O documento descreve um estudo que investigou o efeito potencializador do β-cariofileno na atividade anticâncer de outros compostos. Os resultados mostraram que concentrações não tóxicas de β-cariofileno aumentaram significativamente a atividade anticâncer do α-humuleno, isocariofileno e paclitaxel em linhagens de células tumorais, possivelmente ao aumentar a permeabilidade da membrana celular e o acúmulo intracelular desses compostos.

1. [Copaíba 002]
Óleo essencial: Copaifera spp.
Composto: β-cariofileno
Título: Potentiating effect of β-caryophyllene on anticancer activity of α-humulene,
isocaryophyllene and paclitaxel
"Efeito potencializador do β-cariofileno na atividade anticâncer do α-humuleno,
isocariofileno e paclitaxel".
Autor: Jean Legault e André Pichette
Journal: Journal of Pharmacyand Pharmacology
Vol (Issue): 59
Ano: 2010
DOI: 10.1211/jpp.59.12.0005
TAGs: Anticancerígeno; β-cariofileno; tumor; copaíba; câncer; tumor; metástase;
câncer de cólon; câncer de mama; α-humuleno; 5-fluorouracil; citotoxicidade;
isocariofileno; paclitaxel; sesquiterpenos; copaíba; in vitro; anti-inflamatório; antibiótico;
antioxidante; célula tumoral; tumor maligno; sinergia; uso tópico; Copaifera spp;
proliferação de células cancerígenas; citotoxicidade; células tumorais de
adenocarcinoma de câncer de mama humano (MCF-7); adenocarcinoma de cólon
(DLD-1); potencialização de fármacos; sinergia; proteína de resistência à múltiplas
drogas; transportadores de drogas; glicoproteína P; verapamil; hidrocarbonetos
cíclicos; terpenos; permeabilidade da membrana.
Sobre o artigo
O sesquiterpeno β-cariofileno está presente em vários óleos essenciais, como Eugenia
caryophyllata, Myrica gale e Comptonia peregrina, e é conhecido por possuir efeitos
anti-inflamatórios, anticarcinogênico, antibiótico, antioxidante e atividades de

2. anestésico local. Nos óleos essenciais, esse composto é frequentemente encontrado
misturado com isocariofileno e/ou α-cariofileno (α-humuleno).
Outros pesquisadores sugeriram que o β-cariofileno poderia aumentar a atividade
anticâncer do α-humuleno, atuando como um potencializador. E de fato, eles
conseguiram demonstrar que o β-cariofileno promove a absorção do “5-fluorouracil” na
pele humana (um fármaco utilizado para inibição da proliferação de células
cancerígenas), sugerindo que esse composto poderia aumentar o acúmulo intracelular
de agentes anticâncer, potencializando sua citotoxicidade.
Além disso, o estudo mostrou que o α-humuleno induz a depleção intracelular de
glutationa e aumenta a produção de espécies reativas de oxigênio, que podem ser
responsáveis por sua citotoxicidade.
Ainda, verificou-se que o isocariofileno é citotóxico contra todas as linhas de células
tumorais testadas, mas em contraste, o β-cariofileno não inibiu o crescimento das
células tumorais.
Em conjunto, os resultados relatados na literatura sugerem que o β-cariofileno pode
aumentar a permeação da membrana e, consequentemente, a atividade biológica dos
fármacos. Portanto, os pesquisadores deste estudo sugerem que o β-cariofileno
poderia aumentar a atividade anticâncer do α-humuleno.
Com isso, os pesquisadores buscaram investigar a atividade potencializadora do
β-cariofileno na atividade anticâncer de α-humuleno, isocariofileno e paclitaxel, nas
linhas de células tumorais de adenocarcinoma de câncer de mama humano (MCF-7),
adenocarcinoma de cólon (DLD-1) e linhas de células de fibroblastos murinos (L-929).
Além disso, o efeito do β-cariofileno no acúmulo intracelular de paclitaxel também foi
testado.
Resultados:
1. Efeito potencializador de β-cariofileno em α-humuleno e isocariofileno

3. O efeito potenciador do β-cariofileno foi avaliado em combinação com α-humuleno na
linha celular de adenocarcinoma da mama humana, MCF-7, onde as células foram
tratadas com concentrações crescentes (16, 32 e 64 mg/mL-1) de β-cariofileno,
α-humuleno ou uma combinação dos dois sesquiterpenos.
Os pesquisadores observaram que o β-cariofileno não inibiu o crescimento celular em
todas as doses testadas, mas o α-humuleno foi citotóxico a 32 e 64 mg/mL-1 (Figura
1A).
Figura 1A: Atividade potencializadora de b-cariofileno combinado com α-humuleno (A) em
linhas de células tumorais MCF-7. O β-cariofileno (10 mg/mL-1) não inibiu o crescimento
celular.
Curiosamente, os dois sesquiterpenos juntos foram significativamente mais citotóxicos
do que o α-humuleno sozinho: o α-humuleno (32 mg/mL-1) inibiu o crescimento celular
em 50% sozinho, mas diminuiu em 75% quando combinado com 10 mg/mL de
β-cariofileno, indicando que o β-cariofileno de fato potencializa a citotoxicidade do
α-humuleno.

