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Apresentação do lcga dez.2012

1) Tecido testicular de cavalos de diferentes idades foi transplantado em camundongos imunossuprimidos para avaliar o desenvolvimento das células germinativas. 2) O tecido de cavalos mais velhos mostrou maior potencial de desenvolvimento, com espermatogônias se diferenciando até espermatócitos. 3) A administração de gonadotrofinas melhorou ligeiramente o desenvolvimento das células germinativas nos tecidos transplantados.

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DESENVOLVIMENTO DE CÉLULAS GERMINATIVAS DE TECIDO TESTICULAR EQUINO TRANSPLANTADO EM CAMUNDONGOS Germ cell development in equine testis tissue xenografted into mice Reproduction Researsh, 2006 Pedro Augusto Cordeiro Borges
2 Introdução  Enxerto de diferentes espécies em camundongos Eficiência da espermatogênese * Eficiente * Ineficiente - Porcos - Gatos - Bodes - Macacos -Touros Honaramooz, 2002 Honaramooz,Oatley;Snedaker, 2004; Rathi, 2005
3 Introdução  Enxerto de tecido testicular equino não relatado Modelo in vivo - entendimento da espermatogênese - tratamentos semelhantes - cavalos valiosos - animais experimentais castração ou morte - descendência por ICSI (Cochran et al. 1998)
4 Introdução Gonadotrofinas  crescimento e desenvolvimento testicular Enxerto em camund. Castrado  gonadotrofinas endogenas LH  Leyding  testosterona  Feedback Diferenças  ↓ eficiência da espermatogênese Suplementação com gonadotrofinas  melhorar a espermatogênese
5 Objetivo Eficiência da espermatogênese Efeito da administração de gonadotrofinas
6 Material e Métodos
7 Material e Métodos • Experimento 1 Standardbred 2 semanas Welsh pony Warmblood 5 meses Quarterhorse 10 meses Thoroughbred 12 meses 4 anos
8 Material e Métodos • Experimento 1  Remoção da cápsula e do tecido conjuntivo  1 – 2 mm  Dulbecco’s Eagle’s
9 Material e Métodos • Experimento 1  6 semanas  Imunossuprimidos
10 Material e Métodos • Experimento 1  Anestesiados e castrados Comissão Institucional de Usos e Cuidados com os Animais – Universidade da Pensilvânia  Base histológica
11 Material e Métodos • Experimento 2 Shetland pony Thoroughbred 8 meses 12 meses  PSMG 10 UI  14 semanas após  hCG 10 UI  25 semanas após  20 semanas  10 semanas
12 Material e Métodos • Recuperação e analise dos tecidos transplantados • Inalação Eutanásia de CO2 • Solução de Fixação Bouin’s • Etanol Banhos 70% Parafina • Histologia
13 Material e Métodos • Recuperação e analise dos tecidos transplantados  Todos os túbulos seminíferos avaliados  Maturação  lúmen e espermatogênese  Células germinativas  morfologia e localização  Túbulos degenerados  sem distinção de tipos celulares
14 Material e Métodos • Recuperação e analise dos tecidos transplantados  Tecidos saudáveis x degenerados  Apenas os saudáveis analisados  Camundongo = unidade experimental  Vesículas seminais pesadas  secreção de testosterona
15 Análise estatística NRC-nude e ICR-scid Chi-square ou Student  ANOVA SigmaStat 3.0 Média e Desvio P< 0,05
16 Resultados
17 Experimento 1
18 Resultados Figura 1. Porcentagem de tecidos saudáveis recuperados por doador, 4 ou 8 meses após o enxerto (n=6 receptores por doador) % de tecidos saudáveis recuperados  65 % saudáveis 93,8%  2-4 vezes maior 84,6% 65% 56,3% 20,3% Idade do doador
19 Resultados • Espermatogênese e desenvolvimento dos túbulos seminíferos  Células intersticiais e poucos cordões  Espermatogônias  Tecidos recuperados (4 e 8 meses)  pouco desenvolvidos - 35, 7% cordões  túbulos - 52 % degenerados - Espermatogônias - Após 8 meses  lóbulos mais aparente
20 Resultados Welsh pony 5 meses Figura 2. A porcentagem de túbulos Porcentagem de túbulos seminíferos seminíferos contendo o tipo de célula germinativa indicada é demonstrada para o tecido proveniente do Welsh pony - 5 meses Espermatidés alongadas Espermatides arredondadas Espermatócitos em paquíteno Espermatogônia Sem células germinativas 0 – cachos e arranjo em lóbulos 8 – espermatócitos em paquíteno 4,8 0,8 % de túbulos degenerados Tempo em meses
21 Resultados Welsh pony 5 meses Figura 3. Aspecto histológico do tecido testicular equino (Welsh pony – 5 meses), antes de transplantado (A), apresentando apenas espermatogônias , e recuperado após 8 meses (B), apresentando espermatócitos em paquíteno.
