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Efeito dos pesticidas na
microbiota do solo
LSN5805 - Microbiologia e Biotecnologia do Solo
Prof. Dr. Fernando Dini Andreote
Guilherme Lucio Martins
Hélio Danilo Quevedo
Luiz Gustavo Paulon Rezende
Piracicaba – 2019
Pesticidas
→ Substância química/mistura ou agente biológico que têm como objetivo:
 Impedir
 Repelir
 Mitigar
 Destruir
Um organismo
Podem ser classificados como:
Orgânicos de síntese
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Carbamatos (nitrogenados)
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À base de:
Arsênio, tálio, bário, nitrogênio,
fósforo, cádmio, ferro, selênio,
chumbo, cobre, mercúrio e zinco.
Botânicos
↓
Nicotina
Piretrina
Sabadina
Rotenona
→ Não precisam ser necessariamente venenos, mas são quase todos tóxicos ao ser
humano!
Relação pesticidas x microrganismos
 Podem ser fonte de nutrientes para um grupo e tóxicos para outro
grupo;
 Causam morte, alteram taxa de crescimento e modificam processos
metabólicos;
 Promovem adaptações, aumentando sua degradação;
 São influenciados por processos de sorção e dessorção no solo:
- Quantidade na solução, disponibilidade e degrabilidade;
 São dependentes de reações químicas e metabólicas:
- Oxidação, hidrólise, desalquilação;
 Desidrogenase (indicadora de degradação e fornecimento de energia
pela MO) é mais inibida por inseticidas > fungicidas > herbicidas
Efeito positivo na microbiota
Pesticida Solo Microrganismo Resultado Referência
Sulfentrazone Solo de milho
Bactérias e
actinomicetos
Aumento da população
Martinez et al.
(2008)
Diuron Solo arenosos
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heterotróficas
Aumento do número de
heterotróficos
Cycon e
Piotrowska-Seget
(2009)
Carbofuran Solo de arroz
Bactérias
diazotróficas
Aumento na população
fixadores de N
Jena et al. (1987)
Glifosato Solo de pinheiros Bactérias
Estimulou o crescimento
em altas doses
Ratcliff et al.
(2006)
Mancozeb
Solo franco-
siltoso
Bactérias
Aumentou a atividade de
fosfatase, protease e
amidase
Rasool e Reshi
(2010)
Clorpirifós Solo de pomar Fungos e bactérias
Em doses baixas aumentou
atividade de degradação
Wang et al. (2010)
Efeito neutro na microbiota
Pesticida Solo Microrganismo Resultado Referência
Propanil
Solo beterraba
açucareira
Bactérias
Sem alterações na
microbiota por
DGGE
Crecchio et al.
(2001)
Fenitrothion Solo pastagem Fungos e bactérias
Sem alterações nas
doses
recomendadas
Cycon e Piotrowska-
Seget (2009)
Mesotriona Chernossolo pousio Bactérias
Sem resposta na
comunidade
microbiana
Crouzet et al. (2010)
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doce
Fungos e bactérias
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(2008)
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Pesticida Microrganismo Solo Resultado Referência
Mancozeb Bactérias Solo franco-siltoso
Diminuiu a atividade
da urease e
asparaginase
Rasool e Rishi
(2010)
Thiram Fungos e bactérias Solo pastagem
Diminuiu a diversidade
na concentração de
200 mg kg-1
Cycon e Piotrowska-
Seget (2009)
Propiconazole Fungos e bactérias
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vermicompostagem
Diminuiu a atividade
de fosfatase, urease e
desidrogenase
Johnsen et al.
(2001)
Metamidofós Bactérias Solo orgânico
Diminuição na riqueza
de espécies, alterou a
estrutura da
comunidade
Wang et al. (2008)
Fatores que afetam a degradação
Degradação
microbiana
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Pesticidas nos microrganismos
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Figura: Representação da magnitude e reversibilidade das respostas dos organismos e processos à aplicação
de xenobióticos. Resposta relativa e absoluta (ex. CO2 acumulativo) em função do tempo. (Edwards, 1989.)
