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
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ABSTRATO
Nossos objetivos foram avaliar a prevalência de quartos com um tampão observável de selante
interno de teto (ITS) na primeira ordenha após o parto e investigar a persistência de resíduos de
ITS no leite após o parto. Um estudo observacional de coorte foi realizado em 557 quartos de
156 vacas tratadas com ITS em 6 fazendas em Quebec, Canadá. A presença de um tampão
ITS na primeira ordenha e resíduos de ITS no leite a cada ordenha foram observados pelos
produtores. Os efeitos de vários fatores sobre as chances de observar um plug de ITS e a
persistência de resíduos de ITS no leite foram estudados usando modelos mistos logísticos
generalizados e mistos binomiais negativos generalizados, respectivamente. Amostras de leite
foram coletadas no dia anterior à secagem e em 2 ocasiões após o parto para identificação
bacteriana para detecção de infecção intramamária (IMI) por meio de cultura bacteriológica
seguida de identificação MALDI-TOF. A associação entre a ausência de um plug ITS e a
presença de novo IMI foi avaliada por meio de um modelo de regressão logística mista. Os
tampões de selante de tetos internos após o parto foram observados com mais frequência nos
quartos traseiros e nos quartos que receberam apenas ITS na secagem versus antimicrobianos
e ITS. Observamos uma persistência média (desvio padrão) de 4,0 d (2,3 d). Quando um
tampão ITS ainda estava presente na primeira ordenha (83% dos trimestres), a eliminação de
resíduos de ITS no leite após o parto foi significativamente maior (4,5 d, em média) em
comparação com 1,2 d quando um tampão ITS estava ausente. Em vacas com plug ITS ao
parto, observamos maior número de dias de excreção em vacas mais velhas. Quando um
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Um estudo observacional de coorte sobre a persistência de
resíduos de selante interno de tetos no leite após o parto em
vacas leiteiras
Fidèle Kabera •Simon Dufour •Greg Keefe •Jean-Philippe Roy
Arquivo Aberto • Publicado: 04 de abril de 2018 • DOI: https://doi.org/10.3168/jds.2017-13986
PESQUISA | VOLUME 101, EDIÇÃO 7, P6399-6412,01 DE JULHO DE 2018
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tampão não pôde ser observado, quartos traseiros, vacas mais velhas e vacas com um longo
período de seca excretaram resíduos de ITS por um período significativamente maior. A falta de
uma associação significativa entre a ausência de tampão e as chances de novos IMI ao parto
sugere que, apesar da perda do tampão, as vacas ainda estavam protegidas contra novos IMI.
Embora tenhamos sido capazes de destacar alguns fatores de risco estatisticamente
significativos que explicam a persistência dos resíduos de ITS após o parto, as diferenças
observadas foram frequentemente relativamente pequenas e, talvez, não clinicamente
relevantes. Em conclusão, um plug ITS estava presente até a primeira ordenha após o parto em
83% dos trimestres, quartos sem plug ITS na primeira ordenha pareciam ter sido protegidos de
novos IMI,
Palavras-chave
selante de teto interno •resíduo •infecção intramamária •parto •período seco
INTRODUÇÃO
Vacas leiteiras correm alto risco de desenvolver novos IMI ( NIMI ) durante o período seco, que
muitas vezes permanecem indetectáveis ​
​
até o parto ou mesmo muito tempo após o parto em
alguns casos (Smith et ai., 1985;Bradley, 2002). Esses NIMI adquiridos no período seco
combinados com IMI que persistem desde a lactação anterior são importantes determinantes da
prevalência de IMI na lactação subsequente.Green et al., 2002). Os fatores que influenciam a
suscetibilidade à NIMI no início do período seco incluem a transição funcional associada à
involução mamária, o atraso na formação completa do tampão de queratina no canal do teto e a
interrupção da higienização do teto.Smith et ai., 1985;Dingwell et al., 2003;Halasa et al., 2009).
De fato, um estudo anterior na Nova Zelândia observou que 50% dos tetos não desenvolveram
um tampão de queratina durante os primeiros 10 dias do período seco.Williamson et al., 1995).
Além disso, outros estudos relataram que 23% dos tetos ainda estavam abertos até 6 semanas
após a secagem e, para 3 a 5% dos tetos, nunca foi observado um tampão de
queratina.Williamson et al., 1995;Dingwell et al., 2004).
Para prevenir a NIMI durante o período seco, a aplicação de um selante interno de teto ( ITS )
isoladamente ou combinada com a administração de antimicrobiano é hoje amplamente
utilizada. Um ITS forma uma barreira física à entrada de bactérias responsáveis ​
​
pela mastite e,
assim, reduz o risco de ocorrência de NIMI durante o período seco.Berry e Hillerton,
2002a;Godden et al., 2003;Sanford et al., 2006). Por exemplo, Orbeseal (Zoetis Canada,
Kirkland, Quebec, Canadá) é um ITS que consiste em subnitrato de bismuto formulado em uma
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pasta maleável viscosa inerte. É uma infusão intramamária estéril e não antimicrobiana. O uso
de ITS pode complementar ou fornecer uma alternativa à terapia antimicrobiana de vacas secas
para proteger os quartos durante o período seco.Woolford et al., 1998;Berry e Hillerton,
2002b;Huxley et al., 2002). Tal estratégia, que não envolve antimicrobianos, é de considerável
importância devido às preocupações de saúde pública sobre resistência antimicrobiana e
resíduos de antimicrobianos no leite. O ITS não é absorvido sistemicamente pela glândula
mamária e pode persistir no teto por pelo menos 100 dias durante o período seco.Woolford et
al., 1998). Permanece na cisterna do teto durante o período seco até que seja removido
fisicamente manualmente na primeira ordenha, ou pela mamada do bezerro.
Atualmente, poucos estudos avaliaram a proporção de quartos na primeira ordenha após o
parto que ainda possuem rolha ITS. A proporção de quartos realmente protegidos durante todo
o período de seca não é, portanto, bem descrita. Além disso, não está claro se os quartos,
tendo perdido o tampão selante antes da primeira ordenha, ainda estavam substancialmente
protegidos do NIMI durante o período seco. Por fim, os fatores de risco que podem influenciar
na persistência do tampão selante até a primeira ordenha não estão bem descritos.
Além disso, poucos dados estão atualmente disponíveis sobre a persistência de resíduos de
ITS no leite após o parto e sobre fatores que afetam a excreção de ITS após o parto. Alguns
autores relataram presença de resíduos de selante no leite até 3 semanas após o parto (Berry e
Hillerton, 2002a.Butto et al., 2011relataram que a maior parte do produto foi eliminada na
primeira ordenha, mas que alguns resíduos podem ser observados ao longo das ordenhas
subsequentes. No entanto, esses autores não investigaram a duração média da excreção de
resíduos.
Consequentemente, os objetivos primários do presente estudo foram (1) quantificar a
prevalência de quartos com um tampão selante observável na primeira ordenha após o parto,
(2) investigar a persistência de resíduos de ITS no leite após o parto e (3) identificar fatores de
risco que pode afetar a presença de um tampão de ITS no parto e o número de dias de
excreção de ITS após o parto. Um objetivo secundário do estudo foi investigar se quartos sem
um tampão de selante observável na primeira ordenha após o parto estavam igualmente
protegidos da aquisição de NIMI durante o período seco em comparação com aqueles com um
tampão de selante observável.
MATERIAIS E MÉTODOS
Participantes
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O estudo atual foi um estudo de coorte observacional realizado em 557 quartos de 156 vacas
tratadas com ITS em 6 fazendas leiteiras em Quebec (Canadá) entre outubro de 2015 e julho de
2016. Esta coorte de 6 fazendas foi uma amostra de conveniência de um estudo controlado
randomizado maior ( ECR) em terapia seletiva de vaca seca à base de um quarto realizada em
9 fazendas. Dessa amostra maior, foram selecionadas apenas as fazendas onde a equipe de
ordenha concordou em registrar a presença de resíduos no leite após o parto. Para o RCT, os
critérios de inclusão do rebanho foram (1) uma média de SCC do tanque a granel <250.000
células/mL no último ano, (2) um período seco direcionado de 35 a 75 d, (3) participação em um
programa DHI e ( 4) vontade de se comprometer com o protocolo do projeto. Nesses rebanhos,
todas as vacas leiteiras prenhes prontas para secagem, com pelo menos 3 quartos funcionais, e
não tratadas com antimicrobianos durante os 14 dias antes da secagem foram incluídas. As
vacas que não atenderam aos critérios de inclusão foram tratadas de acordo com os
procedimentos de rotina da fazenda para secagem.
No RCT, um total de 574 vacas foram recrutadas e alocadas, usando um gerador de números
aleatórios, em 4 grupos: (1) intramamário ( IMM) infusão de terapia antimicrobiana de vaca seca
isolada; (2) infusão IMM de terapia antimicrobiana de vaca seca e ITS; (3) cultura na fazenda
usando uma Petrifilm Aerobic Count Plate (3M, London, Ontario, Canada) com quartos positivos
(definidos como ≥5 ufc/mL na Petrifilm Aerobic Count Plate) tratados com infusão IMM de
terapia antimicrobiana de vaca seca isolada e trimestres negativos tratados apenas com ITS; e
(4) cultura na fazenda usando Petrifilm com quartos positivos tratados com infusão de IMM de
terapia antimicrobiana de vaca seca e ITS e quartos negativos tratados apenas com ITS. A
equipe da fazenda estava cega para a alocação do tratamento e, portanto, não podia escolher
um grupo para uma vaca ou mantê-la fora do estudo.
Para o estudo de coorte atual, realizado em 6 dessas fazendas, apenas quartos tratados a seco
com ITS sozinho ou com antimicrobiano e ITS foram selecionados. Esses quartos receberam,
com base na alocação do grupo e status IMI seco, 4 g de um ITS contendo 65% p/p de
subnitrato de bismuto (Orbeseal) com ou sem uma infusão IMM de antimicrobiano de vaca seca
(200.000 UI de Penicilina G Procaína e 400 mg de Novobiocina; Novodry Plus, Zoetis Canada,
Kirkland, Quebec, Canadá). Todos os tratamentos foram aplicados pelo pessoal da fazenda
imediatamente após a última ordenha antes da secagem, seguindo os procedimentos
recomendados na ficha técnica da Canadian Bovine Mastitis and Milk Quality Research Network
sobre a técnica de administração do tratamento IMM em vacas leiteiras (CBMQRN, 2010). Os
tratamentos foram registrados para verificar o cumprimento do protocolo do estudo.
Coleção de dados
Antes do início do estudo, cada participante foi treinada nas técnicas de infusão asséptica do
IMM ao usar o ITS, a retirada do ITS após o parto e a observação dos resíduos do ITS antes da
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ordenha. Além disso, uma folha ilustrada prática sobre a técnica de administração para o
tratamento de IMM em gado leiteiro foi fornecida, explicada e deixada nas fazendas. A equipe
de pesquisa visitou as fazendas participantes a cada duas semanas ao longo do estudo para
inscrição de vacas na seca e para monitorar o progresso e respeito do protocolo do estudo. Em
cada fazenda, 1 (o proprietário, em geral) ou 2 funcionários (o proprietário e 1 funcionário) foram
alocados ao projeto e coletadas todas as observações.
A presença de um tampão ITS observável na primeira ordenha após o parto e a persistência de
resíduos de ITS no leite após o parto foram monitorados visualmente pelos produtores de leite.
Um tampão ITS foi considerado eficaz se a pressão no teto necessária para remover o tampão
fosse maior do que a necessária para a remoção normal do leite, e ITS significativo foi
observado após a extração. Os resíduos foram observados diretamente no chão ou com copo-
filtro a cada ordenha, dependendo da preferência dos ordenhadores. O monitoramento dos
resíduos no leite foi realizado até a observação de pelo menos 4 ordenhas sucessivas sem
resíduos. O último dia em que os resíduos foram observados em cada trimestre foi utilizado
para calcular o número de dias com resíduos para as análises estatísticas.
Fatores de risco putativos
Dados sobre paridade, produção de leite na secagem e produção de leite no início da lactação
foram extraídos do software do sistema de ordenha da fazenda (1 rebanho) e dos dados
mensais do DHI (5 rebanhos) e investigados como potenciais preditores de excreção de ITS.
