O documento discute os principais conceitos e técnicas da histologia, incluindo a definição de histologia, os principais tipos de tecidos, as etapas para preparação de lâminas histológicas e os diferentes tipos de microscopia utilizados para análise de tecidos.

1. Profª. Dr. Deuzuita
deuzuitasantos@globo.com

2.  O termo histologia foi usado pela primeira
vez em 1819 por Mayer
 Mayer fez a conjunção do termo histos =
tecido e logos = estudo.
 Tecido
 Um conjunto de células que apresentam
mesma forma, mesma função e mesma
origem embrionária?
 Não possui muita sustentação histológica-

3.  O sangue:
 hemácia (disco bicôncavo, anucleado na
maioria dos animais domésticos)- transporta
oxigênio e gás carbono
 neutrófilo- é uma célula fagocitadora.
 TECIDO é um conjunto de células que
apresentam a mesma função geral e a mesma
origem embrionária.

4.  Espermatozóide e o óvulo – fecundação –
zigoto
 sucessivas mitoses- clivagem. Cada célula é
chamada de blastômero (totipotentes)
 Mórula
 Blástula
 Gástrula- Ectoderma, endoderma
 A partir do endoderma forma-se o
mesoderma

5.  Ectoderma forma-se o tecido nervoso e
alguns epitélios de revestimento;
 Mesoderma origina-se a maioria dos tecidos
conjuntivos e musculares;
 Endoderma alguns epitélios de revestimento.

6. Epitelial
Conjuntivo
Muscular
nervoso

7.  Os tecidos são constituídos por células e
matriz extracelular
 A matriz extracelular - fibrilas de colágeno e
membranas basais.
 pesquisa biomédica - células produzem a
matriz extracelular mas são influenciadas e
controladas por moléculas da matriz.

8.  Células e matriz extracelular formam uma
entidade continua que funcionam
conjuntamente e reagem frente a estímulos e
inibidores.
 O tamanho pequeno das células e dos
componentes de matriz torna a histologia
dependente do uso de microscópios.

9.  O método mais utilizado em Histologia é o
preparado histológico permanente (lâmina
histológica) estudado em microscópio óptico.
 Os tecidos devem ser seccionados para se
obterem cortes delgados
 Micrótomo -
 Artefatos- distorções e perda de
componentes celulares
 1ª ) Coleta da Amostra

10.  a) Biópsia cirúrgica
 b) Biópsia endoscópica – usada para órgãos ocos
(estômago, intestino, etc) através de endoscopia;
 c) Biópsia por agulha – a amostra (cilindro) é
obtida pela punção do órgão (fígado, pulmão),
sem precisar abrir a cavidade natural;
 d) Cirurgias amplas (radicais) – a amostra
corresponde a peças grandes (ex. tumores) ou
órgãos (ex. mama, útero);
 e) Necrópsia.

11.  2º) Fixação- pode ser:
 Químicas- para microscopia óptica- solução isotônica
tamponada de formaldeído a 4%. Microscópio eletrônico-
solução de glutaraldeído tamponado, seguida por uma
segunda fixação em tetróxido de ósmio,
 físicos- utilizando-se o calor ou o frio.
 O tempo de fixação varia de acordo com o tamanho da
peça, constituição do tecido, poder de fixação do fixador,
objetivos a pesquisar e temperatura ambiente.
 De forma geral, tendo o fragmento, a ser fixado, uma
espessura de 4 mm o tempo mínimo de fixação é de doze
(12) horas.
 Obs: Para que se possa examinar o tecido ósseo ou tecido
com áreas de calcificação, deve-se antes de processá-lo,
incluí-lo e cortá-lo, proceder à descalcificação .

12.  a) O material coletado deve ser imerso rapidamente no
fixador;
 b) O volume de fixador deve ser no mínimo dez vezes (10
X) maior que o volume da peça coletada.
 Objetivos da fixação:
 a) Inibir ou parar a autólise tecidual;
 b) Coagular ou endurecer o tecido e tornar difusíveis as
substâncias insolúveis;
 c) Proteger, através do endurecimento, os tecidos moles
no manuseio e procedimentos técnicos posteriores;
 d) Preservar os vários componentes celulares e tissulares;
 e) Melhorar a diferenciação óptica dos tecidos;
 f) Facilitar a subsequente coloração.

