APRESENTAÇÃO DE ARTIGO CIENTIFICO SOBRE CROMATOLOGIA EM CAMADA DELGADA

1. MINISTÉRIO DA EDUCAÇÃO
UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ÁRIDO
PRÓ-REITORIA DE PESQUISA E PÓS-GRADUAÇÃO
PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM AMBIENTE, TECNOLOGIA E SOCIEDADE
DISCIPLINA: TÓPICOS ESPECIAIS EM AMBIENTE, TECNOLOGIA E SOCIEDADE
Mossoró/RN
14 de junho de 2023
Mestranda: Ingrid Eduarda Alves Paiva
Professora Dra. Ana Beatriz Rocha de Jesus Passos
I AVALIAÇÃO
APRESENTAÇÃO DE ARTIGO CIENTIFICO
SOBRE CROMATOLOGIA EM CAMADA DELGADA

2. APLICAÇÃO DA TÉCNICA DE ANÁLISE DE IMAGENS PARAA
DETERMINAÇÃO DE TIOFANATO DE METILA POR
CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA
“Application of image analysis technique for the determination of thiophanate methyl by thin-layer chromatography”
Autores:
Monika Skowron; Robert Zakrzewski; Witold Ciesielski.
Para acessar este artigo: https://doi.org/10.1080/03067319.2018.1435782
Jornal Internacional de Química Analítica Ambiental
“International Journal of Environmental Analytical Chemistry”
Título:
 Recebido em 12 de outubro de 2017;
 Aceito em 22 de janeiro de 2018;
 Publicado em 05 de fevereiro de 2018.

4. 1. INTRODUÇÃO
 A cromatográfica em camada fina (TCL) é uma técnica analítica simples e útil;
 Possibilita determinação quantitativa de analitos com base na analise de imagens digitais de placa
TLC, usando apenas um software de computador especializado;
 Semelhante à densitometria, a quantificação é baseada na conversão de manchas em picos;
 Técnica usada com mais frequência como alternativa à densitometria;
 O método TLC combinado com ensaio densitométrico foi desenvolvido para determinação de
Tiofanato metílico contido em formulações acrílicas para aplicação tópica em feridas de árvores;
 O método foi dedicado ao controle do teor de composto ativo após sua formulação e após aplicação a
longo prazo.

6. O artigo apresenta um método rápido e simples para a
determinação quantitativa de Tiofanato Metílico em
sucos de maçã e laranja usando TLC combinada com
técnica de análise de imagem e reação de iodo-azida
como sistema de detecção.

7. 2.1 REAGENTES E SOLUÇÕES
2. EXPERIMENTAL
 Tiofanato metílico;
 Azida de sódio;
 Cristais de iodo;
 Amido;
 Acido clorídrico e metanol;
 Acetona;
 N-hexano;
 Placas de alumínio de sílica em gel TCL C18
(5 x 5 cm);
 Agua desionizada.
 Solução de pulveirização
Preparada dissolvendo 2,0 g de azida de sódio em 30 mL de
água. Em seguida foram adicionados 10 mL de solução de
amido a 5% e o pH foi ajustado para 5,5 com ácido clorídrico
(1:1).
A mistura foi transferida para um balão volumétrico de 50
mL, que foi diluído com água até a marca e bem agitado.
 Solução de estoque de Tiofanato metílico
A solução estoque de TM na concentração de 14,97 mg foi
preparada pela dissolução de 15,00 mg do padrão TM em
1000 μL de acetona.
 Amostra dos sucos
Preparada em um tubo Eppendorf de 0,2 mL com o seguinte
conteúdo: 25 μL de suco; 0, 5 e 20 μL de solução estoque
TM e acetona; o volume total da mistura foi de 100 μL. Da
mesma forma, foram preparadas duas soluções contendo
apenas agrotóxico.

8. 2.2 EQUIPAMENTO
2. EXPERIMENTAL
As soluções de analito foram aplicadas em placas de TLC,
sob uma manta de nitrogênio usando aplicador
semiautomático Linomat V e uma microseringa de 100
ÿL;
As placas foram desenvolvidas em uma câmara DS
horizontal e depois pulverizadas usando o pulverizador de
cromatografia;
Para expor aos vapores de iodo, as placas molhadas foram
colocadas em recipiente de vidro âmbar contendo iodo
(câmara de iodo).
As placas visualizadas foram digitalizadas usando um
scanner de escritório HP ScanJet G4010;
As imagens foram salvas como arquivos JPEG.

9. 2.3 PROCESSAMENTO DE IMAGEM
2. EXPERIMENTAL
 O software TLSee® (AlfaTech, Itália) foi usado como um
programa de processamento de imagem;
 Os picos foram integrados usando a função de integração
automática;
 Depois que o pico foi integrado, as propriedades do pico (Rf, área)
foram calculadas e exibidas;
 Os valores da área do pico foram obtidos para construir a curva de
calibração ;
 Preparar cromatogramas de pico para todas as quantidades
analisadas de TM com o uso de software de planilha.

