Microarrays (microarranjos)

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Definição:
• É uma coleção de pontos microscópicos, usualmente preenchidos com DNA, que contém sondas para determinar moléculas-alvo produzindo resultados quantitativos.
• Uma molécula-alvo em determinada condição pode se ligar por hibridação em “arranjo” predefinido de moléculas denominadas probes (sondas) quimicamente ligadas à superfície sólida (Laminas, membranas de náilon, superfícies de quartzo, perolas revestidas)

Histórico:
• Evolução dos blot
• Existe desde 1980 e 1990
• 1ª descrição: 1995 com microarrays miniaturizados
• 1ª empresa de microarrays no mundo: Affymetrix

Principio (metodologia):
• Consiste na hibridização de uma sonda complementar (probe) e uma molécula-alvo marcada com um fluoróforo, fixadas em uma superfície sólida através de agulhas robotizadas, fotolitografia ou por impressão a jato.
• Etapas: Hibridização, aquisição de imagens e análise de dados.

Cuidados para realização do microarray:
• Os casos e os controles devem ser pareados e processados conjuntamente
• Não se deve mudar o operador da etapa de síntese ou durante as extrações de RNA
• Método de extração único
• As máquinas não devem ser diferentes
• Número de amostra bem delineado (obtenção da estatística desejada)
• Amostras em pool (conjunto de amostras testadas simultaneamente) devem ser muito bem selecionadas
• Analisar se é necessário fazer replicatas técnicas ou biológicas (técnicas: experimentos independentes com reagente e estrutura distintos; biológicas: visam a reprodutibilidade do DNA)
• DNAgenomico pode atrapalhar na hibridação especifica com as probes e ainda ser “coibridantes” em protocolos que usam cDNA

Utilização:
• Análise de expressão gênica
• Análise de mutações pontuais
• Diagnóstico de doenças infecciosas e genéticas
• Área forense
• Farmacogenômica



Referências:
http://dle.com.br/biologia-molecular-genetica-humana/analise-cromossomica-por-microarray
http://www.embl.it/training/scienceforschools/teacher_training/teachingbase/microarray_port/introduction_microarrays_port.pdf
https://pt.wikipedia.org/wiki/Microarranjo
Strachan,T; Read, A. Genética Molecular Humana. 4ª edição. Artmed: Porto Alegre, 2013.

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Microarrays (microarranjos)

  1. 1. Microarrays (microarranjos) Uniasselvi Fameblu II Acadêmica: Beatriz Henkels Engenharia Genética – 5° semestre – Biomedicina - Noturno
  2. 2. Microarray (microarranjo): O que é? É uma coleção de pontos microscópicos, usualmente preenchidos com DNA, que contém sondas para determinar moléculas-alvo produzindo resultados quantitativos
  3. 3. Histórico  Evolução dos blot  1980-1990  Edwin Southern  1ª empresa de microarrays no mundo: Affymetrix
  4. 4. Princípio (metodologia) Consiste na hibridização de uma sonda complementar (probe) e uma molécula-alvo marcada com um fluoróforo (CY3 e CY5), fixadas em uma superfície sólida através de agulha robotizadas, fotolitografia ou por impressão a jato
  5. 5. Etapas 1. Hibridização 2. Aquisição de imagem 3. Análise de dados
  6. 6. Análise de dados
  7. 7. Utilização dos microarrays  Análise de expressão gênica  Análise de mutações pontuais  Diagnóstico de doenças infecciosas e genéticas  Área forense  Farmacogenômica

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