Este documento descreve um estudo que avaliou a detecção de Salmonella spp. em amostras de peito de frango artificialmente contaminadas utilizando a reação em cadeia da polimerase (PCR). A PCR foi capaz de detectar Salmonella spp. em todas as amostras em 48 horas, demonstrando ser um método rápido e eficaz para detecção de Salmonella spp. em alimentos.

1. PCR NA DETECÇÃO DE Salmonella spp. EM AMOSTRAS DE PEITO DE
FRANGO ARTIFICIALMENTE CONTAMINADAS
RAQUEL GOUVÊA1*, LEANDRO DOS SANTOS MACHADO2, SAMIRA PIROLA
SANTOS MANTILLA2, VIRGINIA LÉO DE ALMEIDA PEREIRA3, ROBSON
MAIA FRANCO4, ELMIRO ROSENDO DO NASCIMENTO3
1
Mestre em Medicina Veterinária - Higiene Veterinária e Processamento Tecnológico
de Produtos de Origem Animal - UFF, Niterói, RJ
2
Programa de Pós-graduação em Medicina Veterinária - Higiene Veterinária e
Processamento Tecnológico de Produtos de Origem Animal - UFF
3
Departamento de Saúde Coletiva Veterinária e Saúde Pública – MSV – UFF
4
Departamento de Tecnologia de Alimentos. Faculdade de Veterinária – MTA – UFF.
RESUMO
A PCR consiste na síntese de ciclos repetidos de oligo-nucleotídeos de DNA para
conduzir à replicação de sequências definidas, formando a base para a amplificação e
detecção de sequências específicas de ácido nucléico. Por detectar uma região única do
genoma bacteriano, a PCR é mais específica do que os métodos convencionais de
diagnóstico. A aplicação da PCR é uma estratégia atualmente utilizada, eficiente e
rápida, na detecção de bactérias em alimentos contaminados, tais como Listeria
monocytogenes, Campylobacter spp., Escherichia coli e Salmonella spp. O objetivo
deste trabalho foi avaliar a frequência de detecção de Salmonella spp. em 34 sub-
amostras de 25g de peito de frango artificialmente contaminados com S. Enteritidis e
determinar o tempo demandado para análise pela PCR. Para o preparo do inóculo, uma
suspensão bacteriana foi preparada pela adição de solução salina peptonada 0,1% em
cultivo de S. Enteritidis ATCC 13057 em ágar nutriente inclinado até obtenção de
turvação igual à do padrão nº1 na escala de McFarland. Alíquotas de 1mL da suspensão
bacteriana foram adicionadas às diluições das sub-amostras de 25g de peito de frango
em 225mL de água peptonada 1%. Após a incubação das amostras pré-enriquecidas a
37ºC por 24 horas, alíquotas de 1mL foram colocadas em microtubos de polipropileno
para a realização da extração do DNA bacteriano. A extração do DNA foi realizada pelo
método do fenol-clorofórmio, segundo Sambrook et al. (1989). Para a PCR, foi
utilizado um par de “primers” que amplificam 284 pares de bases, com a sequência de
oligonucleotídeos derivada do gene invA, segundo Rahn et al. (1992). O ciclo de
amplificação utilizado foi desnaturação inicial a 94ºC por 5 minutos, 35 ciclos de
desnaturação a 94ºC por 30 segundos, pareamento a 54ºC por 30 segundos e
amplificação a 72ºC por 30 segundos, com extensão final a 72ºC por sete minutos.
Como resultado, todas as amostras foram positivas na PCR e o tempo total da análise
foi de 48 horas. A PCR é um método rápido e eficaz na detecção de Salmonella spp. em
peito de frango.