Para a produção de leite na secagem, foi utilizada a medida coletada no último teste de DHI
antes da secagem. Para a produção de leite no início da lactação, hipotetizamos que a
produção de leite nos primeiros DIM pode afetar a presença de um tampão de ITS ou dias de
excreção de ITS ou ambos. Para muitas vacas, no entanto, a primeira medida de produção de
leite foi a do controle DHI e esta medida pode ser coletada às vezes muito cedo na lactação,
mas às vezes até 40 a 45 DIM (dependendo da concordância entre a data do parto e o próximo
controle DHI programado) . Portanto, para obter um padrão mais estável, homogêneo, e
confiável, em vez de usar apenas a primeira medição de produção de leite relatada, usamos a
produção média de leite das primeiras 15 semanas de leite para a fazenda da qual pudemos
obter dados semanais de produção de leite e a produção média de leite das primeiras 3
semanas Testes DHI após o parto para as outras fazendas. Nossa hipótese era que vacas de
alta produção nas primeiras 15 semanas de lactação possivelmente também eram vacas de alta
produção em torno do parto. A paridade foi categorizada com base em sua distribuição em 2ª
paridade, 3ª paridade e ≥4ª paridade. As informações sobre o método de visualização de
resíduos utilizado (copo-filtro x piso) foram fornecidas pelos produtores participantes. usamos a
produção média de leite das primeiras 15 semanas de leite para a fazenda da qual podemos
obter dados semanais de produção de leite, e a produção média de leite dos 3 primeiros testes
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de DHI após o parto para as outras fazendas. Nossa hipótese era que vacas de alta produção
nas primeiras 15 semanas de lactação possivelmente também eram vacas de alta produção em
torno do parto. A paridade foi categorizada com base em sua distribuição em 2ª paridade, 3ª
paridade e ≥4ª paridade. As informações sobre o método de visualização de resíduos utilizado
(copo-filtro x piso) foram fornecidas pelos produtores participantes. usamos a produção média
de leite das primeiras 15 semanas de leite para a fazenda da qual podemos obter dados
semanais de produção de leite, e a produção média de leite dos 3 primeiros testes de DHI após
o parto para as outras fazendas. Nossa hipótese era que vacas de alta produção nas primeiras
15 semanas de lactação possivelmente também eram vacas de alta produção em torno do
parto. A paridade foi categorizada com base em sua distribuição em 2ª paridade, 3ª paridade e
≥4ª paridade. As informações sobre o método de visualização de resíduos utilizado (copo-filtro x
piso) foram fornecidas pelos produtores participantes. 3ª paridade e ≥4ª paridade. As
informações sobre o método de visualização de resíduos utilizado (copo-filtro x piso) foram
fornecidas pelos produtores participantes. 3ª paridade e ≥4ª paridade. As informações sobre o
método de visualização de resíduos utilizado (copo-filtro x piso) foram fornecidas pelos
produtores participantes.
Amostras de leite para análises bacteriológicas
Usando a técnica de amostragem asséptica (Conselho Nacional de Mastite, 2017a), amostras
de leite de um quarto de todas as vacas inscritas foram coletadas no dia anterior à secagem ( S
) e após o parto em 3 a 4 DIM ( S ) e 5 a 18 DIM ( S ) para detectar IMI usando cultura
bacteriológica seguida de identificação MALDI-TOF MS. A amostra S foi coletada pelo
produtor ou pessoal da fazenda, enquanto S e S amostras foram coletadas pela equipe de
pesquisa. As amostras de leite foram congeladas a -20°C antes de serem enviadas
mensalmente para o laboratório de pesquisa Maritime Quality Milk da Universidade de Prince
Edward Island, onde a cultura e a identificação bacteriana foram realizadas. O pessoal do
laboratório estava cego para a alocação do tratamento ao realizar análises bacteriológicas.
Análises Laboratoriais
Cultura Bacteriológica do Leite
As amostras de leite foram descongeladas e cultivadas no laboratório de pesquisa Maritime
Quality Milk usando métodos padronizados descritos no Laboratory Handbook on Bovine
Mastitis (Conselho Nacional de Mastite, 2017b). Resumidamente, alças plásticas descartáveis ​
​
foram usadas para selar 0,01 mL de leite em duas placas contendo metade de ágar Columbia +
5% de sangue de ovelha e metade de ágar MacConkey. As placas foram incubadas a 35°C e
examinadas quanto ao crescimento bacteriano após 24 e 48 h. As colônias foram
provisoriamente identificadas como estafilococos, estreptococos, coliformes ou outros
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patógenos com base nas características de crescimento da colônia, morfologia, padrão de
hemólise, reação de catalase e coloração de Gram. Para cada amostra positiva, o número de
unidades formadoras de colônias por 0,01 mL de leite foi enumerado até um máximo de 10
colônias. Foi tentada a identificação de todos os microrganismos recuperados na placa,
independente do número de colônias. Amostras com 3 ou mais tipos de colônias
fenotipicamente diferentes foram classificadas como contaminadas. No entanto,Staphylococcus
aureus ), as colônias hemolíticas foram enumeradas e analisadas posteriormente. Levedura e
Prototheca spp. foram registrados com base nos resultados da coloração de Gram. Colônias de
bactérias foram subcultivadas em placas de ágar sangue para obter cultura pura para posterior
classificação usando MALDI-TOF MS.
MALDI-TOF MS
A identificação final dos isolados foi realizada usando o método de transferência direta (MALDI
Biotyper 3.1 User Manual, Bruker Daltonics Inc., Billerica, MA). Resumidamente, um aplicador
de madeira estéril de 15 cm, de uso único, foi usado para levantar o material de uma colônia
bacteriana bem isolada, seguido por uma camada fina de material da colônia em um alvo MSP
de 96 pontos de aço moído (Bruker Daltonics Inc.) . As manchas foram deixadas secar ao ar à
temperatura ambiente. Subsequentemente, as manchas foram cobertas com 1,0 µL de uma
solução saturada de matriz de ácido α-ciano-4-hidroxicinâmico em 50% de acetonitrila, 47,5%
de água e 2,5% de ácido trifluoroacético (Sigma-Aldrich Canada Inc., Oakville, ON, Canadá )
usando pontas de pipeta de uso único e secas ao ar à temperatura ambiente.
Todos os alvos foram calibrados usando o Padrão de Teste Bacteriana (Bruker Daltonics Inc.) e
incluíram Staphylococcus aureus ATCC 29213 e Escherichia coliAmostras de classificação de
controle ATCC 25922 em duplicata. Para confirmar que a limpeza do alvo foi eficaz e nenhum
material bacteriano residual de uma execução anterior permaneceu, um ponto em cada alvo
continha apenas matriz sem amostra bacteriana. Todas as capturas e classificações espectrais
bacterianas foram realizadas usando a plataforma de classificação microbiana Bruker Daltonics
Research Use Only que incluiu um espectrômetro de massa Microflex LT, software flexControl
(versão 3.4), MALDI Biotyper Real Time Classification, Offline Classification (versão 3.1) com
5.627 Main Spectrum biblioteca de banco de dados de referência (MBT-BDAL-5627) e uma
biblioteca CNS personalizada desenvolvida porCameron et al., 2017. Todas as revisões de
espectros foram realizadas usando o software flexAnalysis (versão 3.4, Bruker Daltonics Inc.). O
MALDI Biotyper RTC foi realizado de acordo com o MALDI Biotyper 3.1 User Manual. As
configurações do FlexControl foram faixa de massa média (1.960–21.200 m/z), ganho do
detector definido para 8,6 × (3.227 V), configurações de amostra e digitalizador em 0,50 GS/s, e
fonte de íons 1 e 2 valores de 20,12 e 18,25 kV, respectivamente . Cada espectro de amostra foi
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somado a partir de um máximo de 240 disparos acumulados a partir de um mínimo de 6 pontos
raster usando um pequeno padrão de movimento de laser em espiral.
Após a aquisição do espectro de massa de uma amostra, o software Biotyper compara o
espectro com os espectros de referência contidos no banco de dados. O software então exibe
as identificações correspondentes e calcula uma pontuação que varia de 0,0 a 3,0, indicando o
grau de similaridade entre o espectro da amostra e o espectro de referência. As pontuações de
identificação foram interpretadas de acordo com as recomendações do fabricante da seguinte
forma: uma pontuação de 2,0 a 3,0 foi considerada aceitável para identificação em nível de
espécie, uma pontuação de 1,7 a <2,0 indicou identificação confiável para o nível de gênero e
uma pontuação de <1,7 foi considerada uma identificação não confiável.
Definição de NIMI
Para determinar se um NIMI por um patógeno específico foi adquirido durante o período seco,
foram utilizadas a amostra pré-seca (S ) e a primeira amostra após o parto (S ). Se a
primeira amostra após o parto (S ) estava faltando ou contaminada, então a segunda amostra
(S ) era usada. A informação sobre NIMI estava, portanto, faltando, se a amostra na secagem
(S ) estivesse contaminada ou se ambas as amostras após o parto (S e S ) estivessem
faltando ou contaminadas. A presença de ≥1 UFC/0,01 mL de leite foi considerada suficiente
para qualificar um quarto como tendo IMI.
Se um IMI por uma espécie de patógeno específico estava presente no parto e se essa mesma
espécie de patógeno não foi encontrada na amostra seca, então o quarto foi considerado como
tendo experimentado um NIMI. Em nosso estudo, grupos de bactérias que podem ser relatados
por análises MALDI-TOF, mas não são relevantes para mastite bovina, não foram considerados
na definição de NIMI. No estudo atual, estes foram Corynebacterium amycolatum , outros gram-
positivos, Curtobacterium flaccumfaciens , espécies de Brachybacterium , Brevibacillus
parabrevis , espécies de Kocuria, Weissella confusa , Bacillus pumilus , Micrococcus luteus e
Neisseria flavescens. Como os ITS são usados ​
​
principalmente para prevenir NIMI por bactérias
ambientais, também investigamos especificamente NIMI por esses tipos de patógenos, criando
uma segunda definição de NIMI ( NIMI ), que excluiu ainda mais NIMI por patógenos de
mastite contagiosa ( Corynebacterium bovis e outras espécies não especiadas de
Corynebacterium e Staphylococcus aureus ). Observe que Streptococcus agalactiae ,
Mycoplasma bovis e outras espécies de Mycoplasma não foram recuperadas no presente
estudo.
Análise estatística
A unidade experimental primária foi o quartel. Quatro desfechos de interesse foram
investigados: (1) presença de um tampão ITS observável na primeira ordenha após o parto; (2)
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número de dias de persistência dos resíduos de STI no leite após o parto; (3) desenvolvimento
de um NIMI durante o período seco; e (4) desenvolvimento de NIMI durante o período seco.
Estatísticas descritivas foram primeiro computadas, então o efeito incondicional das diferentes
exposições foi testado em modelos lineares generalizados mistos usando o procedimento SAS
Proc GLIMMIX (versão 9.4, SAS Institute Inc., Cary, NC). Como as observações foram
agrupadas dentro de vacas (4 quartos por vaca) e dentro de rebanhos, interceptações aleatórias
para vaca e rebanho foram incluídas em todos os modelos estatísticos. Os modelos usados ​
​
para os diferentes resultados são descritos nas seções a seguir. A suposição de linearidade
entre preditores quantitativos e desfechos foi avaliada usando termos polinomiais.
As associações condicionais foram então computadas introduzindo os confundidores putativos
no modelo; associações condicionais e incondicionais foram então comparadas e os fatores de
confusão foram retidos apenas se a medida de associação (ou seja, razão de chances ou razão
de incidência) diferir em mais de 10%, conforme sugerido porMickey e Groenlândia, 1989. Para
todos os modelos, o limiar de significância foi fixado em 0,05. Ajustes a posteriori para
comparações múltiplas foram usados ​
​
para preditores >2 categorias usando o método de Tukey-
Kramer. Apenas indivíduos com informações completas sobre todas as variáveis ​
​
do modelo final
foram incluídos nas análises (ou seja, análise de caso completa).
Fatores de risco que afetam as chances de um plug ITS observável na primeira ordenha após o parto
Um modelo misto generalizado com um link logit foi usado para investigar o efeito dos diferentes
preditores sobre as chances de observar um plug ITS na primeira ordenha após o parto. Os
preditores avaliados foram paridade, produção de leite na secagem, produção de leite no início
da lactação, tratamento recebido na secagem (antimicrobiano e ITS vs. ITS sozinho), duração
do período seco e posição do quarto (frente vs. traseira). A paridade foi investigada como um
confundidor putativo para a associação entre a produção de leite na secagem e as chances de
observar um tampão ITS no parto e para a associação entre a produção de leite no início da
lactação e as chances de um tampão. Além disso, a produção de leite na secagem foi
investigada como um potencial confundidor para a associação entre a duração do período seco
e as chances de observar um tampão ITS no parto.
Fatores de risco para número de dias de persistência de resíduos de ITS no leite após o parto
Para o número de dias de persistência de resíduos de ITS no leite após o parto, 2 distribuições
notavelmente diferentes foram observadas para quartos para os quais um tampão foi ou não
observado no parto. Portanto, para este resultado, foram realizadas análises separadas para
trimestres com plug ITS observável e trimestres sem plug. Para essas análises, modelos mistos
generalizados usando um link de log foram usados ​
​
para investigar o efeito dos diferentes
preditores no número de dias de resíduos de ITS após o parto. Para trimestres com um plug ITS
env
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observável no parto, investigamos se um modelo de regressão binomial de Poisson ou negativo
se ajustaria melhor aos dados usando um t-teste investigando se o parâmetro de dispersão era
diferente de 0. O modelo de regressão de Poisson ofereceu o melhor ajuste e foi retido para
essas análises. Para trimestres sem um plug ITS observável, primeiro investigamos se um
binômio de Poisson ou negativo se ajustaria melhor aos dados e, em seguida, com base na
distribuição observada, avaliamos se um modelo inflado de zero ou convencional forneceria o
melhor ajuste usando o Vuong teste (Vuong, 1989). O binômio negativo convencional
apresentou o melhor ajuste e foi retido para essas análises.
Paridade, produção de leite na secagem, produção de leite no início da lactação, tratamento
recebido na secagem (antimicrobiano e ITS vs. ITS sozinho), duração do período seco, posição
do quarto (frente vs. traseira) e método de visualização usado pelo produtores participantes
foram avaliados como potenciais preditores do número de dias de excreção. Novamente, a
paridade foi investigada como confundidor putativo para a associação entre a produção de leite
na secagem e a persistência de resíduos de ITS no leite após o parto e para a associação entre
a produção de leite no início da lactação e a persistência de resíduos de ITS no leite após o
parto. Além disso, a produção de leite na secagem foi investigada como potencial confundidor
para a associação entre a duração do período seco e a persistência de resíduos de STI no leite
após o parto.