22 Resultados Warmblood 10 meses Figura 4. A porcentagem de túbulos seminíferos contendo o tipo de célula Porcentagem de túbulos seminíferos germinativa indicada é demonstrada para o tecido proveniente do Warmblood 10 meses Espermatidés alongadas Espermatides arredondadas Espermatócitos em paquíteno Espermatogônia Sem células germinativas 0 – Espermatócitos em paquíteno 4 – Redução significativa 8 – Espermátides alongadas 7,7 1,5 % de túbulos degenerados Tempo em meses
23 Resultados Warmblood 10 meses Figura 5. Aspecto histológico do tecido testicular equino (Warmblood– 10 meses), antes de transplantado (C), apresentando espermatócitos em paquíteno como o tipo celular mais maduro, e recuperado após 8 meses (D), apresentando espermátides alongadas.
24 Quarterhorse Resultados 12 meses Figura 6. A porcentagem de túbulos seminíferos contendo o tipo de célula germinativa indicada é demonstrada para o Porcentagem de túbulos seminíferos tecido proveniente do Quarterhorse12 meses Espermatidés alongadas Espermatides arredondadas Espermatócitos em paquíteno Espermatogônia Sem células germinativas 0 – Espermátides alongadas 4 – Espermatócitos em paquíteno 8 – Retomada da espermatogênese 6,5 2,2 % de túbulos degenerados Tempo em meses
25 Quarterhorse Resultados 12 meses Figura 7. Aspecto histológico do tecido testicular equino (Quarterhorse – 12 meses), antes de transplantado (E), apresentando espermatogênese completa e recuperado após 8 meses (F), apresentando espermatócitos em paquíteno como o tipo celular mais maduro.
26 Thoroughbred Resultados 4 anos Figura 8. A porcentagem de túbulos seminíferos contendo o tipo de célula Porcentagem de túbulos seminíferos germinativa indicada é demonstrada para o tecido proveniente do Thoroughbred 4 anos Espermatidés alongadas Espermatides arredondadas Espermatócitos em paquíteno Espermatogônia Sem células germinativas 0 – Espermátides alongadas 4 – Redução significativa 8 – Retomada da espermatogênese 46,8 13,9 % de túbulos degenerados Tempo em meses
27 Thoroughbred Resultados 4 anos Figura 9. Aspecto histológico do tecido testicular equino (Thoroughbred – 4 anos), antes de transplantado (G), apresentando espermatogênese completa e recuperado após 8 meses (H), apresentando espermatócitos em paquíteno como o tipo celular mais maduro.
