O documento discute como indivíduos com síndrome metabólica apresentam número reduzido e função comprometida de células progenitoras endoteliais em comparação com indivíduos sem a síndrome. Isso pode implicar em maior risco cardiovascular nestes indivíduos. O estudo objetivou avaliar o número e atividade funcional destas células em pessoas com síndrome metabólica.

1. DECREASED NUMBER AND IMPAIRED FUNCTIONALITY OF
ENDOTHELIAL PROGENITOR CELLS IN
SUBJECTS WITH METABOLIC SYNDROME: IMPLICATIONS FOR
INCREASED CARDIOVASCULAR RISK.
Apresentado por:
Jemima Fuentes
DATA: 24/05/10

2. DECREASED NUMBER AND IMPAIRED FUNCTIONALITY OF
ENDOTHELIAL PROGENITOR CELLS IN
SUBJECTS WITH METABOLIC SYNDROME: IMPLICATIONS
FOR INCREASED CARDIOVASCULAR RISK.
I. Jialal, S. Devaraj, U. Singh, B.A. Huet
Atherosclerosis (2010)
The Laboratory for Atherosclerosis and Metabolic Research, Department of Medical Pathology and
Laboratory Medicine, UC Davis Medical Center, Sacramento, CA, and VA Medical Center, Mather, CA,
United State.

7. _______________________________________________INTRODUÇÃO
SÍNDROME
METABÓLICA
Dislipidemia
Obesidade  Glicemia (↓HDL,  LDL, Hipertensão
Central basal  triglicerídeos)
RESISTÊNCIA À INSULINA
Insulina ação  EROs
vasodilatadora, 
NO. DISFUNÇÃO  RISCO DE DOENÇA
ENDOTELIAL CARDIOVASCULAR
Lakka HM et al. JAMA 2002;288:2706-16.
Grundy et al. Circulation 2005; 112 (17): 2735 – 2752.
Carvalho MHC et al. Arq Bras Endocrinol Metab 2006;50 (2):304-312.

8. _______________________________________________INTRODUÇÃO
Alberti KGMM et al. Circulation. 2009;120:1640-1645.

9. _______________________________________________INTRODUÇÃO
Alberti KGMM et al. Circulation. 2009;120:1640-1645.

10. _______________________________________________INTRODUÇÃO
Células progenitoras endoteliais (EPCs) - Origem
Roura S & Baynes-Genis A. Nat Rev. Cardiol. 2009; 6(9):590.

11. _______________________________________________INTRODUÇÃO
Células progenitoras endoteliais – Características morfofuncionais
Tube formation
Rafii S & Lyden D. Nature Medicine. 2003; 9: 702 – 712.

12. _______________________________________________INTRODUÇÃO
Fatores que influenciam o número de células progenitoras endoteliais
↓ EPCs ↑ EPCs
Diabetes Estatinas
Obesidade Bloqueadores dos
Doença renal crônica receptores de
angiotensina
Artrite reumatóide
Agonistas do PPAR
↑ idade gama
Risco para doença
arterial coronariana
O número de células progenitoras endoteliais circulantes
é um marcador cardiovascular podendo representar uma
disfunção endotelial ou integridade vascular.
Tousoulis D, et al. Atherosclerosis 2008;201:236–47.
Fadini GP, et al. Curr Diabetes Rev 2005;1:41–58.

13. _______________________________________________HIPÓTESE
As células progenitoras endoteliais podem estar
numericamente diminuídas e funcionalmente alteradas
em homens e mulheres com Síndrome Metabólica sem
diabetes ou doença arterial coronária associada e livres
do uso de medicamentos.

14. _______________________________________________OBJETIVOS
Avaliar o número e a atividade funcional de células
progenitoras endoteliais obtidas de indivíduos com
Síndrome Metabólica, livres do uso de medicamentos
tais como: estatinas, bloqueadores do receptor de
angiotensina ou agonista do PPAR gama, bem como,
de diabetes e doença arterial coronária associada e
compará-los ao grupo controle.

