Este artigo investiga os efeitos citotóxicos seletivos do óleo essencial de olíbano derivado de Boswellia carteri em células cancerígenas de bexiga. Os resultados mostraram que o óleo de olíbano suprimiu significativamente a viabilidade das células cancerígenas de bexiga, induzindo alterações morfológicas e morte celular por apoptose, sem afetar as células normais da bexiga. Além disso, o óleo modulou genes relacionados

1. [Olíbano 008]
Óleo essencial: Boswellia carteri
Composto: ácido boswélico
Título: Frankincense oil derived from Boswellia carteri induces tumor cell specific
cytotoxicity
“Óleo de olíbano derivado de Boswellia carteri induz citotoxicidade específica de célula
tumoral”.
Autor: Mark Barton Frank, Qing Yang, Jeanette Osban, Joseph T Azzarello, Marcia R
Saban, Ricardo Saban, Richard A Ashley, Jan C Welter, KarMing Fung e Hsueh-Kung
Lin
Journal: BMC Complementary and Alternative Medicine
Vol/Issue: 9 (6)
Ano: 2009
DOI: 10.1186/1472-6882-9-6
TAGs: Olíbano; Boswellia carteri; citotoxicidade; in vitro; tumor; câncer; ácido
boswélico; anti-câncer; antineoplásicas; câncer de bexiga; sistema urinário; célula
urotelial; agente intravesical alternativo; vias antiproliferativas; vias pró-apoptóticas;
apoptose; carcinoma; bexiga; células cancerígenas; resina de olíbano; câncer de
bexiga; células normais uroteliais da bexiga; viabilidade celular; morte celular;
apoptose; antiapoptótico; pró-apoptótico; alterações morfológicas; genes; DNA
genômico; genes antiproliferativos; ciclo celular

2. Sobre o artigo:
A resina de olíbano é obtida de árvores do gênero Boswellia (família Burseraceae), na
qual incisões são feitas nos troncos de suas árvores para produzir goma exsudada, que
se apresenta como resina. A resina endurece em uma goma laranja-marrom conhecida
como olíbano.
Existem inúmeras espécies e variedades de árvores de olíbano, incluindo Boswellia
serrata na Índia, Boswellia carteri na África Oriental e China, Boswellia frereana na
Somália e Boswellia sacrana na Arábia, cada um produzindo um tipo ligeiramente
diferente de resina.
As diferenças no solo e no clima criam mais diversidade nas resinas, mesmo dentro da
mesma espécie. O aroma dessas resinas é valorizado por suas supostas propriedades
curativas e qualidades superiores para rituais religiosos desde a época dos antigos
egípcios e tem sido usado em incensos, fumigantes e como fixador em perfumes.
Além disso, a resina de olíbano tem sido considerada ao longo dos tempos por ter uma
grande variedade de propriedades de apoio à saúde. As resinas de Boswellia carteri e
Boswellia serrata têm sido usadas para o tratamento da artrite reumatoide e outras
doenças inflamatórias na medicina tradicional de muitos países.
Sua atividade anti-inflamatória tem sido atribuída à capacidade da resina em regular a
produção de citocinas imunológicas e, além disso, os extratos de resinas extraídos de
espécies de Boswellia podem possuir atividades anticancerígenas – com base em suas
atividades antiproliferativa e pró-apoptótica em linhas de células de leucemia humana,
bem como sua atividade anticancerígena em modelos de câncer de pele com
camundongos. Esses resultados sugerem que a resina de olíbano contém ingredientes
ativos que modulam atividades biológicas importantes.