Efeito da retenção do plugue do ITS nas probabilidades de NIMI durante o período seco
Dois modelos mistos generalizados separados com um link logit foram usados ​
​
para modelar o
efeito da presença ou não de um plug ITS observável na primeira ordenha nas chances de NIMI
e em chances de NIMI . A única exposição considerada neste modelo foi a presença ou não
do plug ITS ao parto. As seguintes variáveis ​
​
foram investigadas como potenciais confundidores
dessas relações: paridade, produção de leite na secagem, produção de leite no início da
lactação, tratamento recebido na secagem (antimicrobiano e ITS vs. ITS sozinho), posição do
quarto (frente vs. traseira) , e duração do período seco.
Cálculo de Potência
Como o tamanho da amostra já foi pré-determinado pelo número de quartos disponíveis
tratados com selante de teto do ECR, avaliamos as diferenças mínimas que poderiam ser
observadas considerando o tamanho real da amostra, usando um α de 0,05 e um poder de
0,90. Para esses cálculos, usamos um poder de 0,90 (vs. 0,80) porque o agrupamento de
quartos por vaca e por rebanho não foi contabilizado. Assim, o verdadeiro poder foi
provavelmente inferior a 0,90. Por exemplo, considerando um desvio padrão para excreção
média de 3 d, teríamos sido capazes de detectar diferenças ≥0,83 e ≥0,94 d entre os níveis de
um preditor dicotômico presente em 50 ou 75% dos trimestres, respectivamente. Ao avaliar o
env
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efeito de um preditor dicotômico nas chances de ter um plug ITS observável no parto,
assumindo que 85% dos quartos terão um plug observável,
Ao avaliar o efeito de um preditor dicotômico (ausência do plug) nas chances de adquirir um
NIMI durante o período seco, assumindo que 10% dos trimestres terão um NIMI, e que o
preditor estaria presente em 15% dos trimestres, computamos que poderíamos detectar, com
um poder ≥90%, diferença nas chances correspondentes a uma razão de chances ≥2,9.
RESULTADOS
Estatísticas descritivas
Participantes
As 6 fazendas leiteiras participantes com principalmente vacas Holandesas estão descritas na
Tabela 1. No total, 377 vacas das 6 fazendas participantes pariram durante o estudo de coorte.
Duzentas e cinquenta e seis dessas 377 vacas receberam ITS pelo menos em um quarto. Cem
(100/256) vacas foram excluídas do estudo por diferentes razões: falta de dados sobre resíduos
de ITS (n = 73), vacas morreram antes ou no parto (n = 9), vacas abortadas (n = 4), vacas
foram descartados logo após o parto (n = 4), ou o período seco foi <35 ou >75 d (n = 10). Cento
e cinquenta e seis vacas (557 quartos) foram monitoradas durante este estudo de coorte com
uma média de 26 (intervalo 11-67) vacas monitoradas por fazenda. Sessenta e sete quartos não
puderam ser incluídos no estudo porque 60 quartos não receberam ITS na secagem (somente
terapia antimicrobiana de vaca seca) e 7 quartos não foram funcionais na secagem.
Tabela 1 Descrição de 6 fazendas leiteiras selecionadas em Quebec
(Canadá) para o estudo da persistência de resíduos de selante interno
de teto (ITS) no leite após o parto
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Fazenda
Nº de
vacas em
lactação
Alojamento
de vacas
leiteiras
305-d
produção
média de
leite (kg)
Nº de
vacas
com
dados
ausentes
% de
quartos
com plug
ITS ao
parto
1 80 Tieestall 9.820 7 88
2 200 Freestall 9.687 21 95
3 100 Freestall 9.050 7 45
4 80 Freestall 9.679 7 81
5 140 Freestall 10.149 24 59
6 50 Tieestall 9.614 7 100
Abrir tabela em uma nova guia
Preditores
Resíduos de selante interno de tetos foram observados usando copo-filtro em 110/557 (20%)
dos quartos e o leite despojado foi observado diretamente no chão em 447 quartos (80%).
Duzentos e oitenta e quatro quartos dianteiros (51%) e 273 quartos traseiros (49%) foram
observados durante este estudo. Trezentos e vinte e um quartos (57,6%) receberam uma
combinação de antimicrobiano e ITS, enquanto 236 quartos (42,4%) receberam apenas ITS na
secagem. Duzentos e quatorze quartos (38,4%) eram de vacas de 2ª paridade, 140 quartos
(25,1%) de vacas de 3ª paridade e 203 quartos (36,5%) de vacas com paridade ≥4. A produção
média (DP) diária de leite na secagem foi de 24,7 kg/d (7,3 kg) com mínimo e máximo de 8,6 e
47,4 kg/d, respectivamente. A produção diária média (DP) de leite após o parto foi de 45,2 kg/d
(6,6 kg) com mínimo e máximo de 27,1 e 62,1 kg/d, respectivamente.
Selante de teto interno
Um tampão ITS ainda estava presente na primeira ordenha após o parto em 441/531 (83%) dos
quartos (intervalo por rebanho: 45-100%), ausente em 90 quartos (17%) e 26 observações
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estavam faltando [3 vacas (6 quartos) da fazenda 4 e 5 vacas (20 quartos) da fazenda 1]. A
duração dos resíduos de ITS variou de 0 a 12 d, com média (DP) de 4,0 d (2,3 d; Figura 1 ). Ao
considerar separadamente os quartos para os quais um tampão pode ser visualizado após o
parto e aqueles para os quais o tampão já havia desaparecido, foram observadas 2
distribuições notavelmente diferentes ( Figura 1). Para quartos para os quais um tampão ITS
ainda estava presente na primeira ordenha após o parto, a persistência dos resíduos ITS variou
entre 1 e 12 d com uma média (SD) de 4,5 d (1,9 d) e parecia seguir uma distribuição quase
normal, ou uma distribuição negativa de Poisson ou binomial. Para quartos sem plug ITS na
primeira ordenha após o parto, a persistência dos resíduos ITS variou entre 0 e 8 d com média
(SD) de 1,2 d (1,7 d) e seguiu uma distribuição típica de dados de contagem (ou seja, Poisson
ou binomial negativo com média mais baixa).
Figura 1 Distribuição do número de dias com resíduos de selante interno de teto (ITS) no leite após o parto em função
da presença ou não de um tampão ITS observável na primeira ordenha. Versão colorida disponível online.
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NIMI no parto  
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Novas infecções intramamárias foram observadas em 87/530 dos trimestres (16,4%) e ausentes
em 443 trimestres (83,6%), de acordo com a primeira definição excluindo apenas bactérias não
relevantes para mastite. Houve 27 observações ausentes porque (1) as amostras na secagem
estavam contaminadas (n = 21), ou (2) ambas as amostras após o parto estavam ausentes ou
contaminadas (n = 6). Ao considerar apenas os patógenos da mastite ambiental, NIMI
esteve presente em 60 dos 530 quartos (11,3%) e ausente em 470 quartos (88,7%). A Tabela 2
apresenta as informações sobre as espécies de patógenos isoladas nos casos de NIMI ou NIMI
.
Tabela 2 Patógenos isolados em 87 quartos com um novo IMI em uma
coorte de 557 quartos de 156 vacas de 6 laticínios comerciais em
Quebec, Canadá
env
env
1
Staphylococcus epidermidis 1
Staphylococcus quorum 5
Staphylococcus haemolyticus 3
Staphylococcus hominis 2
Staphylococcus sciuri 5
Staphylococcus simulans 2
Staphylococcus xylosus 10
Streptococcus dysgalactiae 1
Espécies de Streptococcus 2
Trueperella pyogenes 1
Fermento 2
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1 Os patógenos foram identificados por cultura bacteriológica seguida de identificação de MALDI-TOF
e, quando a identificação de espécies de MALDI-TOF não foi conclusiva, por métodos bacteriológicos
de rotina.
2 Entre os 87 trimestres com novos IMI, 4 quartos tiveram novos IMI por 2 espécies diferentes.
Abrir tabela em uma nova guia
Fatores de risco que afetam as chances de um plug ITS observável na primeira ordenha após o parto
As associações entre preditores e chances de ter um plug ITS observável na primeira ordenha
após o parto são apresentadas na Tabela 3 . Apenas o tipo de tratamento administrado na
secagem e na posição de quarto foram significativamente associados às chances de ter um
plug ITS observável no parto. Os quartos que receberam apenas ITS tiveram 2,6 vezes mais
chances (IC 95%: 1,1, 6,1) de ter um plug ITS após o parto do que aqueles que receberam uma
combinação de antimicrobianos e ITS. Os quartos traseiros tiveram chances 2,1 vezes maiores
(IC 95%: 1,1, 3,9) de ter um plug após o parto do que os quartos dianteiros.
Tabela 3 Resultados dos modelos mistos logísticos generalizados
usados ​
​
para modelar o efeito de vários preditores nas chances de ter
um tampão de selante interno de teto (ITS) observável no parto em uma
coorte de 557 quartos, de 156 vacas de 6 laticínios comerciais
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1 Joint P-value for the group of predictors (type III test).
2 Intercept for a cow producing 10 kg of milk per day.
3 Effect for a 5 kg/d increase in milk production.
4 Intercept for a cow with a 35-d dry period and producing 10 kg of milk per day pre-dry.
5 Effect for a 7-d increase in dry period duration.
6 Milk production pre-dry was retained as a confounder of the relationship between dry period
duration and odds of having an observable ITS plug at calving (change in odds ratio: 18%).
Open table in a new tab
Risk Factors for Number of Days of Persistency of ITS Residues in Milk After
Calving
Quarters with an ITS Plug Present at Calving
Parâmetro Estimativa SE
Razão de
probabilidade
95% CI Valor P
1
(1) Paridade
 Interceptar 1.981 0,772
 Paridade 0,08
  2 Referência Referência Referência Referência
  3 −0,563 0,555 0,57 0,19, 1,7
  ≥4 0,836 0,593 2.3 0,72, 7,4
 Variação do
rebanho
2.591 2.059
 Variação da
vaca
2.891 0,692
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Associations between predictors and number of days of persistency of ITS residues in milk after
calving in quarters with an observable ITS plug at calving are presented in Table 4. When an ITS
plug was still present at the first milking after calving, Poisson regression with random effects
offered the best fit and was used to evaluate the effects of different predictors on the number of
days of persistence of ITS residues in milk. Only cow's parity influenced significantly the number
of days of excretion of ITS residues in milk after calving. After adjusting for multiple comparisons,
quarters of cows ≥4th parity had 1.3 times more days with residues (95% CI: 1.0, 1.5) than
quarters from 3rd parity cows. Quarters of cows ≥4th parity also had 1.2 times more days with
residues (95% CI: 1.0, 1.4) than quarters from 2nd parity cows. Number of days of residues were
not statistically different between quarters from 3rd and 2nd parity cows. Predicted number of
days of residues were 3.9, 3.7, and 4.9 d for 2nd, 3rd, and ≥4th parity cows, respectively.
Table 4 Results from the generalized negative Poisson mixed models
used to model effect of various predictors on number of days of
persistency of internal teat sealant (ITS) residues in milk after calving in
441 quarters with an observable ITS plug at calving
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1 Joint P-value for the group of predictors (type III test).
2 Intercept for a cow producing 10 kg/d of milk.
3 Effect for a 5 kg/d increase in milk production.
4 Intercept for a cow with a 35-d dry period.
5 Effect for a 7-d increase in dry period duration.
Open table in a new tab
Quarters Without an ITS Plug at Calving
Associations between predictors and number of days of persistency of ITS residues in milk after
calving in quarters without an observable ITS plug at calving are presented in Table 5. When an
ITS plug was not present at the first milking after calving, negative binomial regression with
random effects offered the best fit and was used to evaluate the effect of different predictors on
the number of days of persistence of ITS residues in milk. Parity, duration of the dry period, and
Parameter Estimate SE
Incidence
ratio
95% CI P-value
1
(1) Parity
 Intercept 1.367 0.105
 Parity <0.01
  2 Reference Reference Reference Reference
  3 −0.066 0.081 0.94 0.80, 1.1
  ≥4 0.167 0.069 1.2 1.0, 1.4
 Herd variance 0.048 0.035
 Cow variance 0.046 0.014
(2) Milk production
pre-dry
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quarter position all significantly affected number of days of ITS residues after calving in quarter
without an observable ITS plug at calving.
Table 5 Results from the generalized negative binomial mixed models
used to model effect of various predictors on number of days of
persistency of internal teat sealant (ITS) residues in milk after calving in
90 quarters without an observable ITS plug at calving
1 Joint P-value for the group of predictors (type III test).
2 Intercept for a cow producing 10 kg of milk per day.
3 Effect for a 5 kg/d increase in milk production.
4 Intercept for a cow with a 35-d dry period.
5 Effect for a 7-d increase in dry period duration.
Parameter Estimate SE
Incidence
ratio
95% CI P-value
1
(1) Parity
 Intercept −0.850 0.545
 Parity <0.01
  2 Reference Reference Reference Reference
  3 −0.259 0.615 0.77 0.2, 3.4
  ≥4 1.808 0.628 6.1 1.3, 27.7
 Herd variance 0.609 0.816
 Cow variance 1.223 0.522
(2) Milk production
pre-dry
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After adjusting for multiple comparisons, quarters of cows ≥4th parity had 7.9 times more days
with residues (95% CI:1.4, 44.0) than quarters from 3rd parity cows. Quarters of cows ≥4th parity
also had 6.1 times more days with residues (95% CI: 1.3, 27.7) than quarters from 2nd parity
cows. We did not observe a significant difference between quarters from 2nd and 3rd parity
cows. Predicted number of days of residues were 0.4, 0.3, and 2.6 d for 2nd, 3rd, and ≥4th parity
cows, respectively.
