A CEC combina as melhores características da CE e da HPLC, permitindo: 1) A separação de espécies carregadas e não carregadas; 2) Separações altamente eficientes de microvolumes de amostra sem bombeamento de alta pressão; 3) O transporte da fase móvel através da fase estacionária por bombeamento eletrosmótico, resultando em perfil de fluxo plano e maior eficiência na separação.

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Eletrocromatografia Capilar- CEC
Capillary electrochromatography
Híbrido da CE com HPLC oferece algumas características do melhor
das duas técnicas.
Duas técnicas desenvolvidas a partir de 1980:
Eletrocromatografia Capilar em coluna empacotada, e
Eletrocromatografia Capilar eletrocinética micelar (MECC – MEKC)
Vantagens CEC em comparação HPLC e CE:
Pode ser aplicada a separação de espécies não carregadas como
HPLC
Permite a separação altamente eficientes de micro-volumes de
solução, como CE, sem necessidade de sistema de bombeamento a
alta pressão .
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Eletrocromatografia Capilar- CEC
Capillary electrochromatography
Histórico:
1° expressão utilizando aplicação de Potencial elétrico em sistemas
cromatográficos 1974 Pretorios et.al. uso do FEO
1° separação CEC Jorgenson e Lukacs 1981 Eletrodo grafite ,
potencial 30 KV, capilar Ø int. 170 um, recheio de silica Partisil 10 ODS-2,
detecção fluorescência, separando 9 metil antraceno e perileno, eficiência
31000 e 23000 pratos teóricos.
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Eletrocromatografia Capilar- CEC
Capillary electrochromatography
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A CEC:
Difere da Cromatografia Eletrocinética Micelar pela utilização de uma fase
estacionária verdadeira.
O capilar [40-90 cm e Ø <= 100 um (efeito Joule↓)] é preenchido com uma
fase estacionária e o solvente que se movimenta devido a eletrosmose.
Fase Móvel mistura de tampão aquoso e solvente orgânico (acetonitrila e
metanol)
A CEC apresenta o dobro de pratos teóricos comparado ao HPLC para o
mesmo tamanho de partícula e de coluna.
Como não se usa pressão não há queda de pressão associada a particulas
pequenas
Uma fase móvel é transportada através do bombeamento eletrosmótico do
fluxo ao invés do bombeamento mecânico sistema mais simples.
O perfil do bombeamento é plano diferente do parabólico do HPLC conduz
menor alargamento da banda consequência maiores eficiências na separação.
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Eletrocromatografia em coluna empacotada:
•Menos amadurecida de todas as técnicas
Método Solvente polar é dirigido pelo FEO através de um capilar
empacotado com uma fase estacionária, como HPLC Fluxo reverso.
As separações dependem da distribuição das espécies entre a fase
móvel e a fase estacionária líquida mantida no empacotamento.
Aplicações :
•Separação de Enatiômeros
•“troca iônica” retenção se deve à atração entre os íons do
soluto e os sítios carregados, ligado quimicamente à fase
estacionária.
•Análise de traços
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Eletrocromatografia Capilar: Cromatografia
Eletrocinética Capilar
Cromatografia semelhante ao MIcelar:
HPLC, exceto que a fase móvel
se movimenta devido a Eletroforese com as micelas
eletrosmose em vez de pressão atuando como uma fase
pseudo estacionária
Desvantagens da MEKC sobre CEC:
Difícil trabalho com solutos muito polares retidos muito fortemente
nas micelas não há separação
Limitada capacidade de separação função do intervalo de tempo de
saída do soluto não retido até o completamente retido
Utilização de tensoativos que causam incompatibilidades com os
sistemas de acoplados espectrometria de massa
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Eletrocromatografia Capilar utiliza o melhor da CE e da HPLC:
HPLC :
o Maior seletividade ( capacidade de se nalisar uma classe de
compostos de interesse sem efeito de interferências) e versatilidade
de separação de compostos neutros.
CE:
o Maior eficiência de separação,
oNão utiliza bombas de alta pressão, FEO promove perfil plano de
fluxo pode existir interferência da fase estacionária
CE Eletroferograma
CEC Eletrocromatograma
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FE na Eletrocromatografia Capilar deve atender especificações :
Interagir de maneira seletiva com varios tipos de moléculas de
soluto, neutros ou não, proporcionando, assim como HPLC,
diferentes taxas de migração através da coluna
Apresentar porosidade, permitindo passagem do FEO e
dependendo do tipo de FE aumentado ou diminuindo cfme. o
desejado
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3 Tipos principais de colunas em CEC:
Coluna Recheada material particulado geralmente poroso e
esférico preenchimento até a janela de detecção FM passagem
somente pelos poros.
