PCNA é um marcador do ciclo celular que desempenha um papel vital no metabolismo celular, coordenando múltiplas funções genéticas durante a replicação do DNA e reparação. Estudos identificaram PCNA como um fator essencial para a replicação do DNA viral e cromossômico, revelando que PCNA forma um anel ao redor do DNA que interage com proteínas envolvidas na replicação e reparação do DNA. PCNA pode sofrer diversas modificações pós-traducionais que afetam suas propried
7.optical coherence tomographyfororal mucosal lesions a review article
Antígeno de proliferação celular nuclear
1. Antígeno de proliferação celular nuclear (PCNA) é um marcador do ciclo celular. No entanto,
isto é apenas um aspecto de sua natureza. A complexidade da função PCNA é refletida na
história da sua descoberta e posterior investigação. Estudos realizados em diferentes áreas,
tais como a imunologia, proteômica e bioquímica entrecruzavam para identificar exatamente a
mesma proteína. Esta proteína foi inicialmente identificada por Miyachi 30 anos atrás como
um antígeno para doença auto-imune no lúpus eritematoso sistêmico [1].
Alguns anos mais tarde, Bravo e Celis, usando electrofuorese bidimensional do gel (2-DE)
encontraram uma proteína ácida que foi diferencialmente expressa durante o ciclo celular [2].
Assim, deram-lhe o nome ciclina[3]. O aparecimento periódico do PCNA em núcleos na faseS,
co-localizada com incorporados bromodeoxiuridina [2-4], sugeriram um envolvimento na
replicação do DNA. Mais tarde, revelou-se que PCNA e ciclinaeram a mesma proteína [5]. Um
fator essencial para SV40 (vírus símio 40) DNA replicação in vitro também foi identificada como
PCNA [6, 7]. Como o próprio nome Ciclina foi dado a uma outra classe de proteínas PCNA
ciclina / agora é geralmente chamado PCNA. bioquímicos posteriores e estudos genéticos com
levedura de brotamento PCNA demonstrou que é essencial para a replicação de DNA
cromossômico como DNA deslizamento delta braçadeira DNApolymerase [8-10]. A estrutural
análise de PCNA tem um tremendo impacto sobre os estudos de sua função (s), revelando que
PCNA é organizado como um anel de DNA que pode cercar e trabalhar como um deslizamento
pinça para DNA polimerase delta e epsilon, e uma dockingstation, ou andaime, por
outrasproteínas [11 - 16]. Muitas dessas proteínas estão envolvidas no DNA replicação de
reparo do DNA, e controle do ciclo celular. Além disso, existem muitas proteínas envolvidas na
cromatina montagem e remodelação, a coesão cromátides, transcrição e outras funções. PCNA
conhecido como dockingstation que circunda o DNA e as coordenadas múltiplas funções
genético durante a replicação do DNAe reparação [17-20]. Mas há um conjunto substancial
PCNA nucleoplásmica que pode funcionar mesmo sem interagir com o DNA [4, 21, 22]. O
crescimento relacionados propriedades de PCNA, bem como o seu físico propriedades (PI,
antigenicidade massa) foram bem conservados durante a evolução [23], sugerindo que
desempenha um papel vital no metabolismo celular.