The number of days of persistence of ITS residues in milk after calving were multiplied by a
factor of 1.7 (95% CI: 1.1, 2.5) for every 1-wk increase of dry period length. For instance,
number of days of residues were 0.1, 0.2, and 0.6 for quarters with a dry period of 6, 8, and 10
wk, respectively.
Finally, rear quarters had 1.6 times more days with residues (95% CI: 1.1, 2.4) than front
quarters. Predicted number of days of residues were 0.5, and 0.7 d for front and rear quarters,
respectively.
Effect of ITS Plug Retention on Odds of NIMI Over the Dry Period
Associations between presence of an ITS plug at calving and odds of acquiring a NIMI or a
NIMI are presented in Table 6. Treatment at drying-off (antimicrobials and ITS vs. ITS alone)
was retained as a significant confounder of the association between presence of a plug at
calving and NIMI and NIMI . After controlling for this confounder, the fact that ITS plug was
present or not at calving was not significantly associated with odds of NIMI at calving (P = 0.33,
odds = 1.4, 95% CI: 0.7, 3.0) nor with odds of NIMI (P = 0.54, odds = 1.3, 95% CI: 0.6, 3.1).
When all relevant mastitis pathogens were considered, NIMI rates were 16.2, and 16.7% of
quarters when plug was present or absent, respectively. When environmental mastitis pathogens
only were considered, NIMI rates were 11.4, and 10% of quarters when a plug was present or
absent, respectively.
Table 6 Results from the generalized logistic mixed models used to
model effect of having an observable internal teat sealant (ITS) plug at
calving on odds of acquiring a new intramammary infection (NIMI) or a
NIMI caused specifically by an environmental pathogen (NIMI ) during
the dry period
env
env
env
env
env
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1 Joint P-value for the group of predictors (type III test).
2 Treatment at dry-off was retained as a confounder of the relationship between presence of an
observable ITS plug at calving and odds of acquiring a NIMI over the dry period (change in odds ratio:
15%).
3 Treatment at dry-off was retained as a confounder of the relationship between presence of an
observable ITS plug at calving and odds of acquiring a NIMI over the dry period (change in odds
ratio: 11%).
Open table in a new tab
DISCUSSION
Participants
Parameter Estimate SE
Odds
ratio
95% CI P-value
1
(1) NIMI
 Intercept −1.256 0.344
 ITS plug at calving 0.33
  Present Reference Reference Reference Reference
  Absent 0.362 0.373 1.4 0.7, 3.0
 Treatment
2
<0.01
  Antimicrobials +
ITS
Reference Reference Reference Reference
  ITS only 0.885 0.276 2.4 1.4, 4.2
 Herd variance 0.405 0.369
env
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A total of 156 cows from 6 participating farms were monitored during this cohort study. Seventy-
three cows were not included in the study because producers did not observe and complete the
information on the presence of ITS plug and ITS residues in milk. On some farms, when the
employee allocated to the project was away, data collection was suspended. Moreover, a
significant proportion (45.2%) of these missing data (33 of 73 cows) was registered between
April and July 2016 when farmers were busy with field work and compliance with the research
protocol was difficult. If the outcomes or exposures studied are strongly influenced by season,
then it is possible that our results may apply well to cows calving in the August–March period,
but perhaps not as much to cows calving during April–July where most of the missing data were
observed. Moreover, because different observers were used to monitor presence of an effective
plug and days of residues, some variation in these measures could be expected between
observers. Accuracy of these measures related to individual observer was not evaluated in our
study. We could expect, however, that the farm random effect would have captured some of
these variations (e.g., for farms with just one observer; n = 4). Moreover, the fact that method of
residue visualization (i.e., filter-cup versus the floor) was not significantly associated with days of
residues seems to suggest a certain homogeneity between observers. Still, possible variations in
measurement between observers is one drawback from our study.
Persistency of Internal Teat Sealant Plug and NIMI over the Dry Period
The prevalence of quarters with an observable ITS plug at calving was comparable to previous
observations made by Meaney, 1977. The number of cows and quarters, however, was quite
small in that study and there was no mention whether the study was conducted in one or many
farms. According to his observations, a plug was observable around 3 d before calving by x-ray
in 32/38 (84%) of quarters. In another experiment, they reported a proportion of 93% of quarters
(13 out of 14 quarters x-rayed once a week during the dry period) that kept the sealant in place
for the complete dry period duration. Note that the remaining quarter kept the sealant for 11 wk
out of 14 wk. Moreover, none of those 14 quarters experienced NIMI during the dry period,
despite quarters being dipped into a bacteriological culture of Staphylococcus aureus once a
week during the dry period.
In our study, in 4 out of the 6 studied dairy farms, a proportion of or all cows calved in a maternity
pen (vs. in a tie stall). Therefore, cows may have been in contact with calves after calving for
some time. We can hypothesize that suckling could have played a role on the probability of
observing an ITS plug at first milking. In fact, our producers confirmed that suckling by the calf
could occur on some occasions, especially for those cows that calved during the night.
Unfortunately, the information on suckling or on calving time were not recorded. However, one of
the 2 herds with the lowest proportion of ITS plugs present at calving was a freestall herd where
cows calved in a tiestall barn. Considering these findings, factors other than suckling by the calf
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needs to be identified. These may include genetic characteristics of cows, the size and
conformation of the teat, and so on. The relatively small associations (odds ratio of 1.4 for NIMI
and 1.3 for NIMI ) observed between presence or not of an observable ITS plug and odds of
NIMI suggest that cows were possibly still protected against NIMI during most of the dry period.
Therefore, we can hypothesize that loss of the plug occurred closely around calving because of
suckling or another reason (e.g., milk hydrostatic pressure).
In our study, we hypothesized that the milk production level at drying-off would possibly affect the
persistence of ITS plug, as the hydrostatic pressure due to milk production could possibly lead to
the expulsion of the sealant. However, we found no evidence of association between cow-level
milk production at drying off and the presence of an ITS plug after calving. This observation was
in accordance with Williamson, 2001que relataram que o vazamento de leite não estava
associado à expulsão do selante do teto na secagem. Além disso, observamos uma taxa de
retenção mais alta nos quartos traseiros, que normalmente produzem mais leite do que nos
quartos dianteiros. De fato, o plugue ITS estava presente em 86% dos quartos traseiros e em
80% dos quartos dianteiros.
Outra possibilidade para explicar a ausência do tampão ITS na primeira ordenha é a dispersão
pós-infusão do produto na cisterna da glândula. Essa possibilidade foi observada porMeaney,
1977eBradley et al., 2010. Tal evento poderia explicar trimestres sem tampão de ITS na primeira
ordenha e possivelmente também aumentar a persistência de resíduos de ITS no leite no início
da lactação. No entanto, observamos um cenário inverso. Quartos sem plug ITS ao parto
apresentaram menor persistência de resíduos observáveis. Assim, nosso estudo sugere que a
dispersão pós-infusão, se ocorrer, não aumentaria o número de dias de resíduos após o parto.
No estudo atual, a administração de ITS em conjunto com um antimicrobiano IMM resultou em
menores taxas de retenção. Se a administração desses antimicrobianos pode dificultar a
formação ou retenção do tampão, ou promover a dispersão do produto na glândula,
possivelmente vale a pena investigar porque esses produtos são frequentemente usados ​
​
em
conjunto. A mesma questão foi levantada porBradley et al., 2010. Os autores posteriores
levantaram a hipótese de que a miscibilidade de um ITS e um antimicrobiano à base de óleo
pode modificar a viscosidade do ITS e, consequentemente, afetar a capacidade de formação do
tampão. Assim, eles apresentam uma proposta para o uso de um antimicrobiano à base de
água quando um antimicrobiano é usado em combinação com um ITS.
Também consideramos que a duração do período seco pode influenciar a prevalência de
quartos sem rolha ITS ao parto. No entanto, nenhuma associação significativa foi observada
entre a duração do período seco e as chances de ter um plug ITS observável na primeira
ordenha.Woolford et al., 1998relataram que o material selante ainda estava presente na base
do teto em 19 quartos radiografados após 100 dias do período seco. No estudo atual, todas as
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vacas tiveram duração do período seco < 75 dias, portanto, possivelmente, não é longa o
suficiente para afetar a retenção de ITS.
Persistência de resíduos de ITS no leite após o parto
Meaney, 1977relataram a presença de resíduos de ITS no leite após o parto durante os
primeiros 5 dias de lactação. NoMeaney, 1977No estudo, foram observados resíduos de ITS
com nível <2,5 µg de resíduos/mL de leite composto a 10 DIM. No d 5, nenhum resíduo estava
presente em 26/40 (60%) das amostras, e ≤5 µg de resíduos/mL de leite a granel em 13
amostras (32,5%) e 5,1 a 16,7 µg de resíduos/mL em 1 amostra (2,5%). Da mesma forma, em
nosso estudo, 75% dos trimestres expulsaram os últimos resíduos de ITS por 5 DIM. Para
alguns trimestres, entretanto, foram observados resíduos até 12 DIM. Nossos resultados sobre
a persistência de resíduos de ITS também são semelhantes aos deButto et al., 2011. Esses
autores relatam que a parte principal do selante é removida na primeira ordenha e que a parte
restante é observada no leite durante as ordenhas subsequentes. No entanto, neste estudo
posterior, a duração exata da excreção não foi relatada. Esses resultados diferem de outro
estudo (Berry e Hillerton, 2002a) que relataram resíduos de STI no leite até 3 semanas em
alguns trimestres. No entanto, esses autores observaram que nenhum dos produtores de
laticínios envolvidos no estudo relatou que a persistência de resíduos era uma preocupação
séria.
Although we were able to highlight some statistically significant risk factors explaining
persistency of residues following calving, observed differences were often relatively small and,
perhaps, not very relevant from a clinical standpoint. For instance, 2 of the risk factors (dry
period duration and quarter position) affecting ITS persistency in quarters for which the ITS plug
could not be observed at first milking yielded differences in residues excretion <1 d. Parity,
however, appeared to affect residue persistency more substantially, with >1 additional day of
excretion for quarters of cows ≥4th lactation. Data from this study indicate a higher probability of
postinfusion dispersion of the product in the gland cistern for ≥4th lactation. The reasons for this
are unclear, but it may be due to the teat conformation in older cows, the higher hydrostatic milk
pressure, or other unknown factors.
No presente estudo, devido ao tamanho da amostra relativamente grande, as imagens de raios-
x que ilustram a localização e a persistência do plug ITS durante o período seco e após o parto
não puderam ser coletadas como foi feito em outros estudos (Meaney, 1977;Woolford et al.,
1998). Mais estudos serão necessários para confirmar nossos resultados sobre a presença de
um tampão ITS observável na primeira ordenha, na excreção de resíduos de ITS durante o
início da lactação e no efeito da paridade de vacas na retenção e excreção de resíduos de ITS.
Por exemplo, em estudos futuros, exames repetidos de ultra-som durante o período seco e no
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início da lactação poderiam ser usados ​
​
para ajudar a entender a formação, retenção e dinâmica
de excreção do ITS durante esses períodos de tempo.
CONCLUSÕES
Os resultados do nosso estudo revelaram que um tampão ITS estava presente até a primeira
ordenha após o parto em 83% dos quartos e os resíduos de ITS puderam ser observados no
leite até 12 DIM. Não houve evidência de que quartos sem rolha ITS na primeira ordenha após
o parto tenham maior risco de NIMI ou NIMI durante o período seco.
AGRADECIMENTOS
Esta pesquisa foi apoiada pela Agriculture and Agri-Food Canada e por contribuições adicionais
dos Dairy Farmers of Canada, da Canadian Dairy Network e da Canadian Dairy Commission
sob a Agri-Science Clusters Initiative, por meio da Canadian Bovine Mastitis and Milk Quality
Research Network programa de pesquisa, por Zoetis, e por um dos autores (Dufour) Natural
Sciences and Engineering Research Council of Canada (NSERC)-Discovery grant funds
(RGPIN/435637-2013). O primeiro autor também foi apoiado pelo NSERC-Collaborative
Research and Training Experience Program (CREATE) no programa Milk Quality. De acordo
com o acordo de pesquisa, além de fornecer apoio financeiro, os financiadores não têm papel
na concepção e condução dos estudos, coleta e análise de dados ou interpretação dos dados.
Os pesquisadores mantêm a independência na condução de seus estudos, possuem seus
dados e relatam os resultados, independentemente dos resultados. A decisão de publicar os
resultados cabe exclusivamente aos pesquisadores. Agradecemos a todos os produtores
participantes por sua cooperação, Roxanne Mandeville (Université de Montréal, St-Hyacinthe,
Québec, Canadá) por seu apoio como técnica de saúde animal, e Natasha Robinson e
Marguerite Cameron (ambas da University of Prince Edward Island, Charlottetown, Prince
Edward Island, Canadá) por seu trabalho de laboratório.