Colunas Tubulares abertas material cromatografico é apenas o
revestimento polimérico interno no capilar e é ligado quimicamente ao
mesmo.
Coluna Monolítica mesmo material de fabricação das colunas
tubulares abertas , porém presente radialmente em todo o comprimento
do capilar
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Coluna Recheada com partículas de silica
•Ø das partículas de sílica de 1,5 a 5 um quimicamente
modificadas.
•Separação por interações hidrofílicas, hidrofóbicas, troca
iônica e bioafinidade.
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Colunas capilares abertas:
•Recobrimento capilar com filme de Fase Estacionária (FE)
•FE 4 tipos:
Quimicamente ligadas Ligações orgânicas à superfície sílica
reações silanização e hidrosililação ( adição de grupos silanos)
Fisicamente adsorvidas interações eletrostáticas superfície da sílica e
o ligante ( ex. surfactantes)
A base de polimeros orgânicos ( polimerização in situ)
Revestidas com processo sol-gel ( alcóxidos)
Vantagens:
Facilidade de preparação das colunas
↑ área superficial camadas poliméricas
Utilização para verificação interações farmacos e proteínas
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Coluna monolítica:
Recheadas com leito contínuo de FE, altamente poroso, contendo rede de
canais interconectados para passagem da Fase Móvel (FM)
2 Tamanhos de poros : macroporos (2-50 nm) e mesoporosos (< 2 nm)
1° aplicação 1970 Ross e Jefferson 1989 ↑ interesse Hjerten et. Al. geis
de poliacrilamida com ↓grau de intercruzamento para separação proteínas.
FE 2 categorias:
Monolitos de Sílica fusão/sinterização, sol gel e polimierização
Monolitos à base de polimeros orgânicos (base poliestireno, poliacrilamida,
polimetacrilato)
Utilização : + usados monolitos à base políemeros organicos ↑ facil
preparação, + robusto e ↑ tempo de vida.
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Fases estacionárias:
Baseadas nas FE HPLC fase reversa e iônica
Fases reversas protonação da sílica em pH abaixo de 3 ↓ FEO
análises mais lentas e analitos carregados podem ser fortemente retidos.
Moléculas pequenas carregadas ideal troca iônica
Modo misto estão sendo mais utilizadas ( grupos iônicos e cadeias
hidrofóbicas) ↑↑FEO em larga faixa de pH.
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Aplicações:
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Explique: ordem de eluição componente 1
Tempo de eluição?
HPLC
CEC
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Ordem de eluição é em função das disferentes fases móveis, que geram
diferentes ordens de eluição, se as fases fossem iguais teríamos a mesma ordem
de eluição.
O tempo de eluição é em função do baixo FEO.
Se ajustarmos a fase móvel obtemos a seguinte eluição:
Capillary
Electrochromatography,
Smith N., Beckman
Coulter, Londres, Reino
Unido
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Análises de hidrocaronetos
poliaromáticos é realizada
por HPLC e CEC obtem
resolução de 180.000
pratos teóricos.
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Capillary Electrochromatography, Smith N., Beckman Coulter, Londres, Reino Unido
Separação de isômeros do antibiótico
Cefalosporin, foi requerida uma coluna
capilar de 40 cm, seria impraticável
esta separação por HPLC nesta coluna
em função da pressão que seria
necessária.
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Capillary Electrochromatography, Smith N., Beckman Coulter, Londres, Reino Unido
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Eletrocromatografia Capilar (CEC)
Capillary Eletrochromatography é um híbrido da eletroforese capilar
com o HPLC e oferece algumas das melhores caracteristicas de
cada uma das técnicas:
•Como HPLC pode ser aplicada as espécies não carregadas,
•Como CE permite separações altamente eficientes de microvolumes
de solução de amostra sem necessidade de sistema de
bombeamento de amostra em alta pressão.
•Na eletrocromatograia, uma fase móvel é transportada através de
uma fase estacionária pelo bombeamento eletrosmóticodo fluxo ao
invés do sistema mecânico com perfil plano e não parabólico. A face
plana do fluxo leva a um menor alargamento de banda Maior
eficiência na separação!!
•Pode ser realizada com colunas empacotadas e capilar.
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