Aula 10 eletroforese

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Aula 10 eletroforese

  1. 1. Eletroforese<br />Docente: Dyego Miranda<br />
  2. 2. Métodos<br />Após:<br />Extração<br />Quantficação<br />PCR<br />Visualização do resultadodaamplificaçãopeloprocedimento de Eletroforese<br />
  3. 3. Princípio<br />Eletroforese Consistenamigração e separação de partículasemumamatriz (suporte), submetidas a umadiferença de potencialelétrico;<br />Os suportespodem ser:<br />Papel de filtro<br />Acetato de celulose<br />Gel de agarose<br />Gel de poliacrilamida<br />A migração das partículasdepende do seutamanhoe carga, alémda DDP a queforamsubmetidas<br />
  4. 4. Eletroforeseem gel<br />Eletroforeseem gel é eficienteempromover a separação de partículas de acordo com o seutamanho<br />Gel de poliacrilamida<br />Usadoemseparação de proteínasoupartículasmuitopequenas<br />Gel de agarose<br />Utilizadoparaseparação de partículasrelativamentepequenas e partículasgrandes<br />O DNA contémcarganegativa, portantomigrapara o pólopositivo<br />Quantomaisconcentrado o gel, mais “fechada’’ é suamalha, portanto a partículaterámaisdificuldadeematravessá-la<br />
  5. 5. Princípio<br />+<br />A amostra é inseridanos “pocinhos”<br />Partículas de menortamanhooucargamaisnegativacorreprimeiro<br />-<br />Umacorrenteelétrica é aplicada<br />
  6. 6. Princípio<br />Quandosubmetidas a luz UV o gel apresenta um padrão de bandas. Cadabanda é um fragmento de DNA de determinadotamanho.<br /><ul><li>O ladder éformadopordiferentestamanhos de DNA e serve comomarcador de peso molecular</li></li></ul><li> Gel de agarose<br />A agarose, um polissacarídeo extraído de uma alga marinha vermelha;<br />Dissolve em água fervente e então gelifica quando esfria;<br />Maisutilizadaparaseparação de fragmentoslongos de DNA<br />
  7. 7. Gel de agarose<br />É utilizadoemumacuba horizontal ligada a umafonte<br />Umasoluçãotampão é adicionada à cuba, ondeirámanterestáveis as condições de pH do meio<br />
  8. 8. Intercalantes<br />Brometo de etídio<br />Agente intercalante do DNA<br />Cancerígeno!<br />Composto fluorescente à luz UV<br />Nitrato de prata<br />Gel Red<br />
  9. 9. Visualização do gel de agarose em luz UV<br />
  10. 10.
  11. 11. Gel de poliacrilamida<br />A poliacrilamida também pode ser utilizada com gel para a eletroforese. A poliacrilamida é uma mistura de dois polímeros, acrilamida e bisacrilamida;<br />Utilizada para observação de fragmentos menores (poucos pares de bases ou proteínas);<br />Melhorresolução do que a eletroforeseem gel de agarose;<br />Desvantagem: Neurotóxica<br />
  12. 12. Gel de poliacrilamida<br />É realizadaemumacuba de eletroforese vertical.<br />

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