3. Em busca dos princípios ativos medicinais das resinas de olíbano, pesquisadores
relataram que o extrato etanólico da resina Boswellia carteri compreende 7 ácidos
boswelicos. O ácido 11-ceto-β-boswélico, o componente anti-inflamatório mais potente
da resina, bloqueia seletivamente a biossíntese de leucotrieno – um tipo de lipídio que
participa dos processos de inflamação aguda, aumentando a permeabilidade vascular e
favorecendo, portanto, o edema da zona afetada.
Além disso, os ácidos boswelicos demonstraram possuir atividades anticâncer por meio
de seus efeitos citostáticos e apoptóticos em várias linhas de células cancerosas
humanas, incluindo células de meningioma, células de leucemia, células de hepatoma,
células de melanoma e células de câncer de cólon.
O óleo de olíbano (OEF), um extrato preparado por destilação a vapor da resina de
olíbano, é um dos óleos mais comumente usados nas práticas de aromaterapia. Tem
havido um esforço científico considerável sobre a composição do óleo de olíbano de
diferentes espécies e marcas comerciais; e os seus constituintes diferem de acordo
com o clima, as condições de colheita e as fontes geográficas das resinas de olíbano.
Devido à contribuição dos ácidos boswélicos, é possível que o óleo de olíbano também
tenha propriedades anticâncer e antineoplásicas. Portanto, os pesquisadores deste
estudo buscaram analisar as propriedades do OEF em discriminar as células J82 do
câncer de bexiga e as células normais uroteliais da bexiga (UROtsa), além da analise
de viabilidade celular das células cancerígenas.
Resultados:
1. Viabilidade de células da bexiga com supressão de óleo de olíbano
Para determinar se o óleo de olíbano suprime a viabilidade das células da bexiga, as
células J82 e UROtsa foram submetidas a avaliação morfológica e avaliação de
viabilidade celular.

4. Portanto, os pesquisadores observaram que as células J82 sofreram alterações
morfológicas significativas, como o destacamento das placas de cultura de tecidos e o
encolhimento, começando dentro de 3 horas após a exposição ao óleo de olíbano.
Ainda, 24 horas após o tratamento, as células J82 se separaram completamente das
placas de cultura de tecidos, enquanto os controles não tratados permaneceram
aderentes às placas (Figura 1 A e B).
Em contraste, as células UROtsa permaneceram presas ao fundo das placas e não
mostraram alterações morfológicas perceptíveis (Figura 1 C e D).
Figura 1: Alterações morfológicas do carcinoma da bexiga J82 e células UROtsa uroteliais da
bexiga após estimulação com óleo de olíbano. Células da bexiga J82 e UROtsa foram
semeadas em placas de cultura de tecidos de 96 poços na concentração de 1 × 10 4
células /

5. mm 2
, cultivadas durante a noite quanto à aderência e deixadas sem tratamento ou submetidas
a diluição 1:1000 de estimulação com óleo de olíbano.
As imagens foram tiradas 24 horas após os tratamentos para (A) células J82 não tratadas, (B)
células J82 tratadas com óleo de olíbano, (C) células UROtsa não tratadas e (D) células
UROtsa tratadas com óleo de olíbano – usando microscópio invertido Olympus IX51.
Observe o encolhimento celular observado nas células J82 após o tratamento com óleo de
olíbano. Em contraste, as células UROtsa não experimentaram alteração morfológica
perceptível após a mesma concentração de exposição ao óleo de olíbano.
Para determinar se o óleo de olíbano afeta a viabilidade das células J82 e UROtsa, o
número de células J82 e UROtsa viáveis foi determinado seguindo várias diluições (1:
600 a 1: 1.400) de exposição ao óleo de olíbano.
Em controles não tratados, o número de células J82 viáveis e células UROtsa
aumentou 1,62 e 2,72 vezes em 24 horas após a semeadura de células,
respectivamente (Figura 2).

6. Figura 2: Estes gráficos representam a sobrevivência das células da bexiga em resposta à
exposição ao óleo de olíbano. A viabilidade celular foi determinada usando (A) um ensaio XTT
colométrico em 24 horas e (B) exclusão de azul de tripano em 3 horas após a estimulação com
óleo de olíbano. O (*) indica diferença estatística entre células J82 tratadas com óleo de
olíbano e células UROtsa.
Ambas as células J82 e UROtsa responderam ao tratamento com óleo de olíbano de
uma maneira dependente da dose. Os pesquisadores observaram que a viabilidade
celular J82 diminuiu quando as células foram tratadas com concentrações crescentes
de óleo de olíbano. Além disso, nenhuma célula J82 viável permaneceu 24 horas após
o tratamento com diluição 1:1100 de óleo de olíbano.
Em contraste, a viabilidade das células UROtsa não foi significativamente afetada pelas
concentrações crescentes de óleo de olíbano até que uma diluição 1: 600 foi aplicada
às células.
Quando as células UROtsa foram tratadas com diluição 1: 600 de óleo de olíbano, a
viabilidade celular diminuiu para 1,29 vezes em comparação com as células não
tratadas. Contudo, nenhuma célula UROtsa viável foi detectada quando a concentração
de óleo de olíbano aumentou para 1:400.

