1. I ENCONTRO PRONEX
“RISCO CARDIOMETABÓLICO”
Universidade Federal Fluminense - UFF
Laboratório de Ciências do Exercício - LACE
2011

2. Coordenador: Antonio Claudio Lucas da Nóbrega
E-mail: anobrega@id.uff.br
Fabricia Junqueira Fernanda Toste Felipe Pereira
Bruno Silva Adalgiza Moreno Thales Barbosa
Renata Castro Allan Kluser Thais Chrispino
Jemima Fuentes Natália Galito Thais Chequer
Lauro Vianna Renata Frauches Igor Braz
Letícia Cardoso
Júlia Bertoldi Renan Lyra Karen Oliveira
Vinicius Garcia Gabriel Espinosa Tânia Thomaz
Luis Campos Matheus Romano Aline Rabelo
João Dario Alzira Lima
Mayra Santos Maria do Socorro
Sara Carvalho
Renata Alves
Apoio:

4. Introdução
obesidade hipertensão
resistência
insulínica dislipidemia
hiperglicemia
Third Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP)
Sposito AC et al. Arq Bras Cardiol, 2007

6. Introdução
Agressões químicas, Recrutamento e adesão
mecânicas ou de monócitos à superfície
metabólicas endotelial
Bonetti PO et al. Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2003
Ross R. N Engl J Med, 1999

7. Introdução
Platelets
Monocytes
Ca2+
Shear Stress
L-Arg
eNOS
Endothelium
CaM
NADPH BH4
Smooth muscle
Adapted from Yoshizumi M et al. J Pharmacol Sci 2003;91:172-76.

8. Introdução
L-Arg eNOS
Endothelial Cell
L-Citruline NO
GTP GMPc Smooth muscle
Relaxation
Adapted from Yoshizumi M et al. J Pharmacol Sci 2003;91:172-76.

9. Introdução
Metabolic syndrome Control
Gomes VA, et al. Nitric Oxide. 2008.
Simão ANC et al. Arq Bras Endocrinol Metab. 2010.
Rao VS. Cardiology Research and Practice. 2010.

10. Introdução
Hipertensão Dislipidemia
Diabetes
Espécies reativas
de oxigênio
(EROs)
Assumpção CR. The Open Biochemistry Journal. 2008.

11. The evolving view of adipose tissue:
an endocrine organ
Old View: inert storage depot Current View: secretory/endocrine organ
Fatty acids Glucose
Fed
Tg Multiple secretory
Tg products
Tg
Fasted Muscle
Fatty acids Glycerol
Liver Vasculature
Pancreas
Lyon CJ et al 2003

12. Adverse cardiometabolic effects of products
of adipocytes
↑ Lipoprotein lipase Hypertension
↑ IL-6 ↑ Agiotensinogen
Inflammation
↑ Insulin Atherogenic
↑ FFA dyslipidaemia
↑ TNFα
Adipose
↑ Resistin
tissue
↑ Leptin
↑ Adipsin
(Complement D) ↑ Lactate
Type
↑ Plasminogen 2 diabetes
↓ Adiponectin
activator inhibitor-1
(PAI-1)
Atherosclerosis
Thrombosis
Lyon 2003; Trayhurn et al 2004; Eckel et al 2005

13. Intra-abdominal adiposity and glucose
metabolism
Glucose Insulin
1 1,2
15 1200 1,2 1,2
Area
Area
12 1 1,2
1 1 1,2 1,2
9 1,2 800
1 1
1 1,2
mmol/L
1 1 1,2
pmol/L
6
400 1,2
3 1,2
0 0
0 60 120 180 0 60 120 180
Time (min) Time (min)
Non-obese Obese low IAA Obese high IAA
IAA: intra-abdominal adiposity
Significantly different from 1non-obese, 2obese with low intra-abdominal adiposity
levels
Pouliot et al 1992

14. Abdominal obesity increases the
risk of developing type 2 diabetes
24
20
16
Relative risk
12
8
4
0
<71 71–75.9 76–81 81.1–86 86.1–91 91.1–96.3 >96.3
Waist circumference (cm)
Carey et al 1997

15. Metabolic syndrome has a negative
impact on CV health and mortality
No metabolic syndrome
25 Metabolic syndrome 25
* *p<0.001
20 20
*p<0.001 *
15 15
Mortality rate (%)
*
Prevalence (%)
10 * 10
5 * 5
0 0
CHD MI Stroke All-cause Cardiovascular
mortality mortality
Isomaa et al 2001