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Article Info
Publication History
Published online: April 04, 2018
Accepted:
February 25,
2018
Received:
October 12,
2017
Identification
DOI: https://doi.org/10.3168/jds.2017-13986
Copyright
© 2018 American Dairy Science Association®.
User License
Elsevier user license | How you can reuse
Strategies for protecting the teat at dry-off. The National Mastitis Council 40th Annual
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Figures
Tables
Table 1: Description of 6 dairy farms selected in Québec (Canada) for the study on persistency
of internal teat sealant (ITS) residues in milk after calving
Table 2: Pathogens isolated in 87 quarters with a new IMI in a cohort of 557 quarters from 156
cows from 6 commercial dairies in Quebec, Canada
Table 3: Results from the generalized logistic mixed models used to model effect of various
predictors on odds of having an observable internal teat sealant (ITS) plug at calving in a cohort
of 557 quarters, from 156 cows from 6 commercial dairies
Table 4: Results from the generalized negative Poisson mixed models used to model effect of
various predictors on number of days of persistency of internal teat sealant (ITS) residues in milk
after calving in 441 quarters with an observable ITS plug at calving
Table 5: Results from the generalized negative binomial mixed models used to model effect of
various predictors on number of days of persistency of internal teat sealant (ITS) residues in milk
after calving in 90 quarters without an observable ITS plug at calving
Table 6: Results from the generalized logistic mixed models used to model effect of having an
observable internal teat sealant (ITS) plug at calving on odds of acquiring a new intramammary
infection (NIMI) or a NIMI caused specifically by an environmental pathogen (NIMI ) during the
dry period
Figure 1 Distribution of nu…
Figura miniatura gr1
1
env
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Um estudo observacional de coorte sobre a persistência de resíduos de selante interno de tetos no leite após o parto em vacas leiteiras - Journal of Dairy Science.pdf

  • 1. 27/08/2022 07:39 Um estudo observacional de coorte sobre a persistência de resíduos de selante interno de tetos no leite após o parto em va… https://www.journalofdairyscience.org/article/S0022-0302(18)30308-4/fulltext#seccestitle180 1/32  Log in ABSTRATO Nossos objetivos foram avaliar a prevalência de quartos com um tampão observável de selante interno de teto (ITS) na primeira ordenha após o parto e investigar a persistência de resíduos de ITS no leite após o parto. Um estudo observacional de coorte foi realizado em 557 quartos de 156 vacas tratadas com ITS em 6 fazendas em Quebec, Canadá. A presença de um tampão ITS na primeira ordenha e resíduos de ITS no leite a cada ordenha foram observados pelos produtores. Os efeitos de vários fatores sobre as chances de observar um plug de ITS e a persistência de resíduos de ITS no leite foram estudados usando modelos mistos logísticos generalizados e mistos binomiais negativos generalizados, respectivamente. Amostras de leite foram coletadas no dia anterior à secagem e em 2 ocasiões após o parto para identificação bacteriana para detecção de infecção intramamária (IMI) por meio de cultura bacteriológica seguida de identificação MALDI-TOF. A associação entre a ausência de um plug ITS e a presença de novo IMI foi avaliada por meio de um modelo de regressão logística mista. Os tampões de selante de tetos internos após o parto foram observados com mais frequência nos quartos traseiros e nos quartos que receberam apenas ITS na secagem versus antimicrobianos e ITS. Observamos uma persistência média (desvio padrão) de 4,0 d (2,3 d). Quando um tampão ITS ainda estava presente na primeira ordenha (83% dos trimestres), a eliminação de resíduos de ITS no leite após o parto foi significativamente maior (4,5 d, em média) em comparação com 1,2 d quando um tampão ITS estava ausente. Em vacas com plug ITS ao parto, observamos maior número de dias de excreção em vacas mais velhas. Quando um   Um estudo observacional de coorte sobre a persistência de resíduos de selante interno de tetos no leite após o parto em vacas leiteiras Fidèle Kabera •Simon Dufour •Greg Keefe •Jean-Philippe Roy Arquivo Aberto • Publicado: 04 de abril de 2018 • DOI: https://doi.org/10.3168/jds.2017-13986 PESQUISA | VOLUME 101, EDIÇÃO 7, P6399-6412,01 DE JULHO DE 2018   Métricas PlumX 
  • 2. 27/08/2022 07:39 Um estudo observacional de coorte sobre a persistência de resíduos de selante interno de tetos no leite após o parto em va… https://www.journalofdairyscience.org/article/S0022-0302(18)30308-4/fulltext#seccestitle180 2/32 tampão não pôde ser observado, quartos traseiros, vacas mais velhas e vacas com um longo período de seca excretaram resíduos de ITS por um período significativamente maior. A falta de uma associação significativa entre a ausência de tampão e as chances de novos IMI ao parto sugere que, apesar da perda do tampão, as vacas ainda estavam protegidas contra novos IMI. Embora tenhamos sido capazes de destacar alguns fatores de risco estatisticamente significativos que explicam a persistência dos resíduos de ITS após o parto, as diferenças observadas foram frequentemente relativamente pequenas e, talvez, não clinicamente relevantes. Em conclusão, um plug ITS estava presente até a primeira ordenha após o parto em 83% dos trimestres, quartos sem plug ITS na primeira ordenha pareciam ter sido protegidos de novos IMI, Palavras-chave selante de teto interno •resíduo •infecção intramamária •parto •período seco INTRODUÇÃO Vacas leiteiras correm alto risco de desenvolver novos IMI ( NIMI ) durante o período seco, que muitas vezes permanecem indetectáveis ​ ​ até o parto ou mesmo muito tempo após o parto em alguns casos (Smith et ai., 1985;Bradley, 2002). Esses NIMI adquiridos no período seco combinados com IMI que persistem desde a lactação anterior são importantes determinantes da prevalência de IMI na lactação subsequente.Green et al., 2002). Os fatores que influenciam a suscetibilidade à NIMI no início do período seco incluem a transição funcional associada à involução mamária, o atraso na formação completa do tampão de queratina no canal do teto e a interrupção da higienização do teto.Smith et ai., 1985;Dingwell et al., 2003;Halasa et al., 2009). De fato, um estudo anterior na Nova Zelândia observou que 50% dos tetos não desenvolveram um tampão de queratina durante os primeiros 10 dias do período seco.Williamson et al., 1995). Além disso, outros estudos relataram que 23% dos tetos ainda estavam abertos até 6 semanas após a secagem e, para 3 a 5% dos tetos, nunca foi observado um tampão de queratina.Williamson et al., 1995;Dingwell et al., 2004). Para prevenir a NIMI durante o período seco, a aplicação de um selante interno de teto ( ITS ) isoladamente ou combinada com a administração de antimicrobiano é hoje amplamente utilizada. Um ITS forma uma barreira física à entrada de bactérias responsáveis ​ ​ pela mastite e, assim, reduz o risco de ocorrência de NIMI durante o período seco.Berry e Hillerton, 2002a;Godden et al., 2003;Sanford et al., 2006). Por exemplo, Orbeseal (Zoetis Canada, Kirkland, Quebec, Canadá) é um ITS que consiste em subnitrato de bismuto formulado em uma   
  • 3. 27/08/2022 07:39 Um estudo observacional de coorte sobre a persistência de resíduos de selante interno de tetos no leite após o parto em va… https://www.journalofdairyscience.org/article/S0022-0302(18)30308-4/fulltext#seccestitle180 3/32 pasta maleável viscosa inerte. É uma infusão intramamária estéril e não antimicrobiana. O uso de ITS pode complementar ou fornecer uma alternativa à terapia antimicrobiana de vacas secas para proteger os quartos durante o período seco.Woolford et al., 1998;Berry e Hillerton, 2002b;Huxley et al., 2002). Tal estratégia, que não envolve antimicrobianos, é de considerável importância devido às preocupações de saúde pública sobre resistência antimicrobiana e resíduos de antimicrobianos no leite. O ITS não é absorvido sistemicamente pela glândula mamária e pode persistir no teto por pelo menos 100 dias durante o período seco.Woolford et al., 1998). Permanece na cisterna do teto durante o período seco até que seja removido fisicamente manualmente na primeira ordenha, ou pela mamada do bezerro. Atualmente, poucos estudos avaliaram a proporção de quartos na primeira ordenha após o parto que ainda possuem rolha ITS. A proporção de quartos realmente protegidos durante todo o período de seca não é, portanto, bem descrita. Além disso, não está claro se os quartos, tendo perdido o tampão selante antes da primeira ordenha, ainda estavam substancialmente protegidos do NIMI durante o período seco. Por fim, os fatores de risco que podem influenciar na persistência do tampão selante até a primeira ordenha não estão bem descritos. Além disso, poucos dados estão atualmente disponíveis sobre a persistência de resíduos de ITS no leite após o parto e sobre fatores que afetam a excreção de ITS após o parto. Alguns autores relataram presença de resíduos de selante no leite até 3 semanas após o parto (Berry e Hillerton, 2002a.Butto et al., 2011relataram que a maior parte do produto foi eliminada na primeira ordenha, mas que alguns resíduos podem ser observados ao longo das ordenhas subsequentes. No entanto, esses autores não investigaram a duração média da excreção de resíduos. Consequentemente, os objetivos primários do presente estudo foram (1) quantificar a prevalência de quartos com um tampão selante observável na primeira ordenha após o parto, (2) investigar a persistência de resíduos de ITS no leite após o parto e (3) identificar fatores de risco que pode afetar a presença de um tampão de ITS no parto e o número de dias de excreção de ITS após o parto. Um objetivo secundário do estudo foi investigar se quartos sem um tampão de selante observável na primeira ordenha após o parto estavam igualmente protegidos da aquisição de NIMI durante o período seco em comparação com aqueles com um tampão de selante observável. MATERIAIS E MÉTODOS Participantes   
  • 4. 27/08/2022 07:39 Um estudo observacional de coorte sobre a persistência de resíduos de selante interno de tetos no leite após o parto em va… https://www.journalofdairyscience.org/article/S0022-0302(18)30308-4/fulltext#seccestitle180 4/32 O estudo atual foi um estudo de coorte observacional realizado em 557 quartos de 156 vacas tratadas com ITS em 6 fazendas leiteiras em Quebec (Canadá) entre outubro de 2015 e julho de 2016. Esta coorte de 6 fazendas foi uma amostra de conveniência de um estudo controlado randomizado maior ( ECR) em terapia seletiva de vaca seca à base de um quarto realizada em 9 fazendas. Dessa amostra maior, foram selecionadas apenas as fazendas onde a equipe de ordenha concordou em registrar a presença de resíduos no leite após o parto. Para o RCT, os critérios de inclusão do rebanho foram (1) uma média de SCC do tanque a granel <250.000 células/mL no último ano, (2) um período seco direcionado de 35 a 75 d, (3) participação em um programa DHI e ( 4) vontade de se comprometer com o protocolo do projeto. Nesses rebanhos, todas as vacas leiteiras prenhes prontas para secagem, com pelo menos 3 quartos funcionais, e não tratadas com antimicrobianos durante os 14 dias antes da secagem foram incluídas. As vacas que não atenderam aos critérios de inclusão foram tratadas de acordo com os procedimentos de rotina da fazenda para secagem. No RCT, um total de 574 vacas foram recrutadas e alocadas, usando um gerador de números aleatórios, em 4 grupos: (1) intramamário ( IMM) infusão de terapia antimicrobiana de vaca seca isolada; (2) infusão IMM de terapia antimicrobiana de vaca seca e ITS; (3) cultura na fazenda usando uma Petrifilm Aerobic Count Plate (3M, London, Ontario, Canada) com quartos positivos (definidos como ≥5 ufc/mL na Petrifilm Aerobic Count Plate) tratados com infusão IMM de terapia antimicrobiana de vaca seca isolada e trimestres negativos tratados apenas com ITS; e (4) cultura na fazenda usando Petrifilm com quartos positivos tratados com infusão de IMM de terapia antimicrobiana de vaca seca e ITS e quartos negativos tratados apenas com ITS. A equipe da fazenda estava cega para a alocação do tratamento e, portanto, não podia escolher um grupo para uma vaca ou mantê-la fora do estudo. Para o estudo de coorte atual, realizado em 6 dessas fazendas, apenas quartos tratados a seco com ITS sozinho ou com antimicrobiano e ITS foram selecionados. Esses quartos receberam, com base na alocação do grupo e status IMI seco, 4 g de um ITS contendo 65% p/p de subnitrato de bismuto (Orbeseal) com ou sem uma infusão IMM de antimicrobiano de vaca seca (200.000 UI de Penicilina G Procaína e 400 mg de Novobiocina; Novodry Plus, Zoetis Canada, Kirkland, Quebec, Canadá). Todos os tratamentos foram aplicados pelo pessoal da fazenda imediatamente após a última ordenha antes da secagem, seguindo os procedimentos recomendados na ficha técnica da Canadian Bovine Mastitis and Milk Quality Research Network sobre a técnica de administração do tratamento IMM em vacas leiteiras (CBMQRN, 2010). Os tratamentos foram registrados para verificar o cumprimento do protocolo do estudo. Coleção de dados Antes do início do estudo, cada participante foi treinada nas técnicas de infusão asséptica do IMM ao usar o ITS, a retirada do ITS após o parto e a observação dos resíduos do ITS antes da   