13.  3ª) Processamento:
 Para que o grau de firmeza seja atingido, o
tecido deve ser completamente impregnado com
algum meio de sustentação que manterá juntas
as células e as estruturas intercelulares.
 Os materiais de sustentação usados são
denominados materiais de inclusão.
 Certos materiais de inclusão, tais como
“Carbowax” e a gelatina são solúveis em água e
os tecidos não precisam ser desidratados antes
do uso.

14.  4ª) Desidratação- imergindo o bloco de
tecido em concentrações crescentes de álcool
etílico.
 O álcool é o agente mais utilizado (70% - 80%
- 90% - 100%) para se evitar a retração
pronunciada do tecido ocasionando lesões
estruturais da célula de caráter irreversível.
 O álcool endurece mais o tecido.
 O volume de álcool deverá ser 10 a 20 vezes
maior que o volume da peça.

15.  5ª) Diafanização (Clarificação) - consiste na
infiltração do tecido por um solvente da parafina
que seja ao mesmo tempo desalcolizante.
 A parafina não se mistura com água e nem com
álcool. Ambos devem ser completamente
removidos para que a parafina possa penetrar
eficientemente no tecido.
 O xilol é comumente utilizado. É chamado de
agente clarificador porque torna o tecido semi-
translúcido, quase transparente.
 Os reagentes mais utilizados são: toluol,
clorofórmio, óleo de cedro, benzol e salicilato de
metila.

16.  6ª) Inclusão (Impregnação)
 A finalidade é eliminar completamente o xilol
contido no material e a total penetração da
parafina nos vazios deixados pela água e
gordura, antes existentes no tecido.
 Este processo serve também para preparar o
material para os cortes, removendo o
clarificante e endurecendo-o suficientemente
e dando-lhe a consistência adequada para
que possa ser cortado.

17.  7ª) Microtomia
 Para se obter cortes de material incluído em parafina
ou por congelação é necessário um instrumento
especial: o micrótomo.
 8ª) Colagem do Corte à Lâmina
 As fitas de cortes de parafina são estiradas
cuidadosamente e os cortes individuais são
separados por um bisturi.
 Na superfície de uma lâmina de vidro é feito um
ponto de aderência (normalmente com albumina de
ovo) e o corte de parafina é colocado em banho-
maria (água morna) de forma que as dobras
provocadas pelo corte no tecido desapareçam.

18.  9º) Coloração
 Dentre todos os corantes, a combinação de
hematoxilina e eosina (HE) é a mais comumente
usada.
 A hematoxilina cora em azul ou violeta o núcleo
das células e outras estruturas acidas (como
porções do citoplasma ricas em RNA e a matriz
da cartilagem hialina).
 A eosina- cora o citoplasma e o colágeno em
cor-de-rosa.
 Antes que o corte seja corado, a parafina em que
ele foi incluído deve ser removida.

19. Existe um grande número de técnicas.

20.  10ª ) Montagem
 Depois que o corte tiver sido corado com a solução apropriada,
ele é passado através de concentrações crescentes de álcool para
remover, de novo, a água.
 Finalmente, o corte é banhado em xilol antes de ser montado em
um meio solúvel em xilol, que é o meio de montagem (para os
cortes de parafina é usado o Bálsamo de Canadá).
 Uma gota do meio de montagem é colocada sobre o corte e a
lamínula é posicionada sobre o corte de forma delicada, de uma
forma tal que o meio de montagem cubra completamente o
corte.
 Depois a lamínula é comprimida com firmeza sobre o corte e o
meio de montagem se espalha formando uma delgada película
entre a lâmina e a lamínula que posteriormente vão estar
firmemente aderidas uma à outra pela estabilização do meio de
montagem.

21.  MICROSCOPIA DE LUZ - preparações coradas
são examinadas por iluminação que atravessa
o espécime.
 Resolução- a menor distancia entre duas
partículas ou duas linhas que permite que
elas sejam vistas como dois objetos
separados.
 MICROSCOPIA DE CONTRASTE DE FASE E DE
CONTRASTE DIFERENCIAL DE INTERFERENCIA-
permitem a observação de células e cortes
não corados.

22.  MICROSCOPIA DE POLARIZAÇÃO- raios de luz
passam através de um filtro polarizador (como
um filtro Polaroid), eles saem vibrando em uma
só direção.
 MICROSCOPIA CONFOCAL- ele torna possível
focalizar um plano de foco muito delgado do
espécime.
 MICROSCOPIA DE FLUORESCENCIA- Substancias
fluorescentes com afinidade por moléculas
presentes nas células ou na matriz podem set
usadas como corantes fluorescentes, como o
alaranjado de acridina, que pode combinar-se
com o DNA e o RNA.

