Este estudo investigou as interações sinérgicas entre β-cariofileno, óxido de aromadendreno 2 e fitol na indução de apoptose em células cancerígenas de pele. Os resultados mostraram que as combinações destes componentes inibiram o crescimento das células cancerígenas por meio da indução de apoptose, através do acúmulo de espécies reativas de oxigênio e ativação da via apoptótica mediada por mitocôndrias. Portanto, estas combinações podem ser potencia

1. [Copaíba 008]
Óleo essencial: Pamburus missionis
Composto: β-cariofileno, aromadendreno 2 e fitol
Título: Synergistic interaction of β-caryophyllene with aromadendrene oxide 2 and
phytol induces apoptosis on skin epidermoid cancer cells
"A interação sinérgica do β-cariofileno com óxido de aromadendreno 2 e fitol induz
apoptose nas células cancerígenas da pele epidermóide"
Autor: Pavithra PS, Mehta A, Verma RS
Journal: Phytomedicine
Vol (Issue): 47
Ano: 2018
DOI: 10.1016/j.phymed.2018.05.001
TAGs: Apoptose; β-cariofileno; câncer epidermóide; fitol; óxido de aromadendreno 2; P.
missionis; sinergia; terapia de câncer; tumor maligno; câncer de pele; in vitro; atividade
citotóxica; carcinoma epidermóide; células cancerígenas; copaíba; câncer de pele não
melanoma; sinergia; aditivismo; citometria de fluxo; interações sinérgicas; efeito aditivo;
espécies reativas de oxigênio; citotoxicidade; mitocôndria; membrana mitocondrial;
citocromo C; caspases; viabilidade de células.
Sobre o artigo:
Os cânceres de pele são de longe a forma maligna mais comum de doenças em
humanos, particularmente na população branca. Sendo amplamente classificado em
dois tipos com base em sua origem: câncer de pele não melanoma (CPNM) –
carcinoma basocelular (CBC) e o carcinoma espinocelular (CEC) – e melanoma.
O CBC e o CEC desenvolvem-se nas camadas basal e escamosa (espinhosa) da
epiderme, respectivamente, e a radiação UV é a sua principal causa, que é capaz de

2. produzir mutações específicas nos queratinócitos que levam ao estágio pré-canceroso
e ao desenvolvimento do câncer de pele.
O tratamento local é determinado com base no tipo, tamanho, localização da lesão e
idade do paciente e a radioterapia e cirurgia são as principais estratégias de
tratamento.
Contudo, produtos naturais como óleos essenciais de plantas aromáticas são usados
atualmente na prevenção do câncer e em estratégias terapêuticas. Há estudos que
mostram as interações entre os componentes do OE de Cymbopogon citratus e seus
efeitos antibacterianos, onde os principais componentes ativos, geranial (α-citral) e
neral (β-citral), são potenciados por um componente secundário não ativo, o mirceno.
Nos últimos anos, estudos comparativos sobre todo o óleo essencial bruto e seu
principal composto de Cymbopogon flexuosus, Monarda citriodora e Piper cernuum
foram estudados por suas atividades anticâncer.
Em um estudo anterior, pesquisadores demonstraram a atividade apoptótica do OE de
P. missionis em células do câncer de pele (A431) e células pré-cancerosas (HaCaT),
em que a análise de GC-MS revelou a presença de β-cariofileno (25%), como o
componente principal, juntamente com 11-eudesmadieno (7%), óxido de
aromadendreno 2 (14%) e fitol (6%).
Portanto, o presente estudo investiga o papel, as interações entre os componentes do
OE de P. missionis e o mecanismo subjacente para a indução de apoptose no
carcinoma epidermóide de pele (A431) e células HaCaT (representando um estágio
inicial da ceratose do câncer de pele).
Como podes perceber, esse estudo não foi realizado com a utilização da planta
copaíba, mas os pesquisadores buscaram compreender as ações de seu principal
componente químico, o β-cariofileno, que também pode estar igualmente presente em
outros tipos de plantas. Portanto, os resultados aqui encontrados servem para
enriquecer e elucidar o mecanismo de ação desse composto sob condições diversas.

3. A análise isobolográfica, que distingue os três tipos mais importantes de interações:
adição, sinergismo, e antagonismo – e métodos de índice de combinação (análises
estatísticas) foram utilizados para detectar o tipo de interações entre os componentes
do óleo essencial.
A viabilidade celular foi utilizada para detectar a atividade citotóxica e o mecanismo da
morte celular foi estudado usando o ensaio de ligação da anexina, análise do ciclo
celular, medição da geração do potencial da membrana plasmática e espécies reativas
ao oxigênio (EROs) por citometria de fluxo.
Resultados:
As combinações de componentes de OE P. missionis foram:
● β-cariofileno / óxido de aromadendreno 2 (β-C / OA- [2])
● β-cariofileno / fitol (β-C / F)
● óxido de aromadendreno 2 / fitol (OA- (2) ) / F)
Os resultados demonstram que os componentes β-C, OA-(2) e F exerceram atividade
inibitória e apoptótica do crescimento por meio de interações sinérgicas nas
combinações β-C / OA- (2) e β-C / F e por efeito aditivo na combinação OA-(2) / F em
células A431 e HaCaT.
Além disso, a coloração DCF-DA por citometria de fluxo mostrou acúmulo significativo
de ERO nas células A431 e HaCaT tratadas com as combinações do que com os
componentes individuais.
Estudos anteriores revelaram que ERO induz apoptose, danos ao DNA, proteínas e
lipídios em células cancerosas, e podem ser citotóxicas quando seus níveis atingem
um limiar que não é mais compatível para a sobrevivência celular, o que pode causar
estresse oxidativo que impede a progressão das células cancerosas.
Ainda, a geração de ERO está supostamente envolvida na apoptose induzida por
agentes quimioterápicos por meio da ativação do receptor de morte ou vias apoptóticas