  • 5. 27/08/2022 07:39 Um estudo observacional de coorte sobre a persistência de resíduos de selante interno de tetos no leite após o parto em va… https://www.journalofdairyscience.org/article/S0022-0302(18)30308-4/fulltext#seccestitle180 5/32 ordenha. Além disso, uma folha ilustrada prática sobre a técnica de administração para o tratamento de IMM em gado leiteiro foi fornecida, explicada e deixada nas fazendas. A equipe de pesquisa visitou as fazendas participantes a cada duas semanas ao longo do estudo para inscrição de vacas na seca e para monitorar o progresso e respeito do protocolo do estudo. Em cada fazenda, 1 (o proprietário, em geral) ou 2 funcionários (o proprietário e 1 funcionário) foram alocados ao projeto e coletadas todas as observações. A presença de um tampão ITS observável na primeira ordenha após o parto e a persistência de resíduos de ITS no leite após o parto foram monitorados visualmente pelos produtores de leite. Um tampão ITS foi considerado eficaz se a pressão no teto necessária para remover o tampão fosse maior do que a necessária para a remoção normal do leite, e ITS significativo foi observado após a extração. Os resíduos foram observados diretamente no chão ou com copo- filtro a cada ordenha, dependendo da preferência dos ordenhadores. O monitoramento dos resíduos no leite foi realizado até a observação de pelo menos 4 ordenhas sucessivas sem resíduos. O último dia em que os resíduos foram observados em cada trimestre foi utilizado para calcular o número de dias com resíduos para as análises estatísticas. Fatores de risco putativos Dados sobre paridade, produção de leite na secagem e produção de leite no início da lactação foram extraídos do software do sistema de ordenha da fazenda (1 rebanho) e dos dados mensais do DHI (5 rebanhos) e investigados como potenciais preditores de excreção de ITS. Para a produção de leite na secagem, foi utilizada a medida coletada no último teste de DHI antes da secagem. Para a produção de leite no início da lactação, hipotetizamos que a produção de leite nos primeiros DIM pode afetar a presença de um tampão de ITS ou dias de excreção de ITS ou ambos. Para muitas vacas, no entanto, a primeira medida de produção de leite foi a do controle DHI e esta medida pode ser coletada às vezes muito cedo na lactação, mas às vezes até 40 a 45 DIM (dependendo da concordância entre a data do parto e o próximo controle DHI programado) . Portanto, para obter um padrão mais estável, homogêneo, e confiável, em vez de usar apenas a primeira medição de produção de leite relatada, usamos a produção média de leite das primeiras 15 semanas de leite para a fazenda da qual pudemos obter dados semanais de produção de leite e a produção média de leite das primeiras 3 semanas Testes DHI após o parto para as outras fazendas. Nossa hipótese era que vacas de alta produção nas primeiras 15 semanas de lactação possivelmente também eram vacas de alta produção em torno do parto. A paridade foi categorizada com base em sua distribuição em 2ª paridade, 3ª paridade e ≥4ª paridade. As informações sobre o método de visualização de resíduos utilizado (copo-filtro x piso) foram fornecidas pelos produtores participantes. usamos a produção média de leite das primeiras 15 semanas de leite para a fazenda da qual podemos obter dados semanais de produção de leite, e a produção média de leite dos 3 primeiros testes   
  • 6. 27/08/2022 07:39 Um estudo observacional de coorte sobre a persistência de resíduos de selante interno de tetos no leite após o parto em va… https://www.journalofdairyscience.org/article/S0022-0302(18)30308-4/fulltext#seccestitle180 6/32 de DHI após o parto para as outras fazendas. Nossa hipótese era que vacas de alta produção nas primeiras 15 semanas de lactação possivelmente também eram vacas de alta produção em torno do parto. A paridade foi categorizada com base em sua distribuição em 2ª paridade, 3ª paridade e ≥4ª paridade. As informações sobre o método de visualização de resíduos utilizado (copo-filtro x piso) foram fornecidas pelos produtores participantes. usamos a produção média de leite das primeiras 15 semanas de leite para a fazenda da qual podemos obter dados semanais de produção de leite, e a produção média de leite dos 3 primeiros testes de DHI após o parto para as outras fazendas. Nossa hipótese era que vacas de alta produção nas primeiras 15 semanas de lactação possivelmente também eram vacas de alta produção em torno do parto. A paridade foi categorizada com base em sua distribuição em 2ª paridade, 3ª paridade e ≥4ª paridade. As informações sobre o método de visualização de resíduos utilizado (copo-filtro x piso) foram fornecidas pelos produtores participantes. 3ª paridade e ≥4ª paridade. As informações sobre o método de visualização de resíduos utilizado (copo-filtro x piso) foram fornecidas pelos produtores participantes. 3ª paridade e ≥4ª paridade. As informações sobre o método de visualização de resíduos utilizado (copo-filtro x piso) foram fornecidas pelos produtores participantes. Amostras de leite para análises bacteriológicas Usando a técnica de amostragem asséptica (Conselho Nacional de Mastite, 2017a), amostras de leite de um quarto de todas as vacas inscritas foram coletadas no dia anterior à secagem ( S ) e após o parto em 3 a 4 DIM ( S ) e 5 a 18 DIM ( S ) para detectar IMI usando cultura bacteriológica seguida de identificação MALDI-TOF MS. A amostra S foi coletada pelo produtor ou pessoal da fazenda, enquanto S e S amostras foram coletadas pela equipe de pesquisa. As amostras de leite foram congeladas a -20°C antes de serem enviadas mensalmente para o laboratório de pesquisa Maritime Quality Milk da Universidade de Prince Edward Island, onde a cultura e a identificação bacteriana foram realizadas. O pessoal do laboratório estava cego para a alocação do tratamento ao realizar análises bacteriológicas. Análises Laboratoriais Cultura Bacteriológica do Leite As amostras de leite foram descongeladas e cultivadas no laboratório de pesquisa Maritime Quality Milk usando métodos padronizados descritos no Laboratory Handbook on Bovine Mastitis (Conselho Nacional de Mastite, 2017b). Resumidamente, alças plásticas descartáveis ​ ​ foram usadas para selar 0,01 mL de leite em duas placas contendo metade de ágar Columbia + 5% de sangue de ovelha e metade de ágar MacConkey. As placas foram incubadas a 35°C e examinadas quanto ao crescimento bacteriano após 24 e 48 h. As colônias foram provisoriamente identificadas como estafilococos, estreptococos, coliformes ou outros 1 2 3 2 1 3   
  • 7. 27/08/2022 07:39 Um estudo observacional de coorte sobre a persistência de resíduos de selante interno de tetos no leite após o parto em va… https://www.journalofdairyscience.org/article/S0022-0302(18)30308-4/fulltext#seccestitle180 7/32 patógenos com base nas características de crescimento da colônia, morfologia, padrão de hemólise, reação de catalase e coloração de Gram. Para cada amostra positiva, o número de unidades formadoras de colônias por 0,01 mL de leite foi enumerado até um máximo de 10 colônias. Foi tentada a identificação de todos os microrganismos recuperados na placa, independente do número de colônias. Amostras com 3 ou mais tipos de colônias fenotipicamente diferentes foram classificadas como contaminadas. No entanto,Staphylococcus aureus ), as colônias hemolíticas foram enumeradas e analisadas posteriormente. Levedura e Prototheca spp. foram registrados com base nos resultados da coloração de Gram. Colônias de bactérias foram subcultivadas em placas de ágar sangue para obter cultura pura para posterior classificação usando MALDI-TOF MS. MALDI-TOF MS A identificação final dos isolados foi realizada usando o método de transferência direta (MALDI Biotyper 3.1 User Manual, Bruker Daltonics Inc., Billerica, MA). Resumidamente, um aplicador de madeira estéril de 15 cm, de uso único, foi usado para levantar o material de uma colônia bacteriana bem isolada, seguido por uma camada fina de material da colônia em um alvo MSP de 96 pontos de aço moído (Bruker Daltonics Inc.) . As manchas foram deixadas secar ao ar à temperatura ambiente. Subsequentemente, as manchas foram cobertas com 1,0 µL de uma solução saturada de matriz de ácido α-ciano-4-hidroxicinâmico em 50% de acetonitrila, 47,5% de água e 2,5% de ácido trifluoroacético (Sigma-Aldrich Canada Inc., Oakville, ON, Canadá ) usando pontas de pipeta de uso único e secas ao ar à temperatura ambiente. Todos os alvos foram calibrados usando o Padrão de Teste Bacteriana (Bruker Daltonics Inc.) e incluíram Staphylococcus aureus ATCC 29213 e Escherichia coliAmostras de classificação de controle ATCC 25922 em duplicata. Para confirmar que a limpeza do alvo foi eficaz e nenhum material bacteriano residual de uma execução anterior permaneceu, um ponto em cada alvo continha apenas matriz sem amostra bacteriana. Todas as capturas e classificações espectrais bacterianas foram realizadas usando a plataforma de classificação microbiana Bruker Daltonics Research Use Only que incluiu um espectrômetro de massa Microflex LT, software flexControl (versão 3.4), MALDI Biotyper Real Time Classification, Offline Classification (versão 3.1) com 5.627 Main Spectrum biblioteca de banco de dados de referência (MBT-BDAL-5627) e uma biblioteca CNS personalizada desenvolvida porCameron et al., 2017. Todas as revisões de espectros foram realizadas usando o software flexAnalysis (versão 3.4, Bruker Daltonics Inc.). O MALDI Biotyper RTC foi realizado de acordo com o MALDI Biotyper 3.1 User Manual. As configurações do FlexControl foram faixa de massa média (1.960–21.200 m/z), ganho do detector definido para 8,6 × (3.227 V), configurações de amostra e digitalizador em 0,50 GS/s, e fonte de íons 1 e 2 valores de 20,12 e 18,25 kV, respectivamente . Cada espectro de amostra foi   
  • 8. 27/08/2022 07:39 Um estudo observacional de coorte sobre a persistência de resíduos de selante interno de tetos no leite após o parto em va… https://www.journalofdairyscience.org/article/S0022-0302(18)30308-4/fulltext#seccestitle180 8/32 somado a partir de um máximo de 240 disparos acumulados a partir de um mínimo de 6 pontos raster usando um pequeno padrão de movimento de laser em espiral. Após a aquisição do espectro de massa de uma amostra, o software Biotyper compara o espectro com os espectros de referência contidos no banco de dados. O software então exibe as identificações correspondentes e calcula uma pontuação que varia de 0,0 a 3,0, indicando o grau de similaridade entre o espectro da amostra e o espectro de referência. As pontuações de identificação foram interpretadas de acordo com as recomendações do fabricante da seguinte forma: uma pontuação de 2,0 a 3,0 foi considerada aceitável para identificação em nível de espécie, uma pontuação de 1,7 a <2,0 indicou identificação confiável para o nível de gênero e uma pontuação de <1,7 foi considerada uma identificação não confiável. Definição de NIMI Para determinar se um NIMI por um patógeno específico foi adquirido durante o período seco, foram utilizadas a amostra pré-seca (S ) e a primeira amostra após o parto (S ). Se a primeira amostra após o parto (S ) estava faltando ou contaminada, então a segunda amostra (S ) era usada. A informação sobre NIMI estava, portanto, faltando, se a amostra na secagem (S ) estivesse contaminada ou se ambas as amostras após o parto (S e S ) estivessem faltando ou contaminadas. A presença de ≥1 UFC/0,01 mL de leite foi considerada suficiente para qualificar um quarto como tendo IMI. Se um IMI por uma espécie de patógeno específico estava presente no parto e se essa mesma espécie de patógeno não foi encontrada na amostra seca, então o quarto foi considerado como tendo experimentado um NIMI. Em nosso estudo, grupos de bactérias que podem ser relatados por análises MALDI-TOF, mas não são relevantes para mastite bovina, não foram considerados na definição de NIMI. No estudo atual, estes foram Corynebacterium amycolatum , outros gram- positivos, Curtobacterium flaccumfaciens , espécies de Brachybacterium , Brevibacillus parabrevis , espécies de Kocuria, Weissella confusa , Bacillus pumilus , Micrococcus luteus e Neisseria flavescens. Como os ITS são usados ​ ​ principalmente para prevenir NIMI por bactérias ambientais, também investigamos especificamente NIMI por esses tipos de patógenos, criando uma segunda definição de NIMI ( NIMI ), que excluiu ainda mais NIMI por patógenos de mastite contagiosa ( Corynebacterium bovis e outras espécies não especiadas de Corynebacterium e Staphylococcus aureus ). Observe que Streptococcus agalactiae , Mycoplasma bovis e outras espécies de Mycoplasma não foram recuperadas no presente estudo. Análise estatística A unidade experimental primária foi o quartel. Quatro desfechos de interesse foram investigados: (1) presença de um tampão ITS observável na primeira ordenha após o parto; (2) 1 2 2 3 1 2 3 env   
