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Efeitos de Trichoderma asperellum na absorção de
nutrientes e murcha de Fusarium do tomate
U N I V E RS I DA D E F E D E R A L D O R ECÔ N C AVO DA B A H I A
C E N T RO D E C I Ê N C I A S AG R Á R I A S , A M B I E N TA I S E B I O LÓ G I C A S
P RO G R A M A D E P Ó S G R A D UAÇ ÃO E M C I Ê N C I A S AG R Á R I A S
Rhavena Rocha Pereira¹
Rafaela Simão Abrahão Nóbrega²
Júlio César Azevedo Nóbrega²
Aline Simões da Rocha Bispo²
Irana Paim Silva²
¹Doutoranda em Ciências Agrárias
² Docentes da disciplina Seminários em Ciências Agrárias I
Cruz das Almas, BA
Junho - 2021
INTRODUÇÃO
O tomateiro Lycopersicon esculentum se desenvolve bem em regiões de clima temperado,
tropical de altitude e subtropical.
Produção mundial
China 31% (> 50 mi de toneladas)
Índia 11%
Estados Unido 8%
FAO, 2016.
Fonte: André Fachini Minitti, Embrapa, 2019.
INTRODUÇÃO
Murcha de Fusarium
Amarelecimento das folhas mais velhas
Escurecimento dos tecidos vasculares
Retardo do crescimento da planta
Plantas de tomateiro com sintomas de murcha e seca das folhas inferiores causada por Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici.
Fonte: Ricardo Borges Pereira, Embrapa Hortaliças, 2016.
INTRODUÇÃO
Agente causal :
 Fusarium oxysporum f. sp.lycopersici (FOL)
Manejo: Fumigação do solo
 Rápida recolonização do solo fumigado por conídios de FOL liberados de plantas infectadas
 Alto custo
 Preocupações sociais, ambientais e regulatórias
INTRODUÇÃO
Controle biológico
Trichoderma
Mecanismos de ação
Competição
Antibiose
Parasitismo
Indução de resistência
Promoção de crescimento
Ação parasítica sobre o fitopatógeno Rhizoctonia
Fonte: Itamar Soares de Melo, Embrapa Meio Ambiente
INTRODUÇÃO
Fertilização
Murcha do Fusarium
Baixo pH do solo
N-NH4 alto
P alto, Mg alto
OBJETIVOS
Isolar uma espécie de Trichoderma com um alto nível de atividade antagônica contra FOL e;
Determinar a relação entre a severidade da doença da murcha de Fusarium e a absorção de
nutrientes por tomateiros cultivados em vasos.
MATERIAIS E MÉTODOS
1) Fungos isolados (Huang et al., 2016)
FOL146 (raça 2) de F. oxysporum f. sp.lycopersici (FOL)
Dominante em Taiwan
Patogenicidade foi previamente confirmada
CHF 78 de Trichoderma (Chung e Hoitink, 1990)
Melhor capacidade antagônica contra FOL em um teste de cultura dupla.
MATERIAIS E MÉTODOS
2) Extração de DNA e reação de PCR
Método de brometo de hexadeciltrimetilamônio (Ausubel et al., 1998)
Marcador moleculares: ITS e TEF 1α
Sequenciamento:
CodonCode Aligner versão 5.0.2
Números de acesso das sequências:
ITS: KX377621
TEF1α: KX377622
MATERIAIS E MÉTODOS
3) Análise filogenética
Sequências representativas de ITS e TEF1α de Trichoderma foram baixados do GenBank para
alinhamento com sequências de CHF 78
O alinhamento foi realizado usando Clustal X versão 2.0.6 e ajustado a olho nu usando BioEdit
versão 7.2.5.
MATERIAL E MÉTODOS
4) Traços de promoção de crescimento de plantas
Degradação enzimática da celulose e da lignina do CHF 78
Produção de ácido indolacético (IAA)
Capacidade de solubilização de fosfato
Produção de sideróforos
Produção de protease e quitinase
MATERIAL E MÉTODOS
5) Eficiência de biocontrole de Trichoderma sp.
Cultivar: 'Agricultores 301'(Known-You Co., Ltd.,Kaohsiung City, Taiwan)
Tratamentos:
Controle não inoculado;
Inoculação apenas com o isolado CHF 78;
Inoculação apenas com o isolado FOL146;
Inoculação com o isolado CHF 78 seguida quatro dias depois pela inoculação com FOL146
(prevenção) e;
Inoculação com o isolado FOL146 seguida quatro dias depois pela inoculação com CHF 78
(remediação).