Crítico: > 60 dias
Tolerável: 30-60 dias
Negligível: < 30 dias
Tempo
Biopesticidas
• Incluídos entre as técnicas alternativas para alterar e
diminuir o impacto do uso de pesticidas químicos
Resistência de plantas
a pragas
conservação de
inimigos naturais
controle de pragas
/insetos
MIP
 Biopesticida:
Uso do potencial biotecnológico das funções dos organismos
Biocontrole Organismos Biotecnologia
 Plantas
 Animais
 Bactérias
 Vírus
São substâncias produzidas através de um
agente biológico que tem como objetivo
controlar determinada praga
 Biopesticidas
Pesticidas Vegetais: Rotenona, Piretrina, Azadiractina;
Tratam-se de inseticidas que degradam rapidamente
Alguns microrganismos produzem toxinas
específicas e biodegradáveis que podem ser
utilizadas como pesticidas biológicos
Biopesticidas
• Óleo de Nim (Azadirachta indica)
• ↓ População rizosférica
• ↓ Nodulação Feijão moyashi
Biopesticidas
• Bactéria (Bacillum Thuringiensis (BT);
Se alimenta da
planta
Toxina incorporada
BT
Morte do Inseto
Biorremediação
A biorremediação utiliza um arsenal já disponível de pools
de genes degradadores de pesticidas que codificam uma série de
enzimas como oxigenases, hidroxilases, hidrolases e isomerases
em populações microbianas vanguardas de solos
Processo pelo qual enzimas de organismos vivos (eg.
microrganismos, plantas) são utilizados para reduzir ou
remover - remediar - contaminações no ambiente.
Biorremediação
• Versatilidade metabólica:
• Podem desenvolver novos mecanismos
para a degradação de xenobióticos.
• DBO: Demanda Bioquímica por O2
• ↑ DBO: material de difícil degradação
Ex: Compostos inorgânicos e metais pesados
• ↓ DBO: material facilmente
biodegradável
Ex: Compostos orgânicos
Biorremediação: In Situ
Método Princípio e prática Vantagem Desvantagem
Atenuação natural
Degradação de poluentes
por microrganismos
nativos, sem estimulação
Perturbação mínima,
custo mínimo
Remediação lenta, requer
monitoramento constante,
altamente imprevisível
Bioventilação
Para solos insaturados,
bombeamento de gás no
solo para estimular a
atividade de degradação
dos organismos
Não requer escavação,
remediação em solos
profundos e em menor
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Heterogeneidade dos solos
pode afetar a eficiência do
processo
Barreira biológica
Barreiras permeáveis são
instaladas para impedir o
avanço de áreas
contaminadas
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de áreas contaminadas
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contaminada
Fitorremediação
Usar plantas e a rizosfera
para degradar os
contaminantes
Menor custo comparado
com outros métodos,
método ambientalmente
correto
Mais utilizado para metais
pesados do que
contaminantes orgânicos,
limitado a contaminações
rasas
Biorremediação: Ex Situ
Método Princípio e prática Vantagem Desvantagem
Landfarming
Solos contaminados são
escavados, misturados e
espalhados em um ambiente
controlado para degradar o
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Rápida remediação
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desuniforme dentro das
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Biorremediação
 Estimular atividade Microbiana;
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O Biochar também modifica a comunidade bacteriana do
solo modulando o pH do solo, a matéria orgânica dissolvida e
os níveis de nitrogênio e fósforo, o que influencia ainda mais a
biodegradação do Pesticida
Efeito de transgênicos na microbiota
• Reduzem o uso de herbicidas em 11-30%;
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afetam os microrganismos da rizosfera;
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bactérias.
