Processo de reativação de isolados de fungos para uso no laboratorio de fitopatologia.

1. Protocolo para Reativação de Isolados do Fungo Pyricularia grisea:
Materiais Necessários:
1. Placas de Petri com Agar Aveia (AA) - 20 ml/L
2. Água esterilizada
3. Alça de Drigalski
4. Câmara de fluxo laminar
5. Incubadora com temperatura adequada para o crescimento do Pyricularia grisea
Procedimento:
1. Preparação das Placas de AA:
a. Prepare placas de Petri contendo 20 ml/L de Agar Aveia (AA) de acordo com o
protocolo mencionado anteriormente.
b. Deixe as placas solidificarem e estabilizarem antes de prosseguir.
2. Criação de Condições Propícias:
a. No interior de uma câmara de fluxo laminar, adicione 2 ml de água esterilizada no
centro de cada placa de Petri preparada.
b. Espalhe com alça de Drigalski e deixe na câmara de fluxo laminar por 24 horas
c. Certifique-se de que todas as operações são realizadas de maneira asséptica para
evitar contaminações.
3. Reativação do Isolado:
a. Utilizando uma alça de Drigalski, transfira uma pequena quantidade do isolado de
Pyricularia grisea para o centro da placa contendo a água esterilizada.
b. Esmague suavemente o isolado utilizando a alça de Drigalski para favorecer a
dispersão do fungo na placa.
c. Deixe a placa semi-fechada na câmara de fluxo laminar por 24 horas para permitir a
recuperação e adaptação do fungo.
4. Repicagem para Nova Placa:
a. Após 24 horas, utilizando a alça de Drigalski, raspe uma pequena porção do
crescimento do fungo na placa original e transfira para uma nova placa de Agar Aveia
(AA).
b. Espalhe uniformemente o material coletado na nova placa.
c. Deixe a nova placa semi-fechada na câmara de fluxo laminar por mais 24 horas.
5. Incubação:
a. Coloque as placas recém-preparadas em uma incubadora, mantendo a temperatura
ideal para o crescimento do Pyricularia grisea (geralmente em torno de 25-28°C).
b. Incube as placas por um período adequado, monitorando o crescimento do fungo.
6. Observação da Esporulação:
a. Ao longo do tempo de incubação, observe se há formação de estruturas de
esporulação no fungo.
b. Se a esporulação for bem-sucedida, o isolado estará pronto para ser utilizado em
experimentos subsequentes.
Este protocolo fornece um método passo a passo para reativar isolados do fungo
Pyricularia grisea e garantir um crescimento saudável para futuros estudos. Lembre-se
de seguir práticas assépticas em todas as etapas para evitar contaminações indesejadas.