16. Pathophysiology of the metabolic syndrome
leading to atherosclerotic CV disease
Genetic variation Environmental factors
Abdominal obesity
Adipokines Cytokines
Adipocyte Inflammatory markers Monocyte/
Insulin resistance
macrophage
 Tg Metabolic syndrome  HDL
 BP
Atherosclerosis
Plaque rupture/thrombosis
Reilly & Rader 2003;
Eckel et al 2005 Cardiovascular events

17. ∆ média ± DP = - 3,5 ± 1,6 mmHg
T
T
T
T
P = 0,04
n = 19
Silva BM et al. Dados não publicados

18. Respostas individuais de pico do fluxo sanguíneo durante o estresse mental. ■:
antebraço experimental (tratado com L-NMMA); □: antebraço controle (não
tratado com L-NMMA)
Dietz MN et al. J Physiol, 1994

20. Variação de um único nucleotídeo em uma
sequência gênica, que ocorre em uma frequência
apreciável na população (>1%)
Mutação Polimorfismo
1%

21. Extração de Reação em cadeia da RFLP Eletroforese em
DNA polimerase (PCR) Gel de Agarose

22. Wattanapitayakul et al. TRENDS in Pharmacological Sciences 2001

23. Polimorfismos da eNOS e reatividade vascular pós-exercício
Intron 4 Posição -786
350 350
Selvagem (n = 95) Selvagem (n = 60)
Reatividade vascular (%)
Reatividade vascular (%)
* *
300 Polimórfico (n = 36) 300 * Polimórfico (n = 71)
*
* *
250 * P < 0,05 vs. BL 250 * P < 0,05 vs. BL
200 200
150 150
0 0
BL 10 60 120 BL 10 60 120
Tempo (min) Tempo (min)
Posição 894 Haplótipos
350 350
Selvagem (n = 64) *
Reatividade vascular (%)
H1: -786T/4b/894G (n = 141)
Reatividade vascular (%)
* * Polimórfico (n = 67) * *
300 300 H2: -786C/4a/894G (n = 28)
* * H3: -786T/4b/894T (n = 23)
250 * P < 0,05 vs. BL 250 † H4: -786C/4b/894T (n = 51)
† †
† P < 0,05 vs. Selvagem
200 200 * P < 0,05 vs. BL
† P < 0,05 vs. H1
150 150
0 0
BL 10 60 120 BL 10 60 120
Tempo (min) Tempo (min)
Silva BM et al. Dados não publicados

24. HIPOTENSÃO PÓS-EXERCÍCIO E POLIMORFISMOS DA eNOS
H3: presença dos
polimorfismos
região promotora (alelo C)
* P < 0,05 vs. haplótipo 3 no mesmo momento + intron 4 (alelo A)
† P < 0,01 vs. haplótipo 3 no mesmo momento
Pereira et al. Dados não publicados

25. *
*
pre Ex pos Ex
* P < 0,05 vs. grupo selvagem no mesmo momento
Rocha NG et al. Eur J Appl Physiol 2011 (in press)

26. Futuro...
Individualização de prescrições, identificação de
talentos, definição de risco, etc
=
FENÓTIPO + GENÓTIPO

27. “ERGOGENÔMICA”

28. Introdução
manutenção da revascularização do
integridade endotelial tecido isquêmico
Shantsila E et al. J Am Coll., 2007
Urbich C et al. Circ Res., 2004

29. Introdução
Shantsila E et al. J Am Coll., 2007

30. Introdução
Werner N et al. N Engl J Med, 2005

31. Introdução
6
(Após acompanhamento de 5,6 anos)
Gasto despendido em atividade física (durante basal)
U. Ekelund, S. et al. Diabetes Care 2005

32. Introdução
estilo de vida padrão + estilo de vida padrão + mudança de estilo de
placebo metformina vida: exercício + dieta
 Incidência de SM  Incidência de SM
Orchard TJ et al. Ann Int Med., 2005

33. Introdução
 30%
MORTALIDADE
por doenças
cardiovasculares
Não chegam a
 diminuição de fatores de risco
40% da redução
cardiometabólico clássicos
provocada por
(hiperlipidemia, hipertensão e resistência à insulina)
exercícios
Green DJ et al. J Appl Physiol., 2008

34. Introdução
Indivíduos com SM
Stensvold D. et al. J Appl Physiol. 2010.
Prado DM. et al. Int J Sports. 2010.

35. I
N
T
Risco Cardiometabólico Exercício físico
E
R
A
Ç
Ã
O CPE Endotélio

37. Recrutamento dos Voluntários
T
R AVALIAÇÃO CLÍNICA
A
N L
Grupo SRC Grupo CRC
S O
V N
E AVALIAÇÃO HEMODINÂMICA E CELULAR G
R Randomização
I
S exercício submáximo exercício submáximo T
A SIM NÃO SIM NÃO U
L D
AVALIAÇÃO HEMODINÂMICA E CELULAR I
Randomização N
Treinamento físico Treinamento físico A
SIM NÃO SIM NÃO L
12 semanas após
AVALIAÇÃO HEMODINÂMICA E CELULAR