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Efeito de transgênicos na microbiota
• T4-lisozima: Tomate, batata e tabaco para
controle de doenças de solo;
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Aplicações
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Estratégias para aplicação de pesticidas
Estratégias para aplicação de pesticidas
Estratégias para aplicação de pesticidas
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Conclusões
• O material celular dos microrganismos mortos servem de substrato
para os sobreviventes e invasores, que proliferam-se
abundantemente;
• Os resíduos de pesticidas podem servir como fonte de carbono,
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Como os pesticidas afetam a microbiota do solo

  • 1. Efeito dos pesticidas na microbiota do solo LSN5805 - Microbiologia e Biotecnologia do Solo Prof. Dr. Fernando Dini Andreote Guilherme Lucio Martins Hélio Danilo Quevedo Luiz Gustavo Paulon Rezende Piracicaba – 2019
  • 2. Pesticidas → Substância química/mistura ou agente biológico que têm como objetivo:  Impedir  Repelir  Mitigar  Destruir Um organismo
  • 3. Podem ser classificados como: Orgânicos de síntese ↓ Carbamatos (nitrogenados) Clorados Fosforados Clorofosforados Inorgânicos ↓ À base de: Arsênio, tálio, bário, nitrogênio, fósforo, cádmio, ferro, selênio, chumbo, cobre, mercúrio e zinco. Botânicos ↓ Nicotina Piretrina Sabadina Rotenona
  • 4. → Não precisam ser necessariamente venenos, mas são quase todos tóxicos ao ser humano!
  • 5. Relação pesticidas x microrganismos  Podem ser fonte de nutrientes para um grupo e tóxicos para outro grupo;  Causam morte, alteram taxa de crescimento e modificam processos metabólicos;  Promovem adaptações, aumentando sua degradação;  São influenciados por processos de sorção e dessorção no solo: - Quantidade na solução, disponibilidade e degrabilidade;  São dependentes de reações químicas e metabólicas: - Oxidação, hidrólise, desalquilação;  Desidrogenase (indicadora de degradação e fornecimento de energia pela MO) é mais inibida por inseticidas > fungicidas > herbicidas
  • 6. Efeito positivo na microbiota Pesticida Solo Microrganismo Resultado Referência Sulfentrazone Solo de milho Bactérias e actinomicetos Aumento da população Martinez et al. (2008) Diuron Solo arenosos Bactérias heterotróficas Aumento do número de heterotróficos Cycon e Piotrowska-Seget (2009) Carbofuran Solo de arroz Bactérias diazotróficas Aumento na população fixadores de N Jena et al. (1987) Glifosato Solo de pinheiros Bactérias Estimulou o crescimento em altas doses Ratcliff et al. (2006) Mancozeb Solo franco- siltoso Bactérias Aumentou a atividade de fosfatase, protease e amidase Rasool e Reshi (2010) Clorpirifós Solo de pomar Fungos e bactérias Em doses baixas aumentou atividade de degradação Wang et al. (2010)
  • 7. Efeito neutro na microbiota Pesticida Solo Microrganismo Resultado Referência Propanil Solo beterraba açucareira Bactérias Sem alterações na microbiota por DGGE Crecchio et al. (2001) Fenitrothion Solo pastagem Fungos e bactérias Sem alterações nas doses recomendadas Cycon e Piotrowska- Seget (2009) Mesotriona Chernossolo pousio Bactérias Sem resposta na comunidade microbiana Crouzet et al. (2010) Captan e Glifosato Sedimentos de água doce Fungos e bactérias Sem efeitos a nível de comunidade Widenfalk et al. (2008)
  • 8. Efeito negativo na microbiota Pesticida Microrganismo Solo Resultado Referência Mancozeb Bactérias Solo franco-siltoso Diminuiu a atividade da urease e asparaginase Rasool e Rishi (2010) Thiram Fungos e bactérias Solo pastagem Diminuiu a diversidade na concentração de 200 mg kg-1 Cycon e Piotrowska- Seget (2009) Propiconazole Fungos e bactérias Solo de vermicompostagem Diminuiu a atividade de fosfatase, urease e desidrogenase Johnsen et al. (2001) Metamidofós Bactérias Solo orgânico Diminuição na riqueza de espécies, alterou a estrutura da comunidade Wang et al. (2008)
  • 9. Fatores que afetam a degradação Degradação microbiana Temperatura Tipo da molécula Concentraçã o da molécula Tipo de solo Água Matéria orgânica Comunidade microbiana Disponibili- dade de O2
