Aula Prática - Células eucariontes e procariontes e coloracao de gram (1).pptx
1. Aula Prática 1:
Células Eucarióticas e Procarióticas e coloração de
Gram
BIOLOGIA GERAL E APLICADA I / 2017 ( SHS 0377)
PROFESSORA: DRA . MARIA BERNADETE A . VARESCHE
TÉCNICA: JULIANA GONÇALVES
MONITORAS: ALEJANDRA C. VILLA MONTOYA
RAISSA C. DA SILVA MAZARELI
2. Células Procarióticas X Células Eucarióticas
Cianobactérias
Bactérias
Fungos
Archaea
Plantas
Protozoários e Plâncton
Animais
3. PROCARIÓTICAS
• Células pequenas;
• Ausência de organelas e
citoesqueleto;
• Ausência de envoltório nuclear;
• Presença de parede celular.
EUCARIÓTICAS
• Células grandes;
• Presença de organelas e
citoesqueleto;
• Presença de envoltório nuclear;
• Ausência de parede celular.
4. Microscopia ótica
Aumento: 1000 x
Micrografia eletrônica de
varredura
Aumento: 400.000 x
Micrografia eletrônica de
transmissão
Aumento: 100.000 x
Células
Procarióticas
Células
Eucarióticas
DIFERENÇAS ENTRE OS TIPOS CELULARES OBSERVÁVEIS AO
MICROSCÓPIO ÓPTICO:
Tamanho e Presença/ Ausência de Núcleo
5. Ocular
Objetivas
e revolver
Mesa ou platina
Condensador
Macrométrico e
micrométrico
Fonte de luz
Lâmina
Imagem observada
Olho
Ocular
Fonte de luz
Imagem
intermediaria
(invertida)
Lente do condensador
Organismo
Lente da objetiva
6. Por que as lâminas precisam ser coradas?
As células não são coloridas?
Células da mucosa da boca sem corante
Célula da mucosa da boca corada
com azul de metileno
AZUL DE METILENO
Corante Catiônico
(Básico)
Substrato Aniônico
(ácido)
- Ácidos nucléicos: DNA e RNA;
- Parece celular das bactérias.
Acidófilo Afinidade
com estruturas ácidas
7. PROCEDIMENTOS:
1° Células eucarióticas – Mucosa bucal
1. Faça uma suave raspagem da bochecha (mucosa bucal) com um
suabe estéril.
2. Espalhar bem o material coletado sobre uma lâmina limpa
apenas uma única vez e direção.
3. Pingar uma gota de azul de metileno 0,5% sobre o material e
cobrir com uma lamínula.
4. Retirar o excesso de corante com o auxílio de um papel higiênico.
5. Levar ao microscópio para focalizar e observar com as objetivas
de 4x, 10x e 40x.
6. Fazer um desenho esquemático.
8. 2° Células Procarióticas – cultura de Escherichia coli
FIXAÇÃO DA AMOSTRA POR CALOR
Aderência da parece celular bacteriana (peptideoglicanos e outros compostos
orgânicos) na lâmina de vidro.
FIXAÇÃO POR ÁLCOOL 70%
Mantêm de forma definitiva as estruturas da célula.
AMOSTRAGEM
1. Com uma alça de platina estéril retirar amostra de cultura, esfregar na
lâmina de vidro até espalhar bem a amostra coletada;
2. Fixar as células pelo calor;
3. Gotejar sobre o esfregaço álcool 70%
4. Corar com azul de metileno;
5. Visualizar ao microscópio com objetivas de 4, 10, 40 e 100x (utilizar óleo
de imersão).
9. A coloração de Gram é uma coloração diferencial
através da qual as bactérias são classificadas em
gram-positivas ou gram-negativas;
Agromyces sp Escherichia coli
11. Corante Violeta Cristal
Cora igualmente todas as células
Solução de Iodo
Fixador do corante - Complexo insolúvel
Descoloração n-Propanol
a) Desidrata parede espessa corante é retido gram+
b) Dissolve membrana lipídica corante é removido gram-
Corante Safranina
Células descoloridas ficam vermelhas
Fixação
Metanol - previne a lise e evita que o esfregaço
desprenda no momento da coloração
12. Violeta de
cristal
1 minuto
H2O
Lugol (iodo)
1 minuto
H2O H2O
N-Propanol
30-60
segundos
Safranina
30-60
segundos
Observação ao microscópio óptico com
aumento de 1000x
Objetiva de 100x utilizar óleo de imersão
PROCEDIMENTOS:
Notas do Editor
Procariótica pobreza de membrana, única membrana é a membrana plasmática.
Procariótica pobreza de membrana, única membrana é a membrana plasmática.
Parede celular função de proteção mecânica e dá forma à célula (forma simples), já que não tem citoesqueleto (eucariontes tem formas mais complexas).
Eucariótica O núcleo e o citoplasma são partes mofologicamente bem distintas. Compartimentos que separam diversos processos metabólicos Extenso sistema de membrana cria, no citoplasma, microrregiões que contem moléculas diferentes e executam funções especializadas.
Fotos: E. coli, célula da mucosa da boca, hemácia, plaqueta e leucócito
N-Propanol dissolve a porção lipídica das membranas externas das bactérias gram-negativas e o complexo cristal violeta-iodo é removido, descolorindo as células, Por outro lado, o solvente desidrata as espessas paredes celulares das bactérias gram positivas e provoca a contração dos poros do peptideoglicano, tornando-os impermeáveis ao solvente; o corante primário é retido e as células permanecem coradas.
A retenção ou não do corente primário é, portanto, dependente das propriedades físicas e químicas das paredes celulares bacterianas tais como esspessura, densidade, porosidade e integridade.