38. Exercise & Sport Sciences Review 2005; 33; 84-7

40. Métodos
Acuson Cypress
versão 20.0, Siemens  Diâmetro
 Velocidade do sangue
 Fluxo
 Estresse cisalhamento
 Imagem de diâmetro da artéria:
plano longitudinal
 Imagem de velocidade:
Doppler onda pulsada
 Frequência:
Alta (magros) e Baixa (obesos)

41. Resultados
Antes do treinamento Após treinamento
5.75%
9.09%

42. Métodos
Espectroscopia Tecidual Quase Infra-Vermelha
Near-infrared spectroscopy (NIRS)
Objetivo: Comparar as respostas de oxigenação muscular
 HB
 HBO2
 THC: HB + HBO2 (fluxo sanguíneo microvascular)
 % SatHB

43. Resultados
Kluser et al. dados não publicados

44. Resultados
Kluser et al. dados não publicados

45. Introdução
manutenção da revascularização do
integridade endotelial tecido isquêmico
Shantsila E et al. J Am Coll., 2007
Urbich C et al. Circ Res., 2004

46. Métodos
Meio EGM-2 + fibronectina humana
 Tripsinização
1 x 106 MNC
• Proliferação
NAC • Migração
estufa a 37ºC
5% de CO2
Plasma
 Confirmação fenotípica:
Células
Plaquetas • DiL-acLDL
mononucleares
• Lectina UEA1-FITC
Ficoll-Hypaque
Hemácias e
granulócitos  População de interesse:
• CD34+VEGFR 2+ células
• CD133+VEGFR 2+ células
CD34-FITC
CD133-PE
VEGFR2-APC

47. Resultados
Seleção de gate

48. Resultados
Grupo SRC / Condição: exercício
controle negativo preEXE posEXE
n= 0 CPE n= 2 CPEs
Grupo CRC / Condição: exercício
controle negativo preEXE posEXE
n= 0 CPE n= 0 CPEs
Rocha et al. dados não publicados

49. Resultados
preEXE posEXE
C
O
N
T
R
O
L
E
16 µm 16 µm
S
M
I
E
N
T
D
A
R
B
O
Ó
M
L
E 16 µm 16 µm

50. Resultados
Cohen d=0,80 Cohen d=0,86
moderado moderado
Cohen d=0,26 Cohen d=0,93
pequeno moderado
Rocha et al. dados não publicados

51. Resultados
Cohen d=0,75
moderado
Cohen d=1,08
moderado
Cohen d=1,03 Cohen d=0,61
moderado moderado
Rocha et al. dados não publicados

52. Resultados
Treinamento
físico
CPEC
Exercise & Sport Sciences Review 2005; 33; 84-7

54. Padronização
1 x 105 CPE cultivadas +
meio sem fatores (EBM-2)
Células
Câmara modificada de Boyden colhidas
CPE + meio sem soro fetal bovino
24 h
EBM-2+
MTT (10L)
VEGF
4h
24 h/ 37º C
200 µL
DMSO
Filtro lavado com PBS, fixado e incubado
10 min
com DiL-acLDL/UEA1-FITC
Leitura a
490 nm

55. Padronização
DOSAGEM DE ÓXIDO NÍTRICO
Kit colorimétrico (Cayman Chemical Company, EUA)
 Coleta de sangue: 5 mL
 Desproteinização do soro  Dosagem de nitrito
Nitrato
Nitrato redutase
Óxido nítrico +
Cofatores
Nitrito
Reação colorimétrica
de Griess
 Leitor de microplacas: 550 nm

56. Padronização
 Dosagem de nitrito plasmático (NO)
 Dosagem de nitrito plasmático durante a manobra de Hiperemia Reativa
14,00
12,00
10,00
8,00
6,00
4,00
2,00
0,00
basal 10s 20s 30s 40s 50s 60s 70s

57. Padronização
DOSAGEM DO ESTRESSE OXIDATIVO
 Coleta de sangue  Estresse oxidativo:
Ácido Tiobarbitúrico
 Soro:
(TBARS)
Lipoperoxidação malondialdeído (MDA)
Curva padrão de MDA
Coloração
1,0000
y = 0,0328x - 0,0025
0,8000 R² = 0,9999  Leitor de microplacas: 532 nm
0,6000
0,4000
0,2000
0,0000
0 5 10 15 20 25 30

58. Microneurografia

59. DEXA
Absorciometria de raios X de feixe duplo