4. O efeito potencializador do β-cariofileno também foi avaliado com o isocariofileno, e
como mostrado na Figura 1B, as concentrações não tóxicas de β-cariofileno
melhoraram significativamente a atividade do isocariofileno.
Figura 1B: Atividade potencializadora de β-cariofileno combinado isocariofileno (B) em linhas de
células tumorais MCF-7. O β-cariofileno (10 mg/mL-1) não inibiu o crescimento celular.
O isocariofileno (16 mg/mL) sozinho não inibiu o crescimento celular enquanto a
inibição foi de 52% quando combinado com 10mg/mL de β-cariofileno, dessa forma, o
β-cariofileno aumentou a citotoxicidade do isocariofileno em 32 mg/mL de 69% para
90%.
Em conjunto, os resultados indicam que o β-cariofileno potencializa a atividade do
α-humuleno e do isocariofileno in vitro.
2. Efeito potencializador de β-cariofileno com paclitaxel
A atividade potencializadora do β-cariofileno também foi avaliada em combinação com
paclitaxel, um diterpeno originalmente isolado de Taxus brevifolia e depois de T.
canadensis.

5. Este agente antitumoral é usado clinicamente para tratar câncer de mama, ovário e
pulmão, e portanto, as linhas celulares MCF-7, DLD-1 e L-929 foram tratadas com
paclitaxel sozinho ou em combinação com β-cariofileno (2,5 e 10 mg/mL).
Os pesquisadores perceberam que o β-cariofileno não inibiu o crescimento de
nenhuma das linhas celulares testadas, enquanto a concentração de 0,025 mg/mL-1 de
paclitaxel inibiu significativamente o crescimento de MCF-7 (28%), DLD-1 (17,3%) e
L-929 (18,4%), em comparação com células não tratadas (Figura 2).
Figura 2: Atividade potencializadora do β-cariofileno combinado com paclitaxel (0,025 mg/mL-1)
nas linhas de células tumorais MCF-7, DLD-1 e L-929. O β-cariofileno (2,5 e 10 mg/mL-1) não
inibiu o crescimento celular.
Portanto, o β-cariofileno aumentou significativamente a atividade do paclitaxel (0,025
mg/mL −1) em todas as linhagens de células tumorais testadas.
Em células MCF-7, a inibição do crescimento pelo paclitaxel foi aumentada em cerca
de 50% e 68% com 2,5 e 10 mg/mL-1 de β-cariofileno, respectivamente, e em cerca de
36% e 123%, respectivamente, nas células L-929.

6. O maior efeito potencializador do β-cariofileno foi obtido nas linhagens celulares DLD-1,
onde em concentrações de 2,5 e 10 mg/mL, o β-cariofileno aumentou a inibição do
crescimento induzida pelo paclitaxel em cerca de 91% e 189%, respectivamente.
Além disso, a concentração inibitória em 50% (IC50) calculada a partir da curva de
sobrevivência mostra que o β-cariofileno (10 mg/mL) aumentou a citotoxicidade
induzida pelo paclitaxel em cerca de 10 vezes.
3. Acúmulo intracelular de paclitaxel e calceína induzida por β-cariofileno
O efeito do β-cariofileno no acúmulo de paclitaxel foi avaliado em células DLD-1
(células de câncer colorretal), onde células foram incubadas com paclitaxel sozinho ou
em combinação com concentrações de β-cariofileno variando de 2,5 a 40 mg/mL.
Os pesquisadores observaram que o β-cariofileno induziu um aumento na acumulação
de paclitaxel em comparação com as células não tratadas (Figura 3).
Figura 3: Acumulação intracelular de paclitaxel induzida por β-cariofileno em células de câncer
colorretal DLD-1. Os dados representam a média ± DP de três determinações.
A percentagem de acumulação de paclitaxel induzida por 2.5, 5 e 10 mg/mL de
β-cariofileno foi 19%, 25% e 64% superior aos controles.

7. Os transportadores de drogas, tais como glicoproteína P (P-gp) – resistência à
múltiplas drogas (MDR1) – e a proteína relacionada à resistência a múltiplas drogas
(MRP1) podem diminuir o acúmulo de drogas; assim, a inibição desses transportadores
pode aumentar o acúmulo intracelular de agentes anticâncer, como o paclitaxel.
As P-gp e MRP1 são encontradas em células DLD-1, mas seus níveis dependem das
condições de cultura das células. Portanto, o β-cariofileno pode inibir os
transportadores de drogas e aumentar o acúmulo de paclitaxel intracelular,
potencializando sua atividade.
Para testar esta hipótese, o efeito de β-cariofileno e o verapamil, um inibidor de P-gp e
MRP1, foram avaliados em DLD-1 usando um ensaio de acumulação de calceína.
Onde o verapamil não induziu um acúmulo significativo de calceína intracelular,
sugerindo que P-gp e MRP1 foram fracamente ativos nas condições de cultura
utilizadas.
Em contraste, o β-cariofileno (10 mg/mL-1) aumentou significativamente o acúmulo de
calceína intracelular em 25%, sugerindo que o β-cariofileno promove o acúmulo de
drogas por outro mecanismo.
Foram demonstrados que vários hidrocarbonetos cíclicos, incluindo terpenos, se
acumulam na bicamada da membrana biológica, fazendo com que ela inche e
resultando em aumento da fluidez da membrana.
Portanto, o β-cariofileno pode se acumular nas membranas das células cancerosas e
aumentar a permeabilidade da membrana, o que poderia facilitar a passagem de
compostos bioativos pela membrana citoplasmática das células cancerosas.
Consequentemente, o β-cariofileno pode aumentar o acúmulo intracelular de drogas
antitumorais, como o paclitaxel, e potencializar sua atividade anticâncer.
Na prática:

8. Os pesquisadores demonstraram que concentrações não citotóxicas de β-cariofileno
aumentam a inibição do crescimento induzida por α-humuleno, isocariofileno e
paclitaxel em linhagens de células tumorais, como as causadoras do câncer de mama
e de cólon. Incrível!
Para o uso tópico, utilize de 5 - 30% do óleo de copaíba, 3 a 5 vezes por dia, em
massagens corporais para tratamentos antitumorais. Não se preocupe, a absorção da
pele vai fazer todo o trabalho!