Figura 1.Atwo-dimensional (2-DE) mapa de proteínas de MB468 andPCNAposition células. (A) Proteínas (0,4 mg)
foram separados por 2-DE (PH3-10, 13 cm - primeira dimensão, 10% SDS-PAGE, 13 cm - segunda dimensão) e
corados com Coomassie R350. identificação de proteínasDe acordo com a proteína foi feita de impressões digitais
2. (espectros) produzido pela digestão da tripsina de material de velas em gel e detectado por MALDITOF instrumento
(Waters) [35]. As proteínas marcadas são: actina (ACTB_HUMAN), aldolase A (ALDOA_HUMAN), heterogêneo
ribonucleoproteínas nuclear A2/B1 (ROA2_HUMAN), anexina A2 (ANXA2_HUMAN), anexina A1 (ANXA1_HUMAN),
stathmin (STMN1_HUMAN), alfa-enolase (ENOA_HUMAN), queratina, tipo II, sete do citoesqueleto (K2C7_HUMAN),
queratina, do tipo II do citoesqueleto 8 (K2C8_HUMAN), queratina, tipo I desidrogenase 17 (K1C17_HUMAN), do
citoesqueleto gliceraldeído-3-fosfato (G3P_HUMAN)peroxiredoxina-1 (PRDX1_HUMAN), peroxiredoxina-2
(PRDX2_HUMAN), peroxiredoxina-6 (PRDX6_HUMAN), precursor calreticulina (CALR_HUMAN), choque térmico
cognato 71 kDa (HSP7C_HUMAN), proteínas de choque térmico HSP 90-beta (HS90B_HUMAN), 78 kDa proteína
precursora de glicose-regulado (GRP78_HUMAN), 60 kDaroteína de choque térmico, precursor mitocondrial
(CH60_HUMAN)tubulina cadeia alfa-1B (TBA1B_HUMAN), a cadeia beta tubulina (TBB5_HUMAN), proteína
precursora dissulfetoisomerase (PDIA1_HUMAN) peptidil-prolilcis-transisomerase A (PPIA_HUMAN), cofilin-1
(COF1_HUMAN), proteína tumoral traducionalmente controlado 9 (TCTP_HUMAN), stathmin (STMN1_HUMAN),
fosfogliceratoquinase 1PGK1_HUMAN), proteína SET (SET_HUMAN). (B) ZoomedaroundPCNAfrom a mesma área de
2 Demap é mostrado.Tropomiosina alfa-1 (TPMI_HUMAN, 4.69/32700), tropomiosina-3 (TPM3_HUMAN, 4.68/32800),
proteína 14-3-3 epsilon (1433E_HUMAN, 4.63/29300) 14-3-3 sigma proteína (1433S_HUMAN, 4.69/27900) 14-3-3
proteína beta / alfa (1433B_HUMAN, 4.76/28082), fator de elongação 1-beta (EF1B_HUMAN, 4.5/24900),
nucleophosmin (Numatrin, B23) (NPM_HUMAN, 4.64/32700) são detectados cerca de PCNA. 3 790 S. N. vista
Proteomics do PCNA Naryzhny
Mapa 2-DE (proteoma) e PCNA
Em 1980, Bravo e Celis publicaram seus 2-DE Analiseda síntese de proteínas do
durante o ciclo celular das células HeLa[2]. Usando [35S] metionina rotulagem, eles
descobriram quetodos os polipeptídeos detectados são sintetizados em todo
do ciclo celular. Quando apareceu diferenças, foram claramente, a intensidade relativa
(taxa de síntese) eque o aparecimento de polipeptídeos de novo [2]. Como Eles
salientaram, o mais interessante foi a proteína? 36.000mol proteína ácida peso
citoarquitetural que aumentana fase S? [2]. Ultimamente, vários bancos de dados
diferentes 2-DEForam estabelecidas [24] ea posição doPCNA foi analisada e decidida
em maisdetalhe [5, 25-30]. Normalmente PCNA é visto como um único
spot. Proteína pontos toPCNAin próximos são o 2-DemapIsso pode ser limpeza
proteínas presentes em diferentesrácios. Em particular, estas incluem tropomiosinas e
diferentes formas de proteínas 14-3-3 (Fig. 1). Desdeponto isoelétrico (pI) e massa
molecular são fundamentaisparâmetros físico-químicos de qualquer proteína,
Sua estimativa correcta é muito importante. InicialEstimativas do valor da massa
PCNA Gave de 36 kDa [2,31], embora a massa teórica é de 30 kDa. Esta mudança
Os parâmetros teóricos de poderia ser o resultado demodificações pós-
translacionais. Infelizmente, algunsproteínas, como as histonas, migrar de forma
anormal no SDSPAGEbaseado em SDS anormal obrigatório ou básico personagem.