15. _____________________________________________METODOLOGIA
Amostra
Panfletos e anúncios nos Jornais da cidade de Sacramento
21-70 ANOS
SÍNDROME
CONTROLE
METABÓLICA*
n= 31
n= 46
CRITÉRIOS DE INCLUSÃO
• Obesidade central • ≤ 2 aspectos de SM
• Hipertensão • s/med. para pressão
• Dislipidemia (baixo arterial
HDL, alto triglicerídeos) • Glicose (<100mg/dl)
• Hipertensão com uso • Triglicerídeos
de anti-hipertensivos. (< 200mg/dl).
* Definida utilizando no mínimo 3 dos 5 critérios da NCEP/ ATP III.
Grundy et al. Circulation 2005; 112 (17): 2735 – 2752.

16. _____________________________________________METODOLOGIA
CRITÉRIOS DE EXCLUSÃO:
 Diabetes Pós-menopausa ou em
 Aterosclerose clínica (CAD, PAD, CVD) terapia hormonal
 Fumantes Feridas
 Hipo ou Hipertireoidismo Retinopatia
 Má – absorção Cirurgia recente
Terapia com anticoagulantes Doença inflamatória ou com
 Terapia com esteróides malignidade
Drogas anti-inflamatórias CRP > 10mg/l
Estatinas e outras drogas hipolipidêmicas Exercício físico de alta
Agentes hipoglicemiantes intensidade (> 100min/semana)
Bloqueador do receptor de angiotensina
Triglicerídeos ≥ 400 mg/dl (SM)
Contraceptivos orais
Uso de suplem anti-oxidantes (últimos 6 meses)
Gravidez
Contagem de células sanguíneas anormal
Consumo de álcool > 1 dose/dia
Consumo de N-3-PUFA

17. _____________________________________________METODOLOGIA
Protocolo
 O estudo foi aprovado pelo Conselho
Exame físico Institucional da Universidade da
Califórnia.
Todos participantes assinaram o TCLE.
 Os indivíduos selecionados voltaram
História pregressa para a coleta de sangue.
Exame Bioquímico
 Contagem sanguínea
 Perfil lipídico e lipoproteico
 Uréia
 Creatinina
 Aspartato aminotransferase
 Alanina aminotransferase
 Glicose
 TSH
 Dosagem de insulina - ELISA
 HOMA – IR (glicose/insulina)

18. _____________________________________________METODOLOGIA
Quantificação de EPCs por Citometria de Fluxo
100 µl • Em duplicata
• Coeficiente de
CD34 CD34
KDR
CONT
variação de 11%
1ml Fc  /PE /PE +
Cy5 KDR • C, n=30 e SM,
n=46
Sangue Agente
heparinizado bloqueador
TAMPÃO DE LISE
FIXAÇÃO EM 1% DE
PARAFORMALDEÍDO
AQUISIÇÃO FACScan (FACS
array flow)

19. _____________________________________________METODOLOGIA
Isolamento e Cultura de Células
20ml
•Revestidas com
4x106
células Fibronectina
•Meio 199 +20%SFC+
100ng/ml
VEGF+100U/ml
penicilina+100µg/ml
streptomicina
•48h

20. _____________________________________________METODOLOGIA
Cultura de Células
Células não
centrifugadas ressuspensas replaqueadas
aderentes
•Revestidas com Fibronectina
•Meio 199 +20%SFC+ 100ng/ml VEGF+100U/ml
penicilina+100µg/ml streptomicina
• 7 dias
• Triplicata
•Troca de meio – 3 dias
106céls/poço • Análise citoquímica com Ulex/FITC, Dil – LDL,
KDR e CD 31
Ensaio de unidade Ensaio de Ensaio de formação
formadora de migração – de tubo –
colônia – Capacidade Capacidade
Capacidade migratória/ formação de novos
clonogênica angiogênese vasos