DIC com 6 repetições em câmara de crescimento
MATERIAL E MÉTODOS
5) Eficiência de biocontrole de Trichoderma sp.
Variáveis analisadas:
Altura da planta;
Comprimento da raiz;
Peso seco e;
Severidade da doença após 4 semanas.
Todo experimento foi repetido 1 vez
MATERIAL E MÉTODOS
6) Análise de nutrientes minerais
Concentração total de N - método de destilação a vapor (Bremner e Mulvaney, 1982);
Concentrações de P, K, Ca, Mg, Fe, Mn, Cu e Zn - espectrometria de massa com plasma
indutivamente acoplado (ICP-MS).
MATERIAL E MÉTODOS
7) Análise estatística
 PROC GLIMMIX do SAS®(versão 9.4; SAS Institute, Gary, NC)
Comparação de médias a 5% de significância pelo método Fisher Least Significant Difference
(LSD)
Análise de correlação de Pearson
RESULTADOS E DISCUSSÃO
1) Análise filogenética
Isolado CHF 78
T. asperellum
RESULTADOS E DISCUSSÃO
2) Traços de promoção de crescimento de plantas
CHF 78 não produz ligninases
CHF 78 produziu uma concentração de 8,59 mg / ml de IAA após 7 dias de crescimento.
Solubilização de fosfato - Ca3 (PO4) 2
CHF 78 produziu sideróforos: hidroxamatos e carboxilatos
Produção de proteases e quitinases
RESULTADOS E DISCUSSÃO
3) Eficiência de biocontrole de Trichoderma sp.
A - Controle não inoculado;
B - Inoculação apenas com o isolado CHF 78;
C - Inoculação apenas com o isolado FOL146;
D -Inoculação com o isolado CHF 78 seguida
quatro dias depois pela inoculação com
FOL146 (prevenção);
E - Inoculação com o isolado FOL146 seguida
quatro dias depois pela inoculação com CHF
78 (remediação).
Resultados
3) Eficiência de biocontrole de Trichoderma sp.
A - Controle não inoculado;
B - Inoculação apenas com o isolado CHF 78;
C - Inoculação apenas com o isolado FOL146;
D -Inoculação com o isolado CHF 78 seguida
quatro dias depois pela inoculação com
FOL146 (prevenção);
E - Inoculação com o isolado FOL146 seguida
quatro dias depois pela inoculação com CHF
78 (remediação).
RESULTADOS E DISCUSSÃO
3) Eficiência de biocontrole de Trichoderma sp.
A - Controle não inoculado;
B - Inoculação apenas com o isolado CHF 78;
C - Inoculação apenas com o isolado FOL146;
D -Inoculação com o isolado CHF 78 seguida
quatro dias depois pela inoculação com
FOL146 (prevenção);
E - Inoculação com o isolado FOL146 seguida
quatro dias depois pela inoculação com CHF
78 (remediação).
RESULTADOS E DISCUSSÃO
4) Análise de nutrientes minerais
A - Controle não inoculado;
B - Inoculação apenas com o isolado CHF 78;
C - Inoculação apenas com o isolado FOL146;
D -Inoculação com o isolado CHF 78 seguida quatro dias depois pela inoculação com FOL146 (prevenção);
E - Inoculação com o isolado FOL146 seguida quatro dias depois pela inoculação com CHF 78 (remediação).
RESULTADOS E DISCUSSÃO
4) Análise de nutrientes minerais
CONCLUSÃO
T. asperellum cepa CHF 78 pode reduzir a gravidade da murcha de Fusarium de tomate e
promover o crescimento da planta, o que pode ser atribuído à sua capacidade de solubilizar Ca3
(PO4) 2 e de produzir celulases, sideróforos, AA, proteases e quitinases.
Inocular mudas de tomate com CHF 78 pode reduzir a murcha de Fusarium e, por sua vez,
diminuir a possibilidade de disseminação no campo via mudas infectadas .
Portanto, CHF 78 pode ser potencialmente integrado com outras estratégias de gestão para
reduzir as perdas causadas por esta doença sob práticas comerciais de produção de tomate.
REFERÊNCIAS
Li, Y. T., Hwang, S. G., Huang, Y. M., & Huang, C. H. (2018). Effects of Trichoderma asperellum on
nutrient uptake and Fusarium wilt of tomato. Crop Protection, v. 110, p. 275-282, 2018.
OBRIGADA!
