2. Eletroforese em Gel de Acrilamida
• Metodologia de separação de biomoléculas
• Baseada no peso molecular (KDa) e/ou na
carga das moléculas
• Pode ser realizada uma dimensão ou duas
dimensões (2D)
• Pode ser em gel desnaturante ou não
desnaturante
3. Eletroforese em Gel de Acrilamida
Arranjo básico de um sistema de Eletroforese
4. Eletroforese em Gel de Acrilamida
Diagramas de aparatos de corrida de gel (A) tubo; (B) eletroforese vertical;
(C) Eletroforese horizontal; (D) horizontal de camada fina
5. Eletroforese em Gel de Acrilamida
Gel de Agarose e de Acrilamida
(A) Géis de agarose são formados por pontes de hidrogênio e interações hidrofóbicas entre os polímeros
(B) Géis de Acrilamida possuem ligações covalentes cruzadas entre camadas de polímeros
6. Eletroforese em Gel de Acrilamida
Principais soluções utilizadas para confecção de géis
7. Eletroforese em Gel de Acrilamida
Soluções finais de Gel – De corrida e Stack
8. Eletroforese em Gel de Acrilamida
Diagrama de aparato de eletroforese vertical - montagem
11. Eletroforese em Gel de Acrilamida
Efeito de menisco na forma do gel. Adicionar água ou n-butanol acima do gel permite
uma superfície reta para melhor formato das bandas
15. Eletroforese em Gel de Acrilamida
(A) Gel de acrilamida para separação de DNA; (B) Gráfico tamanho (par de bases – bp) X distância
percorrida; (C) Gráfico do log do tamanho (bp) X distância percorrida
16. Eletroforese em Gel de Acrilamida
Exemplo de tabela de cálculo para encontrar o peso molecular
17. Eletroforese em Gel de Acrilamida
Exemplo de tabela de cálculo para encontrar o peso molecular
18. Eletroforese em Gel de Acrilamida
Sistemas de blotting eletroforético
(A) Sistema de transferência úmida (tank buffer)
(B) Sistema de transferência semi-úmido