  • 9. 27/08/2022 07:39 Um estudo observacional de coorte sobre a persistência de resíduos de selante interno de tetos no leite após o parto em va… https://www.journalofdairyscience.org/article/S0022-0302(18)30308-4/fulltext#seccestitle180 9/32 número de dias de persistência dos resíduos de STI no leite após o parto; (3) desenvolvimento de um NIMI durante o período seco; e (4) desenvolvimento de NIMI durante o período seco. Estatísticas descritivas foram primeiro computadas, então o efeito incondicional das diferentes exposições foi testado em modelos lineares generalizados mistos usando o procedimento SAS Proc GLIMMIX (versão 9.4, SAS Institute Inc., Cary, NC). Como as observações foram agrupadas dentro de vacas (4 quartos por vaca) e dentro de rebanhos, interceptações aleatórias para vaca e rebanho foram incluídas em todos os modelos estatísticos. Os modelos usados ​ ​ para os diferentes resultados são descritos nas seções a seguir. A suposição de linearidade entre preditores quantitativos e desfechos foi avaliada usando termos polinomiais. As associações condicionais foram então computadas introduzindo os confundidores putativos no modelo; associações condicionais e incondicionais foram então comparadas e os fatores de confusão foram retidos apenas se a medida de associação (ou seja, razão de chances ou razão de incidência) diferir em mais de 10%, conforme sugerido porMickey e Groenlândia, 1989. Para todos os modelos, o limiar de significância foi fixado em 0,05. Ajustes a posteriori para comparações múltiplas foram usados ​ ​ para preditores >2 categorias usando o método de Tukey- Kramer. Apenas indivíduos com informações completas sobre todas as variáveis ​ ​ do modelo final foram incluídos nas análises (ou seja, análise de caso completa). Fatores de risco que afetam as chances de um plug ITS observável na primeira ordenha após o parto Um modelo misto generalizado com um link logit foi usado para investigar o efeito dos diferentes preditores sobre as chances de observar um plug ITS na primeira ordenha após o parto. Os preditores avaliados foram paridade, produção de leite na secagem, produção de leite no início da lactação, tratamento recebido na secagem (antimicrobiano e ITS vs. ITS sozinho), duração do período seco e posição do quarto (frente vs. traseira). A paridade foi investigada como um confundidor putativo para a associação entre a produção de leite na secagem e as chances de observar um tampão ITS no parto e para a associação entre a produção de leite no início da lactação e as chances de um tampão. Além disso, a produção de leite na secagem foi investigada como um potencial confundidor para a associação entre a duração do período seco e as chances de observar um tampão ITS no parto. Fatores de risco para número de dias de persistência de resíduos de ITS no leite após o parto Para o número de dias de persistência de resíduos de ITS no leite após o parto, 2 distribuições notavelmente diferentes foram observadas para quartos para os quais um tampão foi ou não observado no parto. Portanto, para este resultado, foram realizadas análises separadas para trimestres com plug ITS observável e trimestres sem plug. Para essas análises, modelos mistos generalizados usando um link de log foram usados ​ ​ para investigar o efeito dos diferentes preditores no número de dias de resíduos de ITS após o parto. Para trimestres com um plug ITS env   
  • 10. 27/08/2022 07:39 Um estudo observacional de coorte sobre a persistência de resíduos de selante interno de tetos no leite após o parto em va… https://www.journalofdairyscience.org/article/S0022-0302(18)30308-4/fulltext#seccestitle180 10/32 observável no parto, investigamos se um modelo de regressão binomial de Poisson ou negativo se ajustaria melhor aos dados usando um t-teste investigando se o parâmetro de dispersão era diferente de 0. O modelo de regressão de Poisson ofereceu o melhor ajuste e foi retido para essas análises. Para trimestres sem um plug ITS observável, primeiro investigamos se um binômio de Poisson ou negativo se ajustaria melhor aos dados e, em seguida, com base na distribuição observada, avaliamos se um modelo inflado de zero ou convencional forneceria o melhor ajuste usando o Vuong teste (Vuong, 1989). O binômio negativo convencional apresentou o melhor ajuste e foi retido para essas análises. Paridade, produção de leite na secagem, produção de leite no início da lactação, tratamento recebido na secagem (antimicrobiano e ITS vs. ITS sozinho), duração do período seco, posição do quarto (frente vs. traseira) e método de visualização usado pelo produtores participantes foram avaliados como potenciais preditores do número de dias de excreção. Novamente, a paridade foi investigada como confundidor putativo para a associação entre a produção de leite na secagem e a persistência de resíduos de ITS no leite após o parto e para a associação entre a produção de leite no início da lactação e a persistência de resíduos de ITS no leite após o parto. Além disso, a produção de leite na secagem foi investigada como potencial confundidor para a associação entre a duração do período seco e a persistência de resíduos de STI no leite após o parto. Efeito da retenção do plugue do ITS nas probabilidades de NIMI durante o período seco Dois modelos mistos generalizados separados com um link logit foram usados ​ ​ para modelar o efeito da presença ou não de um plug ITS observável na primeira ordenha nas chances de NIMI e em chances de NIMI . A única exposição considerada neste modelo foi a presença ou não do plug ITS ao parto. As seguintes variáveis ​ ​ foram investigadas como potenciais confundidores dessas relações: paridade, produção de leite na secagem, produção de leite no início da lactação, tratamento recebido na secagem (antimicrobiano e ITS vs. ITS sozinho), posição do quarto (frente vs. traseira) , e duração do período seco. Cálculo de Potência Como o tamanho da amostra já foi pré-determinado pelo número de quartos disponíveis tratados com selante de teto do ECR, avaliamos as diferenças mínimas que poderiam ser observadas considerando o tamanho real da amostra, usando um α de 0,05 e um poder de 0,90. Para esses cálculos, usamos um poder de 0,90 (vs. 0,80) porque o agrupamento de quartos por vaca e por rebanho não foi contabilizado. Assim, o verdadeiro poder foi provavelmente inferior a 0,90. Por exemplo, considerando um desvio padrão para excreção média de 3 d, teríamos sido capazes de detectar diferenças ≥0,83 e ≥0,94 d entre os níveis de um preditor dicotômico presente em 50 ou 75% dos trimestres, respectivamente. Ao avaliar o env   
  • 11. 27/08/2022 07:39 Um estudo observacional de coorte sobre a persistência de resíduos de selante interno de tetos no leite após o parto em va… https://www.journalofdairyscience.org/article/S0022-0302(18)30308-4/fulltext#seccestitle180 11/32 efeito de um preditor dicotômico nas chances de ter um plug ITS observável no parto, assumindo que 85% dos quartos terão um plug observável, Ao avaliar o efeito de um preditor dicotômico (ausência do plug) nas chances de adquirir um NIMI durante o período seco, assumindo que 10% dos trimestres terão um NIMI, e que o preditor estaria presente em 15% dos trimestres, computamos que poderíamos detectar, com um poder ≥90%, diferença nas chances correspondentes a uma razão de chances ≥2,9. RESULTADOS Estatísticas descritivas Participantes As 6 fazendas leiteiras participantes com principalmente vacas Holandesas estão descritas na Tabela 1. No total, 377 vacas das 6 fazendas participantes pariram durante o estudo de coorte. Duzentas e cinquenta e seis dessas 377 vacas receberam ITS pelo menos em um quarto. Cem (100/256) vacas foram excluídas do estudo por diferentes razões: falta de dados sobre resíduos de ITS (n = 73), vacas morreram antes ou no parto (n = 9), vacas abortadas (n = 4), vacas foram descartados logo após o parto (n = 4), ou o período seco foi <35 ou >75 d (n = 10). Cento e cinquenta e seis vacas (557 quartos) foram monitoradas durante este estudo de coorte com uma média de 26 (intervalo 11-67) vacas monitoradas por fazenda. Sessenta e sete quartos não puderam ser incluídos no estudo porque 60 quartos não receberam ITS na secagem (somente terapia antimicrobiana de vaca seca) e 7 quartos não foram funcionais na secagem. Tabela 1 Descrição de 6 fazendas leiteiras selecionadas em Quebec (Canadá) para o estudo da persistência de resíduos de selante interno de teto (ITS) no leite após o parto   
  • 12. 27/08/2022 07:39 Um estudo observacional de coorte sobre a persistência de resíduos de selante interno de tetos no leite após o parto em va… https://www.journalofdairyscience.org/article/S0022-0302(18)30308-4/fulltext#seccestitle180 12/32 Fazenda Nº de vacas em lactação Alojamento de vacas leiteiras 305-d produção média de leite (kg) Nº de vacas com dados ausentes % de quartos com plug ITS ao parto 1 80 Tieestall 9.820 7 88 2 200 Freestall 9.687 21 95 3 100 Freestall 9.050 7 45 4 80 Freestall 9.679 7 81 5 140 Freestall 10.149 24 59 6 50 Tieestall 9.614 7 100 Abrir tabela em uma nova guia Preditores Resíduos de selante interno de tetos foram observados usando copo-filtro em 110/557 (20%) dos quartos e o leite despojado foi observado diretamente no chão em 447 quartos (80%). Duzentos e oitenta e quatro quartos dianteiros (51%) e 273 quartos traseiros (49%) foram observados durante este estudo. Trezentos e vinte e um quartos (57,6%) receberam uma combinação de antimicrobiano e ITS, enquanto 236 quartos (42,4%) receberam apenas ITS na secagem. Duzentos e quatorze quartos (38,4%) eram de vacas de 2ª paridade, 140 quartos (25,1%) de vacas de 3ª paridade e 203 quartos (36,5%) de vacas com paridade ≥4. A produção média (DP) diária de leite na secagem foi de 24,7 kg/d (7,3 kg) com mínimo e máximo de 8,6 e 47,4 kg/d, respectivamente. A produção diária média (DP) de leite após o parto foi de 45,2 kg/d (6,6 kg) com mínimo e máximo de 27,1 e 62,1 kg/d, respectivamente. Selante de teto interno Um tampão ITS ainda estava presente na primeira ordenha após o parto em 441/531 (83%) dos quartos (intervalo por rebanho: 45-100%), ausente em 90 quartos (17%) e 26 observações   
  • 13. 27/08/2022 07:39 Um estudo observacional de coorte sobre a persistência de resíduos de selante interno de tetos no leite após o parto em va… https://www.journalofdairyscience.org/article/S0022-0302(18)30308-4/fulltext#seccestitle180 13/32 estavam faltando [3 vacas (6 quartos) da fazenda 4 e 5 vacas (20 quartos) da fazenda 1]. A duração dos resíduos de ITS variou de 0 a 12 d, com média (DP) de 4,0 d (2,3 d; Figura 1 ). Ao considerar separadamente os quartos para os quais um tampão pode ser visualizado após o parto e aqueles para os quais o tampão já havia desaparecido, foram observadas 2 distribuições notavelmente diferentes ( Figura 1). Para quartos para os quais um tampão ITS ainda estava presente na primeira ordenha após o parto, a persistência dos resíduos ITS variou entre 1 e 12 d com uma média (SD) de 4,5 d (1,9 d) e parecia seguir uma distribuição quase normal, ou uma distribuição negativa de Poisson ou binomial. Para quartos sem plug ITS na primeira ordenha após o parto, a persistência dos resíduos ITS variou entre 0 e 8 d com média (SD) de 1,2 d (1,7 d) e seguiu uma distribuição típica de dados de contagem (ou seja, Poisson ou binomial negativo com média mais baixa). Figura 1 Distribuição do número de dias com resíduos de selante interno de teto (ITS) no leite após o parto em função da presença ou não de um tampão ITS observável na primeira ordenha. Versão colorida disponível online. Ver imagem grande | Baixar imagem em alta resolução | Baixar (PPT) NIMI no parto   
  • 14. 27/08/2022 07:39 Um estudo observacional de coorte sobre a persistência de resíduos de selante interno de tetos no leite após o parto em va… https://www.journalofdairyscience.org/article/S0022-0302(18)30308-4/fulltext#seccestitle180 14/32 Novas infecções intramamárias foram observadas em 87/530 dos trimestres (16,4%) e ausentes em 443 trimestres (83,6%), de acordo com a primeira definição excluindo apenas bactérias não relevantes para mastite. Houve 27 observações ausentes porque (1) as amostras na secagem estavam contaminadas (n = 21), ou (2) ambas as amostras após o parto estavam ausentes ou contaminadas (n = 6). Ao considerar apenas os patógenos da mastite ambiental, NIMI esteve presente em 60 dos 530 quartos (11,3%) e ausente em 470 quartos (88,7%). A Tabela 2 apresenta as informações sobre as espécies de patógenos isoladas nos casos de NIMI ou NIMI . Tabela 2 Patógenos isolados em 87 quartos com um novo IMI em uma coorte de 557 quartos de 156 vacas de 6 laticínios comerciais em Quebec, Canadá env env 1 Staphylococcus epidermidis 1 Staphylococcus quorum 5 Staphylococcus haemolyticus 3 Staphylococcus hominis 2 Staphylococcus sciuri 5 Staphylococcus simulans 2 Staphylococcus xylosus 10 Streptococcus dysgalactiae 1 Espécies de Streptococcus 2 Trueperella pyogenes 1 Fermento 2   
  • 15. 27/08/2022 07:39 Um estudo observacional de coorte sobre a persistência de resíduos de selante interno de tetos no leite após o parto em va… https://www.journalofdairyscience.org/article/S0022-0302(18)30308-4/fulltext#seccestitle180 15/32 1 Os patógenos foram identificados por cultura bacteriológica seguida de identificação de MALDI-TOF e, quando a identificação de espécies de MALDI-TOF não foi conclusiva, por métodos bacteriológicos de rotina. 2 Entre os 87 trimestres com novos IMI, 4 quartos tiveram novos IMI por 2 espécies diferentes. Abrir tabela em uma nova guia Fatores de risco que afetam as chances de um plug ITS observável na primeira ordenha após o parto As associações entre preditores e chances de ter um plug ITS observável na primeira ordenha após o parto são apresentadas na Tabela 3 . Apenas o tipo de tratamento administrado na secagem e na posição de quarto foram significativamente associados às chances de ter um plug ITS observável no parto. Os quartos que receberam apenas ITS tiveram 2,6 vezes mais chances (IC 95%: 1,1, 6,1) de ter um plug ITS após o parto do que aqueles que receberam uma combinação de antimicrobianos e ITS. Os quartos traseiros tiveram chances 2,1 vezes maiores (IC 95%: 1,1, 3,9) de ter um plug após o parto do que os quartos dianteiros. Tabela 3 Resultados dos modelos mistos logísticos generalizados usados ​ ​ para modelar o efeito de vários preditores nas chances de ter um tampão de selante interno de teto (ITS) observável no parto em uma coorte de 557 quartos, de 156 vacas de 6 laticínios comerciais   
