O documento discute o uso de bactérias e enzimas de restrição no estudo de biologia molecular, incluindo a replicação do DNA, eletroforese, vetores de DNA e técnicas de engenharia genética para a produção de insulina humana e plantas transgênicas.

1. ©
Prof. Kyoshi Beraldo | Centro de Ensino São José
Biologia molecular
3ºEM
2017
aula
#05
março

2. ©
Bactéria: uma ferramenta
• Ciclo rápido
• E.coli duplica em 20min.
• Populações pequenas
• bilhões em uma placa de petri
• DNA circular e pequeno
• Plasmídeos
• pedaços extra de DNA
• intercambiáveis
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#05
Biomol
Bactéria
Enzima
restrição
Eletrofor.
Paternid.
Vetores
Transgenia

3. ©
Enzimas de restrição
•Cortam DNA
em locais
específicos
• Ex: enzima
bacteriana
Eco RI
corta onde
houver
G|AATT C
C TTTA|G
• vendidas por
laboratórios
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#05
Biomol
Bactéria
Enzima
restrição
Eletrofor.
Paternid.
Vetores
Transgenia

4. ©
Enzimas de restrição
• DNA submetido a uma
enzima sofre cortes sempre
nos mesmos locais
• Ex: DNA do vírus SV40
tratado com enzima Hind II
é cortada em 11 fragmentos
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#05
Biomol
Bactéria
Enzima
restrição
Eletrofor.
Paternid.
Vetores
Transgenia

5. ©
Estrutura do DNA
• "Escada" do DNA composta de fosfato e desoxirribose
• Posição dos carbonos: 5' em cima, 3' em baixo
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#05
Biomol
Bactéria
Enzima
restrição
Eletrofor.
Paternid.
Vetores
Transgenia

6. ©
Replicação do DNA
• Novos nucleotídeos adicionados somente no sentido 5' -> 3'
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#05
Biomol
Bactéria
Enzima
restrição
Eletrofor.
Paternid.
Vetores
Transgenia

7. ©
Replicação do DNA
• Complexo enzimático - DNA polimerase, Primase etc.
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#05
Biomol
Bactéria
Enzima
restrição
Eletrofor.
Paternid.
Vetores
Transgenia

8. ©
Eletroforese
•Analogia:
• trens de tamanhos variados e desconhecidos
• trem menor chega mais rápido
•Cromatografia: processo semelhante
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#05
Biomol
Bactéria
Enzima
restrição
Eletrofor.
Paternid.
Vetores
Transgenia

9. ©
Eletro
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#05
Biomol
Bactéria
Enzima
restrição
Eletrofor.
Paternid.
Vetores
Transgenia

10. ©
Eletroforese
• Gel de análise genética de milhos "cavalo de tróia"
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#05
Biomol
Bactéria
Enzima
restrição
Eletrofor.
Paternid.
Vetores
Transgenia

11. ©
Teste de paternidade
•Trechos de DNA VTNR
• número variável de repetições em sequência
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#05
Biomol
Bactéria
Enzima
restrição
Eletrofor.
Paternid.
Vetores
Transgenia

12. ©
Sequenciamento de DNA
• Método Sanger
• Bases nitrogenadas
marcadas radioativamente
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#05
Biomol
Bactéria
Enzima
restrição
Eletrofor.
Paternid.
Vetores
Transgenia

13. ©
Bactérias
•Plasmídio
como vetor
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#05
Biomol
Bactéria
Enzima
restrição
Eletrofor.
Paternid.
Vetores
Transgenia

14. ©
Bactérias
•Vírus
bacteriófago
como vetor
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#05
Biomol
Bactéria
Enzima
restrição
Eletrofor.
Paternid.
Vetores
Transgenia

15. ©
Bactérias
•Transgenia: produção de insulina humana
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#05
Biomol
Bactéria
Enzima
restrição
Eletrofor.
Paternid.
Vetores
Transgenia

16. ©
Plantas
• Plasmídio da
bactéria
Agrobacterium
• Multiplicação
do DNA
• Injeção do
DNA em
planta
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#05
Biomol
Bactéria
Enzima
restrição
Eletrofor.
Paternid.
Vetores
Transgenia

17. ©
Animais
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#05
Biomol
Bactéria
Enzima
restrição
Eletrofor.
Paternid.
Vetores
Transgenia

18. ©
Éxons e Íntrons
• Íntron - região do DNA que não codifica aminoácidos
• presentes no DNA de eucariotos
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#05
Biomol
Bactéria
Enzima
restrição
Eletrofor.
Paternid.
Vetores
Transgenia

19. ©
Splicing
• O mesmo
trecho de
DNA pode
ser transcrito
de formas
distintas
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#05
Biomol
Bactéria
Enzima
restrição
Eletrofor.
Paternid.
Vetores
Transgenia