4. mediadas por mitocôndrias. E, portanto, os resultados confirmam que a apoptose
induzida por combinações foi através do acúmulo de ERO intracelular.
As mitocôndrias desempenham um papel central na apoptose, principalmente a família
de proteínas BCL-2, que inclui moléculas pró-apoptóticas (Bax, Bak) e anti-apoptóticas
(BCL-2, BCL-xl). Na verdade, a proporção entre esses dois subconjuntos ajuda a
determinar a suscetibilidade das células a um sinal de morte.
Esse estudo mostrou que o tratamento com combinações de β-C / OA-(2), β-C / F,
OA-(2) / F induziu perda do potencial de membrana mitocondrial, aumento de Bax e
diminuição dos níveis de proteína Bcl-2 levando para aumentar as razões Bax / Bcl-2.
Os oligômeros de Bax e Bak participam da formação de poros e causam
permeabilização da membrana mitocondrial externa, levando à liberação do conteúdo
do espaço intermembranar mitocondrial, incluindo o citocromo C, para o citosol.
Esses conteúdos conduzem a ativação das caspases, que são proteases que clivam e
desativam proteínas cruciais em toda a célula. Já o citocromo C, inicia a ativação da
caspase quando liberado da mitocôndria durante a apoptose.
E, portanto, as células A431 e HaCaT tratadas com as combinações mostraram
regulação do citocromo C na fração citosólica, e essa liberação do citocromo C da
mitocôndria para o citosol é essencial para a formação do apoptossomo e consequente
ativação das caspases.
A caspase-3 desempenha um papel central na execução do programa apoptótico e é
principalmente responsável pela clivagem de PARP durante a morte celular, que é uma
enzima envolvida no reparo do DNA, e sua clivagem pode inativar esse sistema de
reparo, o que de outra forma poderia impedir a progressão da apoptose.
Portanto, um evento característico da apoptose é a clivagem proteolítica de PARP, um
marcador importante para a indução de apoptose. Curiosamente, os tratamentos
combinados induziram a ativação de caspases (caspases 3, 8 e 9) e clivagem de PARP
em células A431 e HaCaT.

5. Esses resultados sugerem que as combinações β-C / OA-(2), β-C / F, OA-(2) / F
induziram a morte celular em A431 e HaCaT por meio da ativação da via apoptótica.
É interessante observar a partir dos resultados que as combinações também foram
eficazes em inibir as células A431 e HaCaT, enquanto as células normais (HMSCs)
permaneceram inalteradas após o tratamento.
Portanto, os processos citotóxicos mediados por ERO, que preferencialmente matam
ou inibem a proliferação de células tumorais, podem ser usados como uma estratégia
eficaz para direcionar e eliminar células cancerosas.
Na maioria das vezes, as bioatividades de um OE específico são decididas por um ou
dois de seus componentes principais, mas, às vezes, a atividade geral não pode ser
atribuída a nenhum dos constituintes principais e sim à presença de uma combinação
de moléculas, que pode exercer um efeito significativo.
Os experimentos realizados utilizando concentração de 100/52/26 µM respectivamente
(perto das proporções naturais) dos três componentes (β-C / OA-(2) / F) resultaram em
23% e 30% de viabilidade de células A431 e HaCaT, respectivamente.
A combinação de β-C / OA-(2) / F induziu apoptose precoce e tardia que foi semelhante
à do OE bruto e o componente principal β-cariofileno.
Os valores de IC calculados para os componentes β-C / OA-(2) / F mostraram que a
interação geral entre os componentes na indução de apoptose ocorre por meio de
sinergismo moderado em A431 e por aditivismo (quase efeito aditivo) em células
HaCaT.
Além disso, os componentes exibem interdependência entre si e a atividade do
β-cariofileno é acelerada pela presença de óxido de aromadendreno 2 e fitol na indução
de apoptose em células A431 e HaCaT.
Portanto, os resultados do estudo sugerem que combinações de β-cariofileno com
óxido de aromadendreno 2 e fitol podem ser potenciais agentes terapêuticos para o
tratamento de células pré-cancerosas e cancerígenas epidermóides da pele.

6. Na prática:
Você percebeu qual a importância dos sesquiterpenos e sua atuação contra o câncer
de pele?
A combinação de β-cariofileno com óxido de aromadendreno 2 e fitol inibiu a
proliferação de células cancerígenas da pele, induzindo a apoptose in vitro e inibindo o
processo proliferativo de células pré-cancerosas e cancerígenas.
Porém, ainda são necessários mais estudos para sua aplicação farmacológica ou
cosmética. Acredito que, logo em breve, a ciência estará esclarecendo seu potencial
clínico e disponibilizando métodos de tratamentos adjuvantes naturais com esse
composto.