10. 2.4 APLICAÇÃO DE AMOSTRA E CROMATOGRAFIA
2. EXPERIMENTAL
 A solução do agrotóxico foi aplicada nas placas TLC com manchas em volume de 0,5 μL;
 A mancha foi aplicada a 10 mm da borda e espaçadas de 10 mm;
 A taxa de aplicação foi de 250 nL sÿ1;
 Cada placa foi desenvolvida a uma distância de 4,0 cm em uma câmara horizontal, sendo previamente
saturada com acetonitrila-água (5:5, v/v) por 10 minutos.
Após desenvolvimento e secagem, as placas foram pulverizadas com solução de pulverização e, em
seguida, expostas ao vapor de iodo por 25 s para converter o pesticida em seu análogo oxidado.
A placa foi então deixada por 10 minutos para permitir que a reação de iodo-azida prosseguisse.
O pesticida apareceu como manchas brancas em um fundo azul-violeta.
As placas visualizadas foram digitalizadas a 300 dpi e o processamento da imagem foi realizado

11. 2.5 FAIXA DE DETERMINAÇÃO, LINEARIDADE, PRECISÃO E EXATIDÃO
2. EXPERIMENTAL
 Soluções de trabalho TM de diferentes concentrações (preparadas pela diluição da solução
estoque com acetona) foram aplicadas na placa na faixa de 0,3–3,0 μg spotÿ1
 Seis experimentos replicados foram realizados conforme descrito nas seções anteriores.
 Com base nos resultados obtidos, a linearidade, a precisão interdias (desvio padrão relativo
(RSD)) e a exatidão (porcentagem de recuperação) foram calculadas.

12. 2.6 DETERMINAÇÃO DE AGROTÓXICOS EM SUCOS DE FRUTAS
2. EXPERIMENTAL
 Os sucos de maça e laranja foram adquiridos no mercado local;
 A análise foi realizada usando amostras contendo sucos enriquecidos com diferentes
quantidades de pesticidas.
 Os resultados obtidos em amostras contendo sucos enriquecidos foram comparados com os
obtidos em soluções contendo as mesmas quantidades de pesticidas.
 As soluções foram aplicadas na mesma placa em volume de 0,5 μL.
 O procedimento de análise foi idêntico ao descrito anteriormente.
 Três réplicas foram realizadas.

13. 3.1 OTIMIZAÇÃO DAS CONDIÇÕES CROMAGRÁFICAS
3. RESULTADOS E DISCUSSÕES
Um dos parâmetros que pode afetar a forma das manchas após a revelação da placa examinada foi a saturação da câmara
cromatográfica com vapor de solvente. Verificou-se que é necessário saturar a câmara cromatográfica por 10 min. As
manchas foram melhor definidas, ou seja, arredondadas sem bordas borradas, e o valor de Rf foi de 0,50.
A otimização da concentração de azida sódica foi realizada na faixa de 1 a 6%
A concentração de amido foi determinada usando soluções na faixa de concentração de 0,5 a 3%, tendo os melhores
resultados foram obtidos na concentração de 1%.
O próximo parâmetro otimizado foi o pH da mistura de pulverização, que foi examinado na faixa de 5,0 a 6,5. Em pH 5,0, o
fundo era azul claro e as manchas não eram facilmente visíveis e a cor do fundo das placas desbota muito
rapidamente.

14. As manchas do TM, as placas foram colocadas na câmara de iodo por 25 segundos e escaneadas por 10 minutos após
sua remoção.
O processamento da imagem digital do cromatograma TLC, as chapas foram digitalizadas nas resoluções de 200, 300 e
600 dpi. A resolução mínima que garante bons resultados foi de 300 dpi.
Os melhores resultados foram obtidos quando suas
soluções foram aplicadas na forma de pontos
correspondentes à largura de banda de 0 mm, e com
velocidade de aplicação de 250 nL sÿ1.
A dependência das áreas dos picos com os valores dos
parâmetros otimizados

16. 3.2 LINEARIDADE, PRECISÃO E RECUPERAÇÃO
3. RESULTADOS E DISCUSSÕES
A correlação proporcional entre as áreas
dos picos resultantes e a quantidade de
composto no local correspondente
aplicado na placa possibilita a
determinação quantitativa do composto
analisado.
y = 37,317 x + 80,385
R2 = 0,9990

18. 3.3 DETERMINAÇÃO DE AGROTÓXICOS EM SUCOS DE FRUTAS
3. RESULTADOS E DISCUSSÕES

20. 4. CONCLUSÕES
 O método apresentado neste artigo é o primeiro em que a análise quantitativa de TM foi
realizada sem o uso de equipamentos densitométricos.
 Pode ser aplicado com sucesso para sua determinação em sucos de frutas.
 Também é relativamente rápido e os resultados são caracterizados por boa precisão e
exatidão.
 A principal vantagem da análise de imagem é sua simplicidade e baixo custo resultante da
aplicação de computador equipado com scanner e software adequado para quantificação.

21. • Skowron, M; Zakrzewski, R; Ciesielski, W. Aplicação da técnica de análise de imagem para a
determinação de tiofanato de metila por cromatografia de camada fina. Jornal Internacional de Química
Analítica Ambiental, p. 286-294, 2018. DOI:10.1080/03067319.2018.1435782.
• Monika Skowron, Robert Zakrzewski & Witold Ciesielski (2018) Application of image analysis technique
for the determination of thiophanate methyl by thin-layer chromatography, International Journal of
Environmental Analytical Chemistry, 98:3, 286-294, DOI: 10.1080/03067319.2018.1435782
REFERÊNCIA BIBLIOGRÁFICA