Separação em gel de acrilamida com diferentesConcentrações (poros) podem resolver
vezeso problema e dar os valores de massa mais precisa.Assim, PCNA migra como
uma única faixa em torno de36 kDa [5, 32] em gel de poliacrilamida 12-20%, mascerca
de 30 kDa, muito próximo do valor teórico, em8 gel -9% [33]. Em 2-DE (Fig. 1), PCNA
é normalmentedetectada como um ponto único, a descrita inicialmente [31].Entretanto,
a resolução, maior e melhor sensibilidadepermitem a detecção de novos ácidos e
básicosmanchas de satélite (Fig. 2) [5, 25, 28, 34]. O principal (M)local PCNA corresponde
a um polipeptídeo de pI 04:57e massa de 30 kDa. Estes números correspondem
quaseExatamente o PCNA parâmetros teóricos, mostrandoQue a maioria "do PCNA
não é pós-traducionalmentemodificados [35]. As manchas menores são produzidos
porde massa e carga turno e representam PCNA
3. Modificações [30, 34]. Essas modificações podem serbiológica (funcional) ou técnica
(produzida duranteanálise da amostra). Vários fragmentos de menor massa PCNA
(Fig. 2) são produzidas por proteólise durante 2 -Pode ser prevenida e DE, usando o
proteossomoMG132 inibidor ou tiouréia [34-36]. Esta proteóliseTambém ocorre in vivo
e, possivelmente, tem um biológicasfunção, embora a detecção de DST precisa mais
bsensíveis [34, 37]. ubiquitinação PCNA é outrabem documentado modificação [34,
38-40] Isso produzpontos de maior massa (~ 40 kDa) e PI (~ 5,0) em
o mapa 2-DE (Fig. 2). A natureza de outras modificaçõesQue produzem uma mudança
na PI PCNA é menos clara.
Apesar de várias modificações diferentes foram relatados, alguns deles podem não
serdata correta, já que conclusões nem sempre são as consistentes [30, 41-44].
Um exemplo é a questão da fosforilação PCNA,Que foi inicialmente descrito como um
mecanismo potencialfunção reguladora é PCNA. No entanto, esta questão
Abordado foi usando diversos experimentalabordagens, incluindo in vivo rotulagem,
imunoprecipitação,Western blot, de alta resolução 2-DEe espectrometria de massa
[30]. Os dados obtidosSugerir que fortemente PCNA não é fosforilada[30]. Acetilação e
desacetilação de heróis pode explicar aPCNA mudanças na carga eo deslocamentoda
produçãopontos adicionais [30]. O fator de transcrição p300Responsável e HDAC1
são, pelo menos em parte, éPCNA acetilação e desacetilação, respectivamente.PCNA
tratados com HDAC1 mostrou muito inferiorafinidade de ligação ao DNA polimerase
beta eDelta do que a amostra tratada com TSA [30]. Adiminuição na afinidade
Particularmente notável foi entrePCNA desacetilado e DNA polimerase delta.
Coerente com este resultado, desacetilado PCNAMostrou no DNA atividade de
polimerização inferiorse altamente acetiladas PCNA [30]. No entanto, oPossibilidade
de que essas isoformas (A-, B-spots, Fig. 2)Outras modificações conter 'como
[oxidação inéditos] De observação ou de metilação podem actualmente nãoSer
descartada em outubro, em particular, a metilação é essa modificação pode produzir
uma mudança no pI básicodireção (B-local), e sua presença em PCNAtem
sidoRelatados [42]. Como o pI da forma (M), principal ExatamenteCorresponde ao
valor teórico para o PCNA (pI 4,57), oCorrespondente representa o provável local
modificadoformulário. No entanto, ainda há uma chance de que uma parcela deda
proteína M no ponto contém um peptídeo TENDOSimultaneamente duas
modificações. Uma modificaçãoIsso leva a um formulário (acetilação ou oxidação,
pImudança é -0,05) e outro que leva à forma-B(Metilação, turno pi é +0,05) pode
resultar na aparente mudança no comando, e o peptídeo que Tenha a mesma PI 4,57.
PCNA na quantidade de células
PCNA foi
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