Rhavena Rocha Pereira
ambientalrhavenarocha@gmail.com

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APRESENTAÇÃO DO ARTIGO

  • 1. Efeitos de Trichoderma asperellum na absorção de nutrientes e murcha de Fusarium do tomate U N I V E RS I DA D E F E D E R A L D O R ECÔ N C AVO DA B A H I A C E N T RO D E C I Ê N C I A S AG R Á R I A S , A M B I E N TA I S E B I O LÓ G I C A S P RO G R A M A D E P Ó S G R A D UAÇ ÃO E M C I Ê N C I A S AG R Á R I A S Rhavena Rocha Pereira¹ Rafaela Simão Abrahão Nóbrega² Júlio César Azevedo Nóbrega² Aline Simões da Rocha Bispo² Irana Paim Silva² ¹Doutoranda em Ciências Agrárias ² Docentes da disciplina Seminários em Ciências Agrárias I Cruz das Almas, BA Junho - 2021
  • 2. INTRODUÇÃO O tomateiro Lycopersicon esculentum se desenvolve bem em regiões de clima temperado, tropical de altitude e subtropical. Produção mundial China 31% (> 50 mi de toneladas) Índia 11% Estados Unido 8% FAO, 2016. Fonte: André Fachini Minitti, Embrapa, 2019.
  • 3. INTRODUÇÃO Murcha de Fusarium Amarelecimento das folhas mais velhas Escurecimento dos tecidos vasculares Retardo do crescimento da planta Plantas de tomateiro com sintomas de murcha e seca das folhas inferiores causada por Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici. Fonte: Ricardo Borges Pereira, Embrapa Hortaliças, 2016.
  • 4. INTRODUÇÃO Agente causal :  Fusarium oxysporum f. sp.lycopersici (FOL) Manejo: Fumigação do solo  Rápida recolonização do solo fumigado por conídios de FOL liberados de plantas infectadas  Alto custo  Preocupações sociais, ambientais e regulatórias
  • 5. INTRODUÇÃO Controle biológico Trichoderma Mecanismos de ação Competição Antibiose Parasitismo Indução de resistência Promoção de crescimento Ação parasítica sobre o fitopatógeno Rhizoctonia Fonte: Itamar Soares de Melo, Embrapa Meio Ambiente
  • 6. INTRODUÇÃO Fertilização Murcha do Fusarium Baixo pH do solo N-NH4 alto P alto, Mg alto
  • 7. OBJETIVOS Isolar uma espécie de Trichoderma com um alto nível de atividade antagônica contra FOL e; Determinar a relação entre a severidade da doença da murcha de Fusarium e a absorção de nutrientes por tomateiros cultivados em vasos.
  • 8. MATERIAIS E MÉTODOS 1) Fungos isolados (Huang et al., 2016) FOL146 (raça 2) de F. oxysporum f. sp.lycopersici (FOL) Dominante em Taiwan Patogenicidade foi previamente confirmada CHF 78 de Trichoderma (Chung e Hoitink, 1990) Melhor capacidade antagônica contra FOL em um teste de cultura dupla.
  • 9. MATERIAIS E MÉTODOS 2) Extração de DNA e reação de PCR Método de brometo de hexadeciltrimetilamônio (Ausubel et al., 1998) Marcador moleculares: ITS e TEF 1α Sequenciamento: CodonCode Aligner versão 5.0.2 Números de acesso das sequências: ITS: KX377621 TEF1α: KX377622
  • 10. MATERIAIS E MÉTODOS 3) Análise filogenética Sequências representativas de ITS e TEF1α de Trichoderma foram baixados do GenBank para alinhamento com sequências de CHF 78 O alinhamento foi realizado usando Clustal X versão 2.0.6 e ajustado a olho nu usando BioEdit versão 7.2.5.