28 Experimento 2
29 Resultados • Efeito da gonadotrofina nos tecidos enxertados (experimento 2) - Antes do transplante  Thoroughbred e Welsh pony  espermatogônias - 3 tratados com gonadotrofina - 3 grupo controle 10 semanas 20 semanas  Recuperados  8 meses
30 Resultados • Welsh pony – 8 meses Porcentagem de túbulos seminíferos Figura 10. A porcentagem de túbulos seminíferos contendo o tipo de célula germinativa indicada é demonstrada para o grupo controle e o grupo tratado com gonadotrofina, com tecidos provenientes do doador de 8 meses de idade. Espermatidés alongadas Espermatides arredondadas Espermatócitos em paquíteno Espermatogônia Sem células germinativas 0 – Gonócitos 8 – Espermatócitos em paquíteno Tempo em meses 8 - Espermatides alongadas
31 Resultados Antes Controle Tratado - gonadotrofina Figura 11. Aspecto histológico do tecido testicular do doador de 8 meses, antes do transplante (A) e após recuperação (8 meses), para o grupo controle (B) e para o grupo tratado com gonadotrofina (C).
32 Resultados • Thoroughbred – 12 meses Figura 10. A porcentagem de túbulos Porcentagem de túbulos seminíferos seminíferos contendo o tipo de célula germinativa indicada é demonstrada para o grupo controle e o grupo tratado com gonadotrofina, com tecidos provenientes do doador de 12 meses de idade. Espermatidés alongadas Espermatides arredondadas Espermatócitos em paquíteno Espermatogônia Sem células germinativas 0 – Gonócitos 8 – Espermatogônias 8 - Espermatócitos em paquíteno Tempo em meses
33 Resultados Figura 13. Aspecto histológico do tecido testicular do doador de 12 meses, antes do transplante (D) e após recuperação (8 meses), para o grupo controle (E) e para o grupo tratado com gonadotrofina (F).
34 Resultados • Peso das vesículas seminais  177 30.8 mg  4 meses após o transplante 130.9 27.4 mg  8 meses após o transplante Sem tecidos saudáveis  15.6 2.7 mg Tecido equino transplantado  produção de testosterona Administração de gonadotrofina  sem significância
35 Considerações finais  Espermatogênese até meiose Gonadotrofinas exógenas Tecido testicular de equinos – modelo – espermatogênese Fisiologia e Fisiopatologia
DESENVOLVIMENTO DE CÉLULAS GERMINATIVAS DE TECIDO TESTICULAR EQUINO TRANSPLANTADO EM CAMUNDONGOS Germ cell development in equine testis tissue xenografted into mice Reproduction Researsh, 2006 Pedro Augusto Cordeiro Borges

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Apresentação do lcga dez.2012

  • 1.
    DESENVOLVIMENTO DE CÉLULASGERMINATIVAS DE TECIDO TESTICULAR EQUINO TRANSPLANTADO EM CAMUNDONGOS Germ cell development in equine testis tissue xenografted into mice Reproduction Researsh, 2006 Pedro Augusto Cordeiro Borges
  • 2.
    2 Introdução  Enxerto de diferentes espécies em camundongos Eficiência da espermatogênese * Eficiente * Ineficiente - Porcos - Gatos - Bodes - Macacos -Touros Honaramooz, 2002 Honaramooz,Oatley;Snedaker, 2004; Rathi, 2005
  • 3.
    3 Introdução  Enxerto de tecido testicular equino não relatado Modelo in vivo - entendimento da espermatogênese - tratamentos semelhantes - cavalos valiosos - animais experimentais castração ou morte - descendência por ICSI (Cochran et al. 1998)
  • 4.
    4 Introdução Gonadotrofinas  crescimento e desenvolvimento testicular Enxerto em camund. Castrado  gonadotrofinas endogenas LH  Leyding  testosterona  Feedback Diferenças  ↓ eficiência da espermatogênese Suplementação com gonadotrofinas  melhorar a espermatogênese
  • 5.
    5 Objetivo Eficiência da espermatogênese Efeito da administração de gonadotrofinas
  • 6.
  • 7.
    7 Material e Métodos • Experimento 1 Standardbred 2 semanas Welsh pony Warmblood 5 meses Quarterhorse 10 meses Thoroughbred 12 meses 4 anos
  • 8.
    8 Material e Métodos • Experimento 1  Remoção da cápsula e do tecido conjuntivo  1 – 2 mm  Dulbecco’s Eagle’s
  • 9.
    9 Material e Métodos • Experimento 1  6 semanas  Imunossuprimidos
  • 10.