  • 10. Pesticidas nos microrganismos Baixa degradação Ligações Cl Anéis aromáticos Inibição enzimas Insolubilidade Alta adsorção Toxidez excessiva Alta degradação Adaptação Diversidade microbiana Ativação de enzimas Solubilidade Baixa adsorção Baixa toxidez
  • 11. Figura: Representação da magnitude e reversibilidade das respostas dos organismos e processos à aplicação de xenobióticos. Resposta relativa e absoluta (ex. CO2 acumulativo) em função do tempo. (Edwards, 1989.) Crítico: > 60 dias Tolerável: 30-60 dias Negligível: < 30 dias Tempo
  • 12. Biopesticidas • Incluídos entre as técnicas alternativas para alterar e diminuir o impacto do uso de pesticidas químicos Resistência de plantas a pragas conservação de inimigos naturais controle de pragas /insetos MIP
  • 13.  Biopesticida: Uso do potencial biotecnológico das funções dos organismos Biocontrole Organismos Biotecnologia  Plantas  Animais  Bactérias  Vírus São substâncias produzidas através de um agente biológico que tem como objetivo controlar determinada praga
  • 14.  Biopesticidas Pesticidas Vegetais: Rotenona, Piretrina, Azadiractina; Tratam-se de inseticidas que degradam rapidamente Alguns microrganismos produzem toxinas específicas e biodegradáveis que podem ser utilizadas como pesticidas biológicos
  • 15. Biopesticidas • Óleo de Nim (Azadirachta indica) • ↓ População rizosférica • ↓ Nodulação Feijão moyashi
  • 16. Biopesticidas • Bactéria (Bacillum Thuringiensis (BT); Se alimenta da planta Toxina incorporada BT Morte do Inseto
  • 17. Biorremediação A biorremediação utiliza um arsenal já disponível de pools de genes degradadores de pesticidas que codificam uma série de enzimas como oxigenases, hidroxilases, hidrolases e isomerases em populações microbianas vanguardas de solos Processo pelo qual enzimas de organismos vivos (eg. microrganismos, plantas) são utilizados para reduzir ou remover - remediar - contaminações no ambiente.
  • 18. Biorremediação • Versatilidade metabólica: • Podem desenvolver novos mecanismos para a degradação de xenobióticos. • DBO: Demanda Bioquímica por O2 • ↑ DBO: material de difícil degradação Ex: Compostos inorgânicos e metais pesados • ↓ DBO: material facilmente biodegradável Ex: Compostos orgânicos
  • 19. Biorremediação: In Situ Método Princípio e prática Vantagem Desvantagem Atenuação natural Degradação de poluentes por microrganismos nativos, sem estimulação Perturbação mínima, custo mínimo Remediação lenta, requer monitoramento constante, altamente imprevisível Bioventilação Para solos insaturados, bombeamento de gás no solo para estimular a atividade de degradação dos organismos Não requer escavação, remediação em solos profundos e em menor tempo Heterogeneidade dos solos pode afetar a eficiência do processo Barreira biológica Barreiras permeáveis são instaladas para impedir o avanço de áreas contaminadas Previne o espalhamento de áreas contaminadas Limitação pela profundidade da área contaminada Fitorremediação Usar plantas e a rizosfera para degradar os contaminantes Menor custo comparado com outros métodos, método ambientalmente correto Mais utilizado para metais pesados do que contaminantes orgânicos, limitado a contaminações rasas
  • 20. Biorremediação: Ex Situ Método Princípio e prática Vantagem Desvantagem Landfarming Solos contaminados são escavados, misturados e espalhados em um ambiente controlado para degradar o contaminante Rápida remediação devido ao maior controle das propriedades física, química e biológica do solo Maior custo e requer espaço para espalhar todo o solo contaminado Compostagem Biodegradação dos contaminantes por microrganismos termofílicos Requer menos espaço e atenção do que landfarming Atividade microbiana desuniforme dentro das pilhas, dependência de organismos termofílicos Biorreatores Solo contaminado é escavado e tratado em reatores onde condições físico-químicas são otimizadas Ótimo índice de remediação, controle total das condições, resultados consistentes Método mais caro, tamanho do reator se torna um fator limitante
  • 21. Biorremediação  Estimular atividade Microbiana;  Biochar: • Condicionador de Solo; • Carbono via Pirólise; • Promotor de cresc. de plantas.
