMORFISMOS DO DNA
• Os polimorfismos de DNA podem ser
baseados quer no comprimento dos
segmentos, quer na sequência de bases. Os
primeiros – polimorfismos baseados no
comprimento dos segmentos dos
segmentos- são uma das características do
DNA repetitivo, aquele que não codifica
nenhuma proteína (chamado junk DNA
pelos saxões)

29. • Os fragmentos de DNA variam bastante de tamanho
entre os indivíduos devido á presença de um números
variável de sequências repetitivas, em série (VNTRs).
• Os segundo- polimorfismos baseados na sequência de
bases-oferecem as informações sobre a identidade do
DNA em face da sequência de fragmentos de DNA de
tamanhos semelhantes.
POLIMORFISMOS DO DNA

30. POLIMORFISMOS DO DNA
A variações de sequências pode manifestar-se como regiões
de alelos alternativos ou de substituições de bases, adições
ou deleções. A maioria dos polimorfismos de sequência são
apenas mutações pontuais. Tanto podem ser achadas em
DNA codificante ou mesmo sem sentido (non sense).
Polimorfismos de sequência podem ser detectados, quer
através de sonda (pobens) de DNA, quer por sequenciação
direta.

31. GLOSSÁRIO
• Degradação do DNA – Corresponde a degradação do DNA da
molécula, geralmente por ruptura do filamento, modificação das
bases nitrogenadas entre as bases entre si ou com proteínas.
• Gene – unidade funcional da herança que ocupa um local especifico
ao longo de um cromossoma e que consiste em um segmento de
DNA.
• Microssatélite – repetições sequenciais de fragmentos curtos

32. GLOSSÁRIO
• Polimorfismo – cada uma das regiões de variabilidade genética que
serve como base para a distinção entre indivíduos.
• Qualidade de DNA – determinação da integridade dos filamentos de
DNA e de pureza da amostra relacionada com a quantidade de
proteína ou contaminação pelo fenol.
• Quantidade de DNA – quantificação do total de DNA em um amostra.

33. METÓDOS PARA EXAME DO DNA
Métodos mais frequentes na criminalística, em odontologia
legal:
• As manchas de sangue que se encontram sobre o instrumento
pertencem a vítima, ao vitimário ou a uma terceira pessoa?
• Pode-se identificar esse resto de arco dentário como pertencendo a
vítima NN?
• A mancha de sêmen encontrada nas vestes da vítima pertencente
ao acusado?

34. METÓDOS PARA EXAME DO DNA
A análises realizadas, nesses casos, tanto podem revelar
variações no comprimentos de fragmentos como variações
nas sequencias de bases especificas. A escolha do método
dependerá da qualidade e quantidade de DNA que possa
ser recuperado do material de prova e da amostra de
referência.

35. MATERIAIS
Maleta Envelopes Bisturi
Suabe e/ou Cotonete
(algodão ou dracon)
Touca cirúrgica Tesoura
Água destilada estéril Seringas descartáveis Palito de cutícula
Pinças Coletor universal Algodão hidrófilo
Luvas descartáveis (de
procedimento)
Tubos plásticos Fita adesiva
Máscara cirúrgica Espátula descartável Papel de oficio A4
Touca cirúrgica Estilete Isopor
Sacoss plásticos Sacos de papel Caixa de isopor

36. TÉCNICA
• Para cada tipo de material biológico com potencial uso
forense, exige-se um tipo diferente de coleta.
A Detecção
dos RFLPs
A Técnica
da PCR

37. DETECÇÃO DOS RFLS
• A técnica usa o processo de mapeamento de Southem para a
detecção dos fragmentos de DNA usando oligonucleotídeos
marcados com radioisótopos, e que serão as sondas (probes)
capazes de reconhecer um par entre milhares de fragmentos.
• O tamanho desses fragmentos é extremamente varíavel de uma
pessoa para outra em razão do número varíavel de repetições de
sequências (VNTR) que se encontram em cada fragmento.
• Observando séries de diferentes locações (loci) de VNTS, pode-se
traçar o perfíl do individuo.

38. A TÉCNICA DA PCR
• A técnica da PCR permite ter milhões de cópias de um locus
específico, e, em face do seu alto nível de sensibilidade,
consegue operar ''milagres'' em termos de identificação.
• Sua desvantagem é de que se houver DNA contaminante
estiver presente.
• Na área forense a sensibilidade do PCR possibilita a
utilização de pequenas amostras como saliva em filtros de
cigarro ou fios de cabelo, permitindo uma comparação com
outras amostras já coletadas.

39. A TÉCNICA DA PCR
Limitações:
• Vestígio de outros materiais biológicos
• Impurezas colhidas com as amostras biológicas
• Falta de padronização dos métodos de análise
• Falta de banco de dados de DNA,
• Alta dependência de produtos importados

40. SEQUÊNCIA DO DNA
MITOCONDRIAL
A análise de sequência do DNA mitocondrial é pouco
informativa. Embora as possibilidades de polimorfismo
individuais passam ser altamente informativas, não
podem ser multiplicadas entre si.