7. Com base no ensaio XTT, os valores de IC50 (as concentrações inibitórias de 50%
com óleo de olíbano) para células J82 e UROtsa foram 1:600 e 1:1250,
respectivamente.
A exclusão do azul de tripano produziu resultados semelhantes ao ensaio XTT, exceto
que as células J82 e UROtsa parecem ser mais sensíveis ao tratamento com óleo de
olíbano em diluições de 1:1300 e 1:600, respectivamente (Figura 2B).
2. Parada do ciclo celular e proliferação celular
Vários produtos gênicos identificados como genes responsivos ao óleo de olíbano
foram negativamente associados à regulação da proliferação celular e positivamente
associados à interrupção do ciclo celular.
Os genes que foram identificados como genes antiproliferativos, incluindo IL8, CLK1,
DLG1, KLF4, NEDD9, CDKN1A, IL1A, IL6 e SNFILK foram regulados positivamente em
células J82 tratadas com óleo de olíbano.
Além disso, DDIT3 juntamente com IL8 e CDKNIA sendo identificados como
responsáveis pela interrupção do ciclo celular também foram regulados positivamente
pelo óleo de olíbano.
Em contraste, H2AFX e HDAC4, genes responsáveis pelo reparo do DNA e progressão
do ciclo celular, foram suprimidos pelo óleo de olíbano. Outros genes antiproliferativos,
incluindo SSTR1, IL1A e IL6, também foram regulados positivamente entre 0,5 e 2
horas após a estimulação com óleo de olíbano.
3. Apoptose
Os níveis de um grande número de genes que são responsáveis pela apoptose foram
encontrados para serem modulados pelo óleo de olíbano.

8. Esses genes incluíram CDKN1A, DEDD2, IER3, IL6, SGK e TNFAIP3 (regulado
positivamente entre 1 e 2 horas e permaneceu regulado positivamente), bem como
GAD45B, NUDT2 e outros (regulado positivamente entre 2 e 3 horas).
Além disso, o gene de sobrevivência celular, AXL, foi regulado negativamente pelo óleo
de olíbano. No entanto, dois genes anti-apoptóticos, GSTP1 e IL1A, foram regulados
positivamente. Uma contradição semelhante foi observada com um gene pró-
apoptótico, ING4, sendo regulado negativamente.
4. Morte celular induzida por óleo de olíbano
A análise TUNEL foi realizada para determinar se as células J82 tratadas com óleo de
olíbano sofrem apoptose.
O tratamento com óleo de olíbano resultou em um aumento do número de células
TUNEL positivas de cor vermelha brilhante em comparação com as células não
tratadas (Figura 4A). Isso indica que as células foram induzidas para a morte celular
programada, a apoptose.
A fragmentação do DNA genômico foi determinada entre 1 e 6 horas em células J82
após tratamento com óleo de olíbano. Os resultados mostraram que todo o DNA
genômico permaneceu como grandes pedaços e sem formar a pequena escada –
forma estrutural do DNA (Figura 4B).
Não houve DNA genômico detectável para células J82 colhidas 12 horas após o
tratamento com óleo de olíbano.

9. Figura 4: Este gráfico representa a morte celular J82 induzida por óleo de olíbano. Para
determinar se a apoptose induzida por óleo de olíbano em células de câncer de bexiga, as
células J82 foram semeadas em placas de cultura de tecidos de 60 mm na concentração de 2
× 105
células por placa, cultivadas durante a noite quanto à aderência e deixadas sem
tratamento ou tratadas com 1:1.000 diluição de óleo de olíbano.
(A) A análise de TUNEL foi realizada 3 horas após o tratamento. As células apoptóticas com
DNA danificado foram coradas positivamente com uma cor vermelha brilhante (inserções).
(B) A fragmentação do DNA foi determinada pela separação do DNA genômico em um gel de
agaorse a 2%; e a imagem do gel foi capturada usando o sistema Gel Doc 100 (Bio-Rad,
Hercules, CA).

10. Na prática:
Como sugere o artigo, o óleo de olíbano consegue distinguir as células cancerígenas
das normais saudáveis e suprime a viabilidade das células cancerígenas. Portanto,
compreende-se que o OE pode representar um agente alternativo para o tratamento do
câncer de bexiga entre outros processos de crescimento tumoral.
Seu uso pode ser sugerido por via tópica, inalação direta ou uso interno e a associação
desses métodos tende a potencializar os efeitos do tratamento, mas atente-se sempre
às concentrações utilizadas e as condições do paciente.