  • 22. Biorremediação O Biochar também modifica a comunidade bacteriana do solo modulando o pH do solo, a matéria orgânica dissolvida e os níveis de nitrogênio e fósforo, o que influencia ainda mais a biodegradação do Pesticida
  • 23.
  • 24. Efeito de transgênicos na microbiota • Reduzem o uso de herbicidas em 11-30%; • Produzem substâncias antimicrobianas que afetam os microrganismos da rizosfera; • Efeitos na ciclagem de nutrientes; • Transferência de genes resistentes para bactérias. • Arroz transgênico: redução na colonização das raízes
  • 25. Efeito de transgênicos na microbiota • T4-lisozima: Tomate, batata e tabaco para controle de doenças de solo; • Afetou os organismos benéficos • Glifosato: Soja, milho, beterraba • ↑ Atividade microbiana • ↑ Incidência patógenos • Glufosinato: • ↓ Atividade antimicrobiana • Efeitos negativos em rizóbios, formação de nódulos e fixação de N
  • 26. Nova geração de pesticidas • Orgânicos e nanopesticidas • Inibidores de quitina • Feromônios • Dinitroanilinas • Novas formulações • A base de água • Microcápsulas • Dispersível em água • Granulados solúveis
  • 27. Nova geração de pesticidas • Pesticidas orgânicos • ↓ Resistência cruzada • Capsaicinoides • Controle de insetos e ácaros em HF • Nanoencapsulamento • Nano-inseticidas • Nano-herbicidas Nanotubos de aluminosilicatos
  • 28. Estratégias para aplicação de pesticidas Volatilização Lixiviação Hidrólise Fotólise Adsorção Fórmula Concentração Aplicações Condições climáticas Alvo: 0,1% aplicação
  • 31. Estratégias para aplicação de pesticidas WeedSeeker 2
  • 32. Conclusões • O material celular dos microrganismos mortos servem de substrato para os sobreviventes e invasores, que proliferam-se abundantemente; • Os resíduos de pesticidas podem servir como fonte de carbono, energia e nutrientes para os sobreviventes; • Os produtos promovem modificações físicas e químicas no solo, favorecendo a proliferação microbiana após o período de ação do pesticida.

Notas do Editor

  1. Populações microbianas podem inclusive adaptar-se à presença de pesticida, quer por seleção de espécies ou mudanças em seu sistema enzimático, de forma que ocorra degradação mais rápida do composto. Os pesticidas podem ter efeitos diretos nos microrganismos do solo podem provocar a morte como alterar suas taxas de crescimento e processos metabólicos, como mudanças na reprodução e no comportamento das espécies. Vários tipos de reações estão envolvidas nos microrganismos para metabolizar esses pesticidas, oxidação, hidrólise, desalquilação (remoção de um radical de uma molécula orgânica). Caracteristicas das moléculas como ligações de cloro, anéis aromáticos, ligações em sequencias terciarias e quaternárias são razoes comuns para a resistencia a biodegradação Inibição da síntese de enzimas de microrganismos capazes de degradar Insolubilidade de composto (ausência de ataques de microrganismos) Alto poder de adsorção da molécula ao solo Toxidez excessiva do composto For some microbes, applied pesticide may act as a source of nutrients and energy, whereas other group of pesticides may be toxic to other organisms (Johnsen et al. 2001). Adsorption and desorption processes regulate concentration of a contaminant in soil solution (Bonczek and Nkedi-Kizza 2007 ; Katagi 2008 ) and hence its bioavailability, bioactivity, and degradability in soil environment. application on the health soil showed a decrease in soil dehydrogenase activity with increased pesticide concentrations and toxicity increased in the order insecticide > fungicide > herbicide.