21. _____________________________________________METODOLOGIA
Análise Clonogênica – Ensaio unidade formadora de colônia
Cont, n = 25, SM, n=43
7 dia
106céls/poço
3 poços por indivíduo
Ensaio formação de tubo
• Cont, n = 15, SM, n=15
•Placa de 48 poços revestida com matrigel – 30 min a 37 C
• EPCs coradas com Dil-LDL e misturadas a HAEC
• Incubação à 37 C overnight c/ meio de cultura
• Resultado: número de células incorporadas.
Hamed et al. Cardiovascular Diabetology. 2009;8:56

22. _____________________________________________METODOLOGIA
Ensaio de migração – Técnica da câmara de Boyden modificada
Incubação por 12 h
Lavagem com PBS
Lado inferior TRIS – TRITON para lise das células migratórias
Câmara
EPCs (4 x106 céls) marcadas
com CFDA (10 uM)
Membrana com poro de 8 µm
Placa 24 poços 100 ng/ml de VEGF humano
Cont, n = 16, Mets, n=36
Resultados expressos em MFI

23. _____________________________________________METODOLOGIA
Análise Estatística
•Dados: média ± SD, mediana e diferença interquatílica (não paramétricos)
• A transformação de LOG foi aplicada antes das análises paramétricas.
• O coeficiente de correlação de Spearman foi utilizado para avaliar a
associação entre fatores de risco metabólico, o número de EPC e sua
funcionalidade.
• Modelo de regressão múltipla foi utilizado para análise dos preditores da
variável dependente EPC. As variáveis independentes analisadas foram:
idade, IMC, cintura abdominal, pressão sanguínea, glicose plasmática,
triglicerídeos, HOMA-IR, LDL-C, HDL-C e PCR.
• Versão 9.1.3 do SAS (SAS Institute, Cary, NC, E.U.A.).

24. _____________________________________________RESULTADOS

25. _____________________________________________RESULTADOS
Supplement Fig 1: Scatterplots for CD34+KDR+ EPCs from Control and Met S
Subjects
Control MetS
CD34-
CD34- CD34+KDR+ +
CD34+KDR CD34+KDR+ +
CD34+KDR
KDR+
KDR+
1
FL-1-KDR+
FL-2-KDR+ CD34-
CD34- CD34+KDR- CD34+KDR-
KDR- KDR-
FL-2-CD34+ FL-2-CD34+

26. _____________________________________________RESULTADOS

27. _____________________________________________RESULTADOS
Supplement Figure 2a: Staining for Ulex Lectin and DiI-LDL Uptake in
EPCs

28. _____________________________________________RESULTADOS

29. _____________________________________________RESULTADOS

30. _____________________________________________RESULTADOS

31. _____________________________________________RESULTADOS

32. _____________________________________________RESULTADOS

33. _____________________________________________DISCUSSÃO
Número de EPCs circulantes é um indicador independente da saúde cardiovascular.
Hipertensão1
Hiperglicemia1
Obesidade1
Dislipidemia1
Disfunção Endotelial ↓ Número de EPCs
Síndrome metabólica2
Aterosclerose1
Inflamação2
Estatinas1
Tabagismo1
Hipoglicemiantes orais2
Agonistas PPAR2
Função Endotelial/ ARBs2
↑ Número de EPCs
↑ Mobilização M.Óssea
Exercício5
Inibidores da ECA3
[1] Vasa M, et al. Circ Res 2001;89:E1–7.
[2] Fadini GP, et al. Metab Syndr Relat Disord 2009;7:5–10. Eritropoitina4
[3] Pompilio G et al. Int. J. Cardiol. (2009) 131: 156–167
[4] Lipsic E, et al. J Am Coll Cardiol 2006;48:2161–7. Estrogênio6
[5] Sandri M, et al. Circulation 2005;111:3391–9.
[6] Schnatz PF. Obstet Gynecol Surv Oct 2006;61:673–81.