    10 Material e Métodos • Experimento 1  Anestesiados e castrados Comissão Institucional de Usos e Cuidados com os Animais – Universidade da Pensilvânia  Base histológica
  • 11.
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    12 Material e Métodos • Recuperação e analise dos tecidos transplantados • Inalação Eutanásia de CO2 • Solução de Fixação Bouin’s • Etanol Banhos 70% Parafina • Histologia
  • 13.
    13 Material e Métodos • Recuperação e analise dos tecidos transplantados  Todos os túbulos seminíferos avaliados  Maturação  lúmen e espermatogênese  Células germinativas  morfologia e localização  Túbulos degenerados  sem distinção de tipos celulares
  • 14.
    14 Material e Métodos • Recuperação e analise dos tecidos transplantados  Tecidos saudáveis x degenerados  Apenas os saudáveis analisados  Camundongo = unidade experimental  Vesículas seminais pesadas  secreção de testosterona
  • 15.
    15 Análise estatística NRC-nude e ICR-scid Chi-square ou Student  ANOVA SigmaStat 3.0 Média e Desvio P< 0,05
  • 16.
  • 17.
  • 18.
    18 Resultados Figura 1. Porcentagem de tecidos saudáveis recuperados por doador, 4 ou 8 meses após o enxerto (n=6 receptores por doador) % de tecidos saudáveis recuperados  65 % saudáveis 93,8%  2-4 vezes maior 84,6% 65% 56,3% 20,3% Idade do doador
  • 19.
    19 Resultados • Espermatogênese e desenvolvimento dos túbulos seminíferos  Células intersticiais e poucos cordões  Espermatogônias  Tecidos recuperados (4 e 8 meses)  pouco desenvolvidos - 35, 7% cordões  túbulos - 52 % degenerados - Espermatogônias - Após 8 meses  lóbulos mais aparente
  • 20.
    20 Resultados Welsh pony 5 meses Figura 2. A porcentagem de túbulos Porcentagem de túbulos seminíferos seminíferos contendo o tipo de célula germinativa indicada é demonstrada para o tecido proveniente do Welsh pony - 5 meses Espermatidés alongadas Espermatides arredondadas Espermatócitos em paquíteno Espermatogônia Sem células germinativas 0 – cachos e arranjo em lóbulos 8 – espermatócitos em paquíteno 4,8 0,8 % de túbulos degenerados Tempo em meses
  • 21.
    21 Resultados Welsh pony 5 meses Figura 3. Aspecto histológico do tecido testicular equino (Welsh pony – 5 meses), antes de transplantado (A), apresentando apenas espermatogônias , e recuperado após 8 meses (B), apresentando espermatócitos em paquíteno.
  • 22.
    22 Resultados Warmblood 10 meses Figura 4. A porcentagem de túbulos seminíferos contendo o tipo de célula Porcentagem de túbulos seminíferos germinativa indicada é demonstrada para o tecido proveniente do Warmblood 10 meses Espermatidés alongadas Espermatides arredondadas Espermatócitos em paquíteno Espermatogônia Sem células germinativas 0 – Espermatócitos em paquíteno 4 – Redução significativa 8 – Espermátides alongadas 7,7 1,5 % de túbulos degenerados Tempo em meses
  • 23.
    23 Resultados Warmblood 10 meses Figura 5. Aspecto histológico do tecido testicular equino (Warmblood– 10 meses), antes de transplantado (C), apresentando espermatócitos em paquíteno como o tipo celular mais maduro, e recuperado após 8 meses (D), apresentando espermátides alongadas.
  • 24.
    24 Quarterhorse Resultados 12 meses Figura 6. A porcentagem de túbulos seminíferos contendo o tipo de célula germinativa indicada é demonstrada para o Porcentagem de túbulos seminíferos tecido proveniente do Quarterhorse12 meses Espermatidés alongadas Espermatides arredondadas Espermatócitos em paquíteno Espermatogônia Sem células germinativas 0 – Espermátides alongadas 4 – Espermatócitos em paquíteno 8 – Retomada da espermatogênese 6,5 2,2 % de túbulos degenerados Tempo em meses
  • 25.