23.  Microscopia Eletrônica de Transmissão-
 Técnicas de congelação permitem o exame
de tecidos por microscopia eletrônica sem a
necessidade de fixação e inclusão em resina.
 Com estas técnicas ha menos artefatos.
 Tecidos congelados podem ser seccionados e
submetidos a técnicas citoquímicas
imunocitoquímicas ou podem ser fraturados
(criofratura, freeze fracture) para fornecer
detalhes da estrutura interna de membranas
celulares.

24.  Microscopia Eletrônica de Varredura- fornece
imagens pseudotridimensionais das
superfícies de células, tecidos e órgãos.
 Mostra somente uma visão de superfícies.
 O interior de órgãos pode ser analisado
congelando células ou órgãos e em seguida
fraturando-os para expor as suas superfícies
internas.

25.  RADIOAUTOGRAFIA EM SECÇÕES DE
TECIDOS- permite a localização de
substancias radioativas em tecidos pelo efeito
de sua radiação em emulsões fotográficas.
 Precursores- aminoácidos radioativos,
nucleotídeos radioativos, açucares radioativos
etc.

26.  CULTURA DE CELULAS E TECIDOS
 As células e os tecidos são cultivados em soluções de
composição conhecida (sais, aminoácidos, vitaminas) as
quais são frequentemente adicionados componentes do
soro.
 As células devem ser inicialmente separadas
mecanicamente ou por meio de tratamento enzimático.
 Culturas primarias- células cultivadas em suspensão ou
sobre uma placa de Petri ou sobre uma lamínula de vidro,
superfícies sobre as quais elas costumam aderir e crescer
sob forma de uma única camada de células.
 Transformação- oncogênes

27.  A cultura de células tem sido extensamente
usada para o estudo do metabolismo de
células normais e cancerosas e para o
desenvolvimento de novos fármacos.
 Esta técnica também é útil para o estudo de
microorganismos que só crescem no interior
de células, como os vírus, micoplasma e
alguns protozoários.
 Em citogenética, a determinação do cariótipo
pode ser realizada pelo cultivo de linfócitos
do sangue ou de fibroblastos da pele.

28.  FRACIONAMENTO CELULAR- processo físico pelo
qual e usada forca centrifuga para separar
organelas e componentes celulares em função de
seus coeficientes de sedimentação.
 HISTOQUÍMICA E CITOQUÍMICA- métodos que
identificam e localizam substancias tanto em
cortes histológicos como em células cultivadas.
 Estes métodos normalmente originam
substancias
insolúveis coloridas ou eletro-densas, que
permitem a
localização de átomos ou moléculas por
microscopia de luz ou eletrônica.

29.  Muitos procedimentos histoquímicos são usados
em diagnostico laboratorial.
 A reação de Perls para ferro, as reações de PAS-
amilase para glicogenio e Alcian blue para
glicosaminoglicanas são habitualmente aplicadas
a biopsias de tecidos de pacientes em que se
quer diagnosticar doenças em que se acumulam
nos tecidos quantidades elevadas de ferro (por
exemplo, hemocromatose, hemossiderose),
glicogênio (glicogenoses), glicosaminoglicanas
(mucopolissacaridoses) e esfingolipídios
(esfingolipidoses).

30.  Marcadores- podem ser visto por meio d e
um microscópio de luz ou eletrônico
 Os marcadores mais usados são:
 substancias fluorescentes
 átomos radioativos
 Moléculas de enzimas como a peroxidase
 metais (geralmente partículas de ouro).

31.  Imunocitoquímica- uma interação altamente
especifica entre moléculas e aquela que
ocorre entre um antígeno e seu anticorpo.
 HIBRIDIZACAO IN SITU -é excelente para
averiguar se uma célula tem uma sequencia
especifica de DNA

32.  Distorções e Artefatos Causados pelo Processamento dos
Tecidos
 A Totalidade do Tecido- uma grande dificuldade
apresentada por cortes de microscopia de luz é a
impossibilidade de se corar diferencialmente todos os
componentes das células e tecidos em um só preparado.
 Duas Dimensões e Três Dimensões- quando uma
estrutura tridimensional e cortada em secções muito
delgadas, as secções parecem ter só duas dimensões:
comprimento e largura.
 Isto frequentemente conduz o observador a erros se ele
não se conscientizar de que uma esfera seccionada se
parece com um circulo e que um tubo seccionado se
parece com um anel