34. _____________________________________________DISCUSSÃO
EPCs X Risco Cardiovascular
•Poucos autores tem analisado o número reduzido de CP e EPCs em indivíduos
com SM. Fadini et al. 2005 em diabéticos e Westerweel et al. 2008 em machos
obesos.
•Os indivíduos com síndrome metabólica apresentaram descréscimo do número
de EPCs, não eram usuários de estatinas, ARBs nem agonitas do PPAR gama.
Não apresentavam diabetes, doença arterial coronariana nem hipercolesterolemia
e eram em sua maioria mulheres (77%).
Satoh et al. 2008 encontrou aumento de EPCs em indivíduos com SM (após
evento coronário agudo). EPCs tinham decréscimo do comprimento do telômero
e aumento do dano oxidativo no DNA, sugerindo uma EPC disfuncional.
[1] Fadini GP, et al. J Am Coll Cardiol 2005;45(9):1449–57.
[2] Westerweel PE, et al. Eur Heart J 2008;29:2808–17.
[3] Satoh M, et al. Atherosclerosis 2008;198:347–53.

35. _____________________________________________DISCUSSÃO
Porque escolher as células progenitoras CD34+KDR+ ?
Dois estudos de seguimento:
Werner et al. 2005 - 519 pacientes com DAC (12 meses).
Schmidt-Lucke et al. 2005 – Indivíduos saudáveis e pacientes com evento
cardiovascular.
O número de células CD34+KDR+ apresenta correlação negativa com a função
endotelial sendo considerado um preditor independente para eventos
cardiovasculares, progressão da aterosclerose e morte por complicações
cardiovasculares.
Glicose plasmática, triglicerídeos e a PCR são variáveis preditoras de redução
do número de EPCs (CD34+KDR+).
[1] Werner N, et al. N Engl J Med 2005;353:999–1007
[2] Schmidt-Lucke C, et al. Circulation 2005;111:2981–7.

36. _____________________________________________DISCUSSÃO
Caracterização Funcional da EPCs
Pioneiro na avaliação funcional (ensaios de UFC, migração, tubulogênese) das
EPCs em indivíduos com SM x Controles.
↓ número de UFC (SM X Controle)
Análise de multivariância: IMC, HDL-C, PCR são preditores independentes para a
redução do número de colônias.
George et al., 2004 – Correlação negativa PCR X UFC de EPCs em pacientes com
angina instável.
↓ incorporação de EPCs à células endoteliais (tubulogênese) em SM x
Controles. ↓ reparo endotelial e da angiogênese em indivíduos com SM.
Análise multivariância: PCR preditor independente para a redução da
tubulogênese.
[1] George J, et al. Eur Heart J 2004;25:1003–8.

37. _____________________________________________DISCUSSÃO
(↓ sobrevida, ↓ função e
↓ diferenciação das
EPCs - ↑ EROs) 1
PCR
Desregulação das EPCs
(Biomarcador ↓ Reparo
(↓ número e ↓
inflamatório) endotelial e
tubulogênese)
regeneração
Disfunção endotelial/
altera a atividade
eNOS1
↑ PCR → Biomediador Contribui para
Disfunção da do processo Aterosclerose
EPC? da doença.
[1] Verma S, et al. Circulation 2004;109:2058–67.

38. _____________________________________________CONCLUSÃO
O estudo demonstrou pela primeira vez que, indivíduos de ambos os
sexos, não tabagistas, usuários somente de medicação anti-
hipertensiva, com SM porém sem diabetes, hipercolesterolemia ou
doença arterial coronária associada, apresentam diminuição do número
e alteração da função das células endoteliais progenitoras (EPCs)
quando comparado ao grupo controle. Este estudo preenche uma
lacuna científica sobre a atividade funcional das EPCs em indivíduos
com SM e explica em parte o risco cardiovascular aumentado em
indivíduos com SM.