41. EM SINTÉSE
• DNA método poderoso na identificação humana.
• Dependendo da quantidade e qualidade do DNA extraído
da amostra e se for superior a 50 nanogramas de DNA de
alto peso molecular poderá processar-se um teste de RFLP.
• Degradação do DNA
• Identificação do DNA (pais e filhos)

42. A RESPONSABILIDADE DO ODONTOLEGISTA

43. CONHECIMENTO NO LABORATÓRIO
• O odontolegista deve estar preparado para, como profissional consciente,
colher as amostras e encaminha-las ao laboratório competente.
• Deve estar familiarizado com os laboratórios que processam exames de
DNA, de preferência próximos a sua área geográfica de atuação.
• Conhecer, minudentemente, as diferenças técnicas de colheita, os materiais
que eles processam, as técnicas que desenvolvem, os controles de
qualidade que aplicam aos resultados oferecidos, os cuidados para evitar ou
elidir contaminações intralaboratoriais, etc.
• Antes de elaborar o seu relatório, devera fazer a analise interpretativa dos
resultados oferecidos pelo laboratório de DNA, contatando sempre que
possível os técnicos que realizaram o exame para dirimir duvidas.

44. MANUSEIO DAS PROVAS
• É crucial que o odontolegista participe de todos os casos
que impliquem provas do tipo dental ou salivar.
• Nem sempre a colheita de vestígios ou peças dentais de
restos humanos é feita por odontolegista ou cirurgião –
dentista, mas por representante da Policia Civil ou
Militar;

45. MANUSEIO DAS PROVAS
Elementos que, por vezes não interessam ao medico forense
podem ser de extrema importância para o cirurgião dentista.
• Sangue
• Saliva
• Fontes de contaminação bacteriana:
• Fezes
• Tecidos em vias de destruição
• Vômitos
• Pelos de humanos ou animais

46. MANUSEIO DAS PROVAS
• Esses contaminantes podem agir como inibidores de
alguns procedimentos.
• Os materiais devem ser conservados em envelopes
próprios para guardar provas.
• Conservação do DNA o mais intacto possível, de modo que
não se ponha em risco ou se perca a qualidade da prova
em função de condições ambientais que podem ser
evitadas;

47. MANUSEIO DAS PROVAS
A molécula de DNA pode sofrer:
• Desnaturação por temperaturas elevadas;
• Desnaturação por pHs extremos ( 13 > pH < 4 )
• Impedimento de fazer uso das técnicas de RFPL, pela desnaturação;
• Rotura molecular por nucleasses facilitada em ambientes úmidos ou
molhados;
• Dano molecular por radiações, ultravioleta ou outras

48. DNA DE TECIDOS E
ESTRUTURAS ORAIS
• Deve ser feito um planejamento adequado
• Verificar se o dente será utilizado para
outras pesquisas
• O tecido mais rico em DNA é a polpa dental
• Peças de escolhas sempre feita a partir dos
molares
• O esmalte nunca é utilizado

49. COMO EXTRAIR MATERIAL PARA ESTUDO
DE DNA DOS DENTES
A extração de material dentário para o estudo de DNA
não é tarefa difícil, mas está cercada de algumas
exigências como:
• Trabalhar em ambiente estéril, de modo a preservar
o material contra as contaminações.
• Usar paramento cirúrgico completo
• Trabalhar preferencialmente em câmara estéril, com
pressão positiva (ambiente adiabático)
• Manter a câmara no laboratório de genética que
realiza os procedimentos de exame de DNA.
• Evitar a remessa ou envio de materiais entre o local
de coleta e processamento preparatório e até o
laboratório em que se processará o exame de DNA.

50. PASSO A PASSO
• Remover sangue ou restos de tecidos da superficie externa do dente,
opcionalmente, reservando-os em tubo estéril e em temperatura de
4 ºC.
• Retirar da superficie externa do dente, com cureta, qualquer vestigio
de placa bacteriana ou de cálculo e lavar cuidosamente.
• Se o dente estiver intacto e foi retirado recentemente do alveolo
pode ser feito uma abordagem endodôntica convencional com
instrumentação de câmara e canais radiculares.

51. • Corta o dente, por um plano horizontal, passando
teoricamente ao nível da sua porção cervical.
• Curetar as paredes da câmara pulpar, recolhendo o
tecido da polpa e o pó da abrasão em um recipiente
de boca larga.
• Finalmente, como ultimo recurso, pode ser necessária
a trituração do dente.

52. RELATÓRIO
• Independentemente do procedimento seguido, o
odontolegista ou quem suas vezes fizer, ad hoc, deverá
apresentar o relatório sob a forma de laudo, de tudo
quanto foi observado no exame.

53. DNA SALIVAR RECUPERADO DAS
MORDEDURAS HUMANAS
A saliva recuperada de materiais colhidos no local
do crime permite isolar, analisar e comparar dados
com aqueles obtidos dos suspeitos.
O DNA é isolado da saliva encontrada em:
• Escarros
• Bitucas de cigarro
• Selos de correio
• Abas de envelopes
Locais todos em que os agentes, por uma razão,
passaram a língua e deixaram restos de sua saliva.

54. Técnica
A técnica para colher material para pesquisa de DNA,
em mancha de saliva, é a seguinte:
1. Molhar um contonete em água destilada estéril
2. Rolar a extremidade do cotonete, deitado sobre a superfície da pele, na área da
mordedura e na área adjacente, circundante, cuidado de lavar e recolher os
vestígios de saliva no algodão do cotonete.
3. Deixar secar completamente, ao ar livre.

55. Técnica
4. Utilizados um segundo cotonete (swab) seco, esfregar sobre a área e
enxugar toda a “umidade” deixada pelo primeiro cotonete que ainda
persista sobre a pele.
5. Deixar secar completamente o segundo swab, ao ar livre.
6. Colocar juntos os dois cotonetes resultantes da coleta, encaminhando-os
para:
a) Analisar imediatamente no laboratório de DNA;
b) Conservar no freezer a -20 °C;
c) Guardar em um envelope dos utilizados
d) para conservar provas, para transferência
e) quer seja para o laboratório, quer para um freezer.

56. REFERÊNCIAS