    25 Quarterhorse Resultados 12 meses Figura 7. Aspecto histológico do tecido testicular equino (Quarterhorse – 12 meses), antes de transplantado (E), apresentando espermatogênese completa e recuperado após 8 meses (F), apresentando espermatócitos em paquíteno como o tipo celular mais maduro.
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    26 Thoroughbred Resultados 4 anos Figura 8. A porcentagem de túbulos seminíferos contendo o tipo de célula Porcentagem de túbulos seminíferos germinativa indicada é demonstrada para o tecido proveniente do Thoroughbred 4 anos Espermatidés alongadas Espermatides arredondadas Espermatócitos em paquíteno Espermatogônia Sem células germinativas 0 – Espermátides alongadas 4 – Redução significativa 8 – Retomada da espermatogênese 46,8 13,9 % de túbulos degenerados Tempo em meses
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    27 Thoroughbred Resultados 4 anos Figura 9. Aspecto histológico do tecido testicular equino (Thoroughbred – 4 anos), antes de transplantado (G), apresentando espermatogênese completa e recuperado após 8 meses (H), apresentando espermatócitos em paquíteno como o tipo celular mais maduro.
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    29 Resultados • Efeito da gonadotrofina nos tecidos enxertados (experimento 2) - Antes do transplante  Thoroughbred e Welsh pony  espermatogônias - 3 tratados com gonadotrofina - 3 grupo controle 10 semanas 20 semanas  Recuperados  8 meses
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    30 Resultados • Welsh pony – 8 meses Porcentagem de túbulos seminíferos Figura 10. A porcentagem de túbulos seminíferos contendo o tipo de célula germinativa indicada é demonstrada para o grupo controle e o grupo tratado com gonadotrofina, com tecidos provenientes do doador de 8 meses de idade. Espermatidés alongadas Espermatides arredondadas Espermatócitos em paquíteno Espermatogônia Sem células germinativas 0 – Gonócitos 8 – Espermatócitos em paquíteno Tempo em meses 8 - Espermatides alongadas
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    31 Resultados Antes Controle Tratado - gonadotrofina Figura 11. Aspecto histológico do tecido testicular do doador de 8 meses, antes do transplante (A) e após recuperação (8 meses), para o grupo controle (B) e para o grupo tratado com gonadotrofina (C).
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    32 Resultados • Thoroughbred – 12 meses Figura 10. A porcentagem de túbulos Porcentagem de túbulos seminíferos seminíferos contendo o tipo de célula germinativa indicada é demonstrada para o grupo controle e o grupo tratado com gonadotrofina, com tecidos provenientes do doador de 12 meses de idade. Espermatidés alongadas Espermatides arredondadas Espermatócitos em paquíteno Espermatogônia Sem células germinativas 0 – Gonócitos 8 – Espermatogônias 8 - Espermatócitos em paquíteno Tempo em meses
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    33 Resultados Figura 13. Aspecto histológico do tecido testicular do doador de 12 meses, antes do transplante (D) e após recuperação (8 meses), para o grupo controle (E) e para o grupo tratado com gonadotrofina (F).
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    34 Resultados • Peso das vesículas seminais  177 30.8 mg  4 meses após o transplante 130.9 27.4 mg  8 meses após o transplante Sem tecidos saudáveis  15.6 2.7 mg Tecido equino transplantado  produção de testosterona Administração de gonadotrofina  sem significância
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    35 Considerações finais  Espermatogênese até meiose Gonadotrofinas exógenas Tecido testicular de equinos – modelo – espermatogênese Fisiologia e Fisiopatologia
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    DESENVOLVIMENTO DE CÉLULASGERMINATIVAS DE TECIDO TESTICULAR EQUINO TRANSPLANTADO EM CAMUNDONGOS Germ cell development in equine testis tissue xenografted into mice Reproduction Researsh, 2006 Pedro Augusto Cordeiro Borges