  • 11. MATERIAL E MÉTODOS 4) Traços de promoção de crescimento de plantas Degradação enzimática da celulose e da lignina do CHF 78 Produção de ácido indolacético (IAA) Capacidade de solubilização de fosfato Produção de sideróforos Produção de protease e quitinase
  • 12. MATERIAL E MÉTODOS 5) Eficiência de biocontrole de Trichoderma sp. Cultivar: 'Agricultores 301'(Known-You Co., Ltd.,Kaohsiung City, Taiwan) Tratamentos: Controle não inoculado; Inoculação apenas com o isolado CHF 78; Inoculação apenas com o isolado FOL146; Inoculação com o isolado CHF 78 seguida quatro dias depois pela inoculação com FOL146 (prevenção) e; Inoculação com o isolado FOL146 seguida quatro dias depois pela inoculação com CHF 78 (remediação). DIC com 6 repetições em câmara de crescimento
  • 13. MATERIAL E MÉTODOS 5) Eficiência de biocontrole de Trichoderma sp. Variáveis analisadas: Altura da planta; Comprimento da raiz; Peso seco e; Severidade da doença após 4 semanas. Todo experimento foi repetido 1 vez
  • 14. MATERIAL E MÉTODOS 6) Análise de nutrientes minerais Concentração total de N - método de destilação a vapor (Bremner e Mulvaney, 1982); Concentrações de P, K, Ca, Mg, Fe, Mn, Cu e Zn - espectrometria de massa com plasma indutivamente acoplado (ICP-MS).
  • 15. MATERIAL E MÉTODOS 7) Análise estatística  PROC GLIMMIX do SAS®(versão 9.4; SAS Institute, Gary, NC) Comparação de médias a 5% de significância pelo método Fisher Least Significant Difference (LSD) Análise de correlação de Pearson
  • 16. RESULTADOS E DISCUSSÃO 1) Análise filogenética Isolado CHF 78 T. asperellum
  • 17. RESULTADOS E DISCUSSÃO 2) Traços de promoção de crescimento de plantas CHF 78 não produz ligninases CHF 78 produziu uma concentração de 8,59 mg / ml de IAA após 7 dias de crescimento. Solubilização de fosfato - Ca3 (PO4) 2 CHF 78 produziu sideróforos: hidroxamatos e carboxilatos Produção de proteases e quitinases
  • 18. RESULTADOS E DISCUSSÃO 3) Eficiência de biocontrole de Trichoderma sp. A - Controle não inoculado; B - Inoculação apenas com o isolado CHF 78; C - Inoculação apenas com o isolado FOL146; D -Inoculação com o isolado CHF 78 seguida quatro dias depois pela inoculação com FOL146 (prevenção); E - Inoculação com o isolado FOL146 seguida quatro dias depois pela inoculação com CHF 78 (remediação).
  • 19. Resultados 3) Eficiência de biocontrole de Trichoderma sp. A - Controle não inoculado; B - Inoculação apenas com o isolado CHF 78; C - Inoculação apenas com o isolado FOL146; D -Inoculação com o isolado CHF 78 seguida quatro dias depois pela inoculação com FOL146 (prevenção); E - Inoculação com o isolado FOL146 seguida quatro dias depois pela inoculação com CHF 78 (remediação).
  • 20. RESULTADOS E DISCUSSÃO 3) Eficiência de biocontrole de Trichoderma sp. A - Controle não inoculado; B - Inoculação apenas com o isolado CHF 78; C - Inoculação apenas com o isolado FOL146; D -Inoculação com o isolado CHF 78 seguida quatro dias depois pela inoculação com FOL146 (prevenção); E - Inoculação com o isolado FOL146 seguida quatro dias depois pela inoculação com CHF 78 (remediação).
  • 21. RESULTADOS E DISCUSSÃO 4) Análise de nutrientes minerais A - Controle não inoculado; B - Inoculação apenas com o isolado CHF 78; C - Inoculação apenas com o isolado FOL146; D -Inoculação com o isolado CHF 78 seguida quatro dias depois pela inoculação com FOL146 (prevenção); E - Inoculação com o isolado FOL146 seguida quatro dias depois pela inoculação com CHF 78 (remediação).
  • 22. RESULTADOS E DISCUSSÃO 4) Análise de nutrientes minerais
  • 23. CONCLUSÃO T. asperellum cepa CHF 78 pode reduzir a gravidade da murcha de Fusarium de tomate e promover o crescimento da planta, o que pode ser atribuído à sua capacidade de solubilizar Ca3 (PO4) 2 e de produzir celulases, sideróforos, AA, proteases e quitinases. Inocular mudas de tomate com CHF 78 pode reduzir a murcha de Fusarium e, por sua vez, diminuir a possibilidade de disseminação no campo via mudas infectadas . Portanto, CHF 78 pode ser potencialmente integrado com outras estratégias de gestão para reduzir as perdas causadas por esta doença sob práticas comerciais de produção de tomate.
  • 24. REFERÊNCIAS Li, Y. T., Hwang, S. G., Huang, Y. M., & Huang, C. H. (2018). Effects of Trichoderma asperellum on nutrient uptake and Fusarium wilt of tomato. Crop Protection, v. 110, p. 275-282, 2018.