Tipos de microscópios e funcionamento do microscópio ótico.

1. Microscopia

2. Microscópios
• Óticos (MOC)
• funcionam com radiação luminosa
• a luz atravessa o objeto
• as lentes aumentam as estruturas.
• Eletrónicos (ME)
• funcionam com um feixe de electrões
• as lentes aumentam as estruturas.
– de transmissão (MET)
• o feixe de eletrões atravessa o objeto
• fornece informação detalhada da estrutura interna do espécime
– de varrimento (MEV)
• a luz varre a superfície do objecto
• fornece informação detalhada da superfície do espécime

3. TÉCNICA
TÉCNICA RESULTADO
Campo claro (espécimen não
corado)
Luz atravessa directamente o
objecto.
Apenas se obtém bom contraste em
células naturalmente pigmentadas
ou coradas artificialmente
Célula do epitélio bucal humana.
Campo claro (espécimen corado)
A coloração com diferentes
corantes aumenta o contraste, mas
a maioria das técnicas de coloração
exige que as células sejam fixadas
(preservadas).
Contraste de fase
Aumenta o contraste em células
não coradas amplificando as
variações de densidade dentro de
cada espécimen; usado
principalmente para examinar
células vivas não pigmentadas.
50 µm
Contraste de interferência
(Nomarski)
Semelhante à microscopia de
contraste de fase, usa modificações
nas lentes para aumentar as
diferenças na densidade, fazendo a
imagem parecer quase 3D.
Fluorescência
Mostra a localização de moléculas
específicas na célula marcando-as
com tintas fluorescentes e
anticorpos. Estas substâncias
absorvem radiação ultravioleta e
emitem luz visível. (Célula de
artéria).
Confocal
Usa lasers e ópticas especiais para
especial observação de espécimes
corados com tintas fluorescentes.
Apenas um único plano de focagem
é iluminado; fluorescência acima e
abaixo do plano é retirada por um
computador, resultando uma
imagem nítida. tecido nervoso
corado (em cima), células nervosas
são verdes, de suporte vermelhas e
zonas de sobreposição amarelo.
Numa fotografia normal de
fluorescência (em baixo) seria
desfocada..
50 µm
50 µm

4. Microscópio eletrónico de
transmissão (MET).
O MET permite observar um
pequeníssima secção de um
espécimen.
Célula da traqueia, revelando a sua
ultra-estrutura, alguns cílios em secção
transversal outros em longitudinal.
Secção
longitudinal
de um cílio
Secção transversal
de um cílio 1 µm
Microscópio eletrónico de varrimento
(MEV).
As microfotografias tiradas com o MEV
mostram uma imagem a 3D da superfície
do espécimen.
Célula da traqueia de um coelho coberta
com organelos móveis denominados
cílios.
O batimento dos cílios ajuda o
detritos/resíduos inalados a movimentar-
se para cima até à garganta.
Cilia
1 µm
TÉCNICA
RESULTADO
Microscópios eletrónicos

5. Constituição microscópio ótico

6. Objetivas

7. Objetiva de imersão

8. Uso do microscópio
Atividade
prática

9. Poder de ampliação
• capacidade de ampliar (aumentar) a imagem de uma objecto.
• resulta do poder ampliador da objectiva e da ocular, segundo a fórmula:
Poder ampliador total = Poder ampliadorobjectiva X Poder ampliadorocular

10. Poder de definição
• capacidade de produzir imagens com contornos bem definidos.

11. Resolução
• Poder de resolução – capacidade de se distinguir dois pontos que se
encontrem muito próximos.
• Limite de resolução – limite de distância a que devem estar dois
pontos para que sejam observados separadamente.
• L. R. (olho humano) = 0,1 mm
• L. R. (microscópio óptico composto) = 0,2 μm

12. Características da imagem ao M. O. C.
• Ampliada
• Duplamente invertida
• Virtual

13. Profundidade de campo

14. Técnicas de preparação e montagem
de material biológico para observação
ao microscópio ótico composto

15. Técnicas que permitem aumentar o grau de transparência das
estruturas biológicas
• Esmagamento
– É aplicada quando as células do material
estão fracamente aderidas entre si.
• Dissociação
– É utilizada para separar as unidades
constituintes do material a observar.
• Esfregaço
– É utilizado quando as células a observar
estão em meio líquido.
• Corte
– É utilizado quando o material é muito
consistente e de grande espessura. Deve
ser utilizado um micrótomo mas como
este aparelho é muito caro recorre-se
muitas vezes a métodos alternativos.

16. Técnicas que permitem aumentar o contraste das
estruturas biológicas (coloração)
• Técnica de imersão
– O material fica imerso durante
alguns minutos.
• Técnica de irrigação
– O meio de montagem de uma
preparação é substituído por outro
meio que é o corante.

17. Técnica de montagem
• Uma preparação microscópica é composta por:
1. Objeto (material biológico)
2. Lâmina
3. Lamela
4. Meio de montagem – geralmente um líquido incolor que é colocado
entre a lâmina e a lamela.