  2. Populações microbianas podem inclusive adaptar-se à presença de pesticida, quer por seleção de espécies ou mudanças em seu sistema enzimático, de forma que ocorra degradação mais rápida do composto. Os pesticidas podem ter efeitos diretos nos microrganismos do solo podem provocar a morte como alterar suas taxas de crescimento e processos metabólicos, como mudanças na reprodução e no comportamento das espécies. Vários tipos de reações estão envolvidas nos microrganismos para metabolizar esses pesticidas, oxidação, hidrólise, desalquilação (remoção de um radical de uma molécula orgânica). Caracteristicas das moléculas como ligações de cloro, anéis aromáticos, ligações em sequencias terciarias e quaternárias são razoes comuns para a resistencia a biodegradação Inibição da síntese de enzimas de microrganismos capazes de degradar Insolubilidade de composto (ausência de ataques de microrganismos) Alto poder de adsorção da molécula ao solo Toxidez excessiva do composto
  3. Respostas reversíveis podem causar efeitos depressivos temporários, permitindo avaliar o tempo necessário para a recuperação ao nível controle, podem medir o nível do impacto causado pelo pesticida Para respostas não reversíveis, há sempre um déficit no parâmetro avaliado quando comparado com a amostra padrão. Ex: fungicidas sistêmicos afetando FM. Nivel critico: > 60 dias; Tolerável: 30 a 60 dias; Negligivel: < 30 dias.
  4. Lack of persistence, rapid degradation by UV light, slow residual action, slow effect, and poor water solubility are some of the limitations associated with biopesticides
  5. Lack of persistence, rapid degradation by UV light, slow residual action, slow effect, and poor water solubility are some of the limitations associated with biopesticides
  6. Lack of persistence, rapid degradation by UV light, slow residual action, slow effect, and poor water solubility are some of the limitations associated with biopesticides
  7. Fácil remediação: compostos orgânicos Difícil remediação: organoclorados, compostos inorgânicos e metais pesados Áreas contaminadas podem desenvolver organismos capazes de degradar o elemento.
  8. Fácil remediação: compostos orgânicos Difícil remediação: organoclorados, compostos inorgânicos e metais pesados Áreas contaminadas podem desenvolver organismos capazes de degradar o elemento.
  9. São utilizados genes de degradação de pesticidas para as enzimas oxigenases, hidroxilases, hidrolases e isomerases Fitorremediação, micorremediação, micorizarremediação Principal obstáculo se da no caráter hidrofóbico da maioria dos pesticidas In situ: mais simples, requer o mínimo de atividades externas
  10. Ex situ: mais complexas, requer remoção do solo e tratamento em outra área
  11. Desenho esquematico representando os impactos diretos e indiretos de cultivos transgenios na microbiotado solo e nos processos e funções realizados por eles. Vermelhor: fontes de impacto potencial Azul: processos realizados por microrganismos Preto: grupos funcionais do solo PGP: crescimento de plantas HGT: transferencia horizontal de genes
  12. Efeito não herbicida do glifosato: a inibição da via shikimato impede a síntese de anéis aromáticos (fitoalexina) (mecanismos de defesa).
  13. Os pesticidas persistentes são aqueles que encontram-se adsorvidos à matéria orgânica do solo dependendo de sua solubilidade em água, podem permanecer por longos períodos no solo, ou podem ser metabolizados por microrganismos. Características químicas da molécula, forma e quantidade de aplicações são fatores que influenciam a persistência de pesticidas no ambiente, também é influenciado pelas condições climáticas. Podem sair do ambiente através da volatilização, lixiviação, reações químicas por hidrólise ou fotólise. The amount of applied pesticides reaching the target organism is about 0.1 %, while the remaining bulk contaminates the soil environment (Carriger et al. 2006)
  14. Atinja o alvo  Não ocorra deriva Controle a praga/doença/planta daninha  Não contamine o ambiente e o homem
  15. Atinja o alvo  Não ocorra deriva Controle a praga/doença/planta daninha  Não contamine o ambiente e o homem Condições para aplicação: Umidade: 55% Velocidade vento: 3-10 km/h Temperatura: < 30°C
  16. Atinja o alvo  Não ocorra deriva Controle a praga/doença/planta daninha  Não contamine o ambiente e o homem Condições para aplicação: Umidade: 55% Velocidade vento: 3-10 km/h Temperatura: < 30°C