  • 16. 27/08/2022 07:39 Um estudo observacional de coorte sobre a persistência de resíduos de selante interno de tetos no leite após o parto em va… https://www.journalofdairyscience.org/article/S0022-0302(18)30308-4/fulltext#seccestitle180 16/32 1 Joint P-value for the group of predictors (type III test). 2 Intercept for a cow producing 10 kg of milk per day. 3 Effect for a 5 kg/d increase in milk production. 4 Intercept for a cow with a 35-d dry period and producing 10 kg of milk per day pre-dry. 5 Effect for a 7-d increase in dry period duration. 6 Milk production pre-dry was retained as a confounder of the relationship between dry period duration and odds of having an observable ITS plug at calving (change in odds ratio: 18%). Open table in a new tab Risk Factors for Number of Days of Persistency of ITS Residues in Milk After Calving Quarters with an ITS Plug Present at Calving Parâmetro Estimativa SE Razão de probabilidade 95% CI Valor P 1 (1) Paridade  Interceptar 1.981 0,772  Paridade 0,08   2 Referência Referência Referência Referência   3 −0,563 0,555 0,57 0,19, 1,7   ≥4 0,836 0,593 2.3 0,72, 7,4  Variação do rebanho 2.591 2.059  Variação da vaca 2.891 0,692   
  • 17. 27/08/2022 07:39 Um estudo observacional de coorte sobre a persistência de resíduos de selante interno de tetos no leite após o parto em va… https://www.journalofdairyscience.org/article/S0022-0302(18)30308-4/fulltext#seccestitle180 17/32 Associations between predictors and number of days of persistency of ITS residues in milk after calving in quarters with an observable ITS plug at calving are presented in Table 4. When an ITS plug was still present at the first milking after calving, Poisson regression with random effects offered the best fit and was used to evaluate the effects of different predictors on the number of days of persistence of ITS residues in milk. Only cow's parity influenced significantly the number of days of excretion of ITS residues in milk after calving. After adjusting for multiple comparisons, quarters of cows ≥4th parity had 1.3 times more days with residues (95% CI: 1.0, 1.5) than quarters from 3rd parity cows. Quarters of cows ≥4th parity also had 1.2 times more days with residues (95% CI: 1.0, 1.4) than quarters from 2nd parity cows. Number of days of residues were not statistically different between quarters from 3rd and 2nd parity cows. Predicted number of days of residues were 3.9, 3.7, and 4.9 d for 2nd, 3rd, and ≥4th parity cows, respectively. Table 4 Results from the generalized negative Poisson mixed models used to model effect of various predictors on number of days of persistency of internal teat sealant (ITS) residues in milk after calving in 441 quarters with an observable ITS plug at calving   
  • 18. 27/08/2022 07:39 Um estudo observacional de coorte sobre a persistência de resíduos de selante interno de tetos no leite após o parto em va… https://www.journalofdairyscience.org/article/S0022-0302(18)30308-4/fulltext#seccestitle180 18/32 1 Joint P-value for the group of predictors (type III test). 2 Intercept for a cow producing 10 kg/d of milk. 3 Effect for a 5 kg/d increase in milk production. 4 Intercept for a cow with a 35-d dry period. 5 Effect for a 7-d increase in dry period duration. Open table in a new tab Quarters Without an ITS Plug at Calving Associations between predictors and number of days of persistency of ITS residues in milk after calving in quarters without an observable ITS plug at calving are presented in Table 5. When an ITS plug was not present at the first milking after calving, negative binomial regression with random effects offered the best fit and was used to evaluate the effect of different predictors on the number of days of persistence of ITS residues in milk. Parity, duration of the dry period, and Parameter Estimate SE Incidence ratio 95% CI P-value 1 (1) Parity  Intercept 1.367 0.105  Parity <0.01   2 Reference Reference Reference Reference   3 −0.066 0.081 0.94 0.80, 1.1   ≥4 0.167 0.069 1.2 1.0, 1.4  Herd variance 0.048 0.035  Cow variance 0.046 0.014 (2) Milk production pre-dry   
  • 19. 27/08/2022 07:39 Um estudo observacional de coorte sobre a persistência de resíduos de selante interno de tetos no leite após o parto em va… https://www.journalofdairyscience.org/article/S0022-0302(18)30308-4/fulltext#seccestitle180 19/32 quarter position all significantly affected number of days of ITS residues after calving in quarter without an observable ITS plug at calving. Table 5 Results from the generalized negative binomial mixed models used to model effect of various predictors on number of days of persistency of internal teat sealant (ITS) residues in milk after calving in 90 quarters without an observable ITS plug at calving 1 Joint P-value for the group of predictors (type III test). 2 Intercept for a cow producing 10 kg of milk per day. 3 Effect for a 5 kg/d increase in milk production. 4 Intercept for a cow with a 35-d dry period. 5 Effect for a 7-d increase in dry period duration. Parameter Estimate SE Incidence ratio 95% CI P-value 1 (1) Parity  Intercept −0.850 0.545  Parity <0.01   2 Reference Reference Reference Reference   3 −0.259 0.615 0.77 0.2, 3.4   ≥4 1.808 0.628 6.1 1.3, 27.7  Herd variance 0.609 0.816  Cow variance 1.223 0.522 (2) Milk production pre-dry   
  • 20. 27/08/2022 07:39 Um estudo observacional de coorte sobre a persistência de resíduos de selante interno de tetos no leite após o parto em va… https://www.journalofdairyscience.org/article/S0022-0302(18)30308-4/fulltext#seccestitle180 20/32 Open table in a new tab After adjusting for multiple comparisons, quarters of cows ≥4th parity had 7.9 times more days with residues (95% CI:1.4, 44.0) than quarters from 3rd parity cows. Quarters of cows ≥4th parity also had 6.1 times more days with residues (95% CI: 1.3, 27.7) than quarters from 2nd parity cows. We did not observe a significant difference between quarters from 2nd and 3rd parity cows. Predicted number of days of residues were 0.4, 0.3, and 2.6 d for 2nd, 3rd, and ≥4th parity cows, respectively. The number of days of persistence of ITS residues in milk after calving were multiplied by a factor of 1.7 (95% CI: 1.1, 2.5) for every 1-wk increase of dry period length. For instance, number of days of residues were 0.1, 0.2, and 0.6 for quarters with a dry period of 6, 8, and 10 wk, respectively. Finally, rear quarters had 1.6 times more days with residues (95% CI: 1.1, 2.4) than front quarters. Predicted number of days of residues were 0.5, and 0.7 d for front and rear quarters, respectively. Effect of ITS Plug Retention on Odds of NIMI Over the Dry Period Associations between presence of an ITS plug at calving and odds of acquiring a NIMI or a NIMI are presented in Table 6. Treatment at drying-off (antimicrobials and ITS vs. ITS alone) was retained as a significant confounder of the association between presence of a plug at calving and NIMI and NIMI . After controlling for this confounder, the fact that ITS plug was present or not at calving was not significantly associated with odds of NIMI at calving (P = 0.33, odds = 1.4, 95% CI: 0.7, 3.0) nor with odds of NIMI (P = 0.54, odds = 1.3, 95% CI: 0.6, 3.1). When all relevant mastitis pathogens were considered, NIMI rates were 16.2, and 16.7% of quarters when plug was present or absent, respectively. When environmental mastitis pathogens only were considered, NIMI rates were 11.4, and 10% of quarters when a plug was present or absent, respectively. Table 6 Results from the generalized logistic mixed models used to model effect of having an observable internal teat sealant (ITS) plug at calving on odds of acquiring a new intramammary infection (NIMI) or a NIMI caused specifically by an environmental pathogen (NIMI ) during the dry period env env env env env   
  • 21. 27/08/2022 07:39 Um estudo observacional de coorte sobre a persistência de resíduos de selante interno de tetos no leite após o parto em va… https://www.journalofdairyscience.org/article/S0022-0302(18)30308-4/fulltext#seccestitle180 21/32 1 Joint P-value for the group of predictors (type III test). 2 Treatment at dry-off was retained as a confounder of the relationship between presence of an observable ITS plug at calving and odds of acquiring a NIMI over the dry period (change in odds ratio: 15%). 3 Treatment at dry-off was retained as a confounder of the relationship between presence of an observable ITS plug at calving and odds of acquiring a NIMI over the dry period (change in odds ratio: 11%). Open table in a new tab DISCUSSION Participants Parameter Estimate SE Odds ratio 95% CI P-value 1 (1) NIMI  Intercept −1.256 0.344  ITS plug at calving 0.33   Present Reference Reference Reference Reference   Absent 0.362 0.373 1.4 0.7, 3.0  Treatment 2 <0.01   Antimicrobials + ITS Reference Reference Reference Reference   ITS only 0.885 0.276 2.4 1.4, 4.2  Herd variance 0.405 0.369 env   
  • 22. 27/08/2022 07:39 Um estudo observacional de coorte sobre a persistência de resíduos de selante interno de tetos no leite após o parto em va… https://www.journalofdairyscience.org/article/S0022-0302(18)30308-4/fulltext#seccestitle180 22/32 A total of 156 cows from 6 participating farms were monitored during this cohort study. Seventy- three cows were not included in the study because producers did not observe and complete the information on the presence of ITS plug and ITS residues in milk. On some farms, when the employee allocated to the project was away, data collection was suspended. Moreover, a significant proportion (45.2%) of these missing data (33 of 73 cows) was registered between April and July 2016 when farmers were busy with field work and compliance with the research protocol was difficult. If the outcomes or exposures studied are strongly influenced by season, then it is possible that our results may apply well to cows calving in the August–March period, but perhaps not as much to cows calving during April–July where most of the missing data were observed. Moreover, because different observers were used to monitor presence of an effective plug and days of residues, some variation in these measures could be expected between observers. Accuracy of these measures related to individual observer was not evaluated in our study. We could expect, however, that the farm random effect would have captured some of these variations (e.g., for farms with just one observer; n = 4). Moreover, the fact that method of residue visualization (i.e., filter-cup versus the floor) was not significantly associated with days of residues seems to suggest a certain homogeneity between observers. Still, possible variations in measurement between observers is one drawback from our study. Persistency of Internal Teat Sealant Plug and NIMI over the Dry Period The prevalence of quarters with an observable ITS plug at calving was comparable to previous observations made by Meaney, 1977. The number of cows and quarters, however, was quite small in that study and there was no mention whether the study was conducted in one or many farms. According to his observations, a plug was observable around 3 d before calving by x-ray in 32/38 (84%) of quarters. In another experiment, they reported a proportion of 93% of quarters (13 out of 14 quarters x-rayed once a week during the dry period) that kept the sealant in place for the complete dry period duration. Note that the remaining quarter kept the sealant for 11 wk out of 14 wk. Moreover, none of those 14 quarters experienced NIMI during the dry period, despite quarters being dipped into a bacteriological culture of Staphylococcus aureus once a week during the dry period. In our study, in 4 out of the 6 studied dairy farms, a proportion of or all cows calved in a maternity pen (vs. in a tie stall). Therefore, cows may have been in contact with calves after calving for some time. We can hypothesize that suckling could have played a role on the probability of observing an ITS plug at first milking. In fact, our producers confirmed that suckling by the calf could occur on some occasions, especially for those cows that calved during the night. Unfortunately, the information on suckling or on calving time were not recorded. However, one of the 2 herds with the lowest proportion of ITS plugs present at calving was a freestall herd where cows calved in a tiestall barn. Considering these findings, factors other than suckling by the calf   
  • 23. 27/08/2022 07:39 Um estudo observacional de coorte sobre a persistência de resíduos de selante interno de tetos no leite após o parto em va… https://www.journalofdairyscience.org/article/S0022-0302(18)30308-4/fulltext#seccestitle180 23/32 needs to be identified. These may include genetic characteristics of cows, the size and conformation of the teat, and so on. The relatively small associations (odds ratio of 1.4 for NIMI and 1.3 for NIMI ) observed between presence or not of an observable ITS plug and odds of NIMI suggest that cows were possibly still protected against NIMI during most of the dry period. Therefore, we can hypothesize that loss of the plug occurred closely around calving because of suckling or another reason (e.g., milk hydrostatic pressure). In our study, we hypothesized that the milk production level at drying-off would possibly affect the persistence of ITS plug, as the hydrostatic pressure due to milk production could possibly lead to the expulsion of the sealant. However, we found no evidence of association between cow-level milk production at drying off and the presence of an ITS plug after calving. This observation was in accordance with Williamson, 2001que relataram que o vazamento de leite não estava associado à expulsão do selante do teto na secagem. Além