O documento descreve um experimento de laboratório sobre coloração de Gram e as diferenças entre células procarióticas e eucarióticas. Ele inclui instruções para coloração de amostras de mucosa bucal humana e Escherichia coli, observando-as ao microscópio para identificar características como tamanho, presença de núcleo e parede celular. O documento também explica o princípio da coloração de Gram para classificar bactérias em Gram-positivas e Gram-negativas.

1. Aula Prática 1:
Células Eucarióticas e Procarióticas e coloração de
Gram
BIOLOGIA GERAL E APLICADA I / 2017 ( SHS 0377)
PROFESSORA: DRA . MARIA BERNADETE A . VARESCHE
TÉCNICA: JULIANA GONÇALVES
MONITORAS: ALEJANDRA C. VILLA MONTOYA
RAISSA C. DA SILVA MAZARELI

2. Células Procarióticas X Células Eucarióticas
Cianobactérias
Bactérias
Fungos
Archaea
Plantas
Protozoários e Plâncton
Animais

3. PROCARIÓTICAS
• Células pequenas;
• Ausência de organelas e
citoesqueleto;
• Ausência de envoltório nuclear;
• Presença de parede celular.
EUCARIÓTICAS
• Células grandes;
• Presença de organelas e
citoesqueleto;
• Presença de envoltório nuclear;
• Ausência de parede celular.

4. Microscopia ótica
Aumento: 1000 x
Micrografia eletrônica de
varredura
Aumento: 400.000 x
Micrografia eletrônica de
transmissão
Aumento: 100.000 x
Células
Procarióticas
Células
Eucarióticas
DIFERENÇAS ENTRE OS TIPOS CELULARES OBSERVÁVEIS AO
MICROSCÓPIO ÓPTICO:
Tamanho e Presença/ Ausência de Núcleo

5. Ocular
Objetivas
e revolver
Mesa ou platina
Condensador
Macrométrico e
micrométrico
Fonte de luz
Lâmina
Imagem observada
Olho
Ocular
Fonte de luz
Imagem
intermediaria
(invertida)
Lente do condensador
Organismo
Lente da objetiva

6. Por que as lâminas precisam ser coradas?
As células não são coloridas?
Células da mucosa da boca sem corante
Célula da mucosa da boca corada
com azul de metileno
AZUL DE METILENO
Corante Catiônico
(Básico)
Substrato Aniônico
(ácido)
- Ácidos nucléicos: DNA e RNA;
- Parece celular das bactérias.
Acidófilo  Afinidade
com estruturas ácidas

7. PROCEDIMENTOS:
1° Células eucarióticas – Mucosa bucal
1. Faça uma suave raspagem da bochecha (mucosa bucal) com um
suabe estéril.
2. Espalhar bem o material coletado sobre uma lâmina limpa
apenas uma única vez e direção.
3. Pingar uma gota de azul de metileno 0,5% sobre o material e
cobrir com uma lamínula.
4. Retirar o excesso de corante com o auxílio de um papel higiênico.
5. Levar ao microscópio para focalizar e observar com as objetivas
de 4x, 10x e 40x.
6. Fazer um desenho esquemático.

8. 2° Células Procarióticas – cultura de Escherichia coli
FIXAÇÃO DA AMOSTRA POR CALOR
 Aderência da parece celular bacteriana (peptideoglicanos e outros compostos
orgânicos) na lâmina de vidro.
FIXAÇÃO POR ÁLCOOL 70%
 Mantêm de forma definitiva as estruturas da célula.
AMOSTRAGEM
1. Com uma alça de platina estéril retirar amostra de cultura, esfregar na
lâmina de vidro até espalhar bem a amostra coletada;
2. Fixar as células pelo calor;
3. Gotejar sobre o esfregaço álcool 70%
4. Corar com azul de metileno;
5. Visualizar ao microscópio com objetivas de 4, 10, 40 e 100x (utilizar óleo
de imersão).

9. A coloração de Gram é uma coloração diferencial
através da qual as bactérias são classificadas em
gram-positivas ou gram-negativas;
Agromyces sp Escherichia coli

10. Gram-positivas
Camada de
peptideoglicano mais
espessa
Diferença na parede celular:
Gram-negativas:
Camada fina de
peptideoglicano e uma
membrana externa composta
por lipopolissacarídeos.

11. Corante Violeta Cristal
Cora igualmente todas as células
Solução de Iodo
Fixador do corante - Complexo insolúvel
Descoloração n-Propanol
a) Desidrata parede espessa  corante é retido  gram+
b) Dissolve membrana lipídica  corante é removido gram-
Corante Safranina
Células descoloridas ficam vermelhas
Fixação
Metanol - previne a lise e evita que o esfregaço
desprenda no momento da coloração

12. Violeta de
cristal
1 minuto
H2O
Lugol (iodo)
1 minuto
H2O H2O
N-Propanol
30-60
segundos
Safranina
30-60
segundos
Observação ao microscópio óptico com
aumento de 1000x
Objetiva de 100x  utilizar óleo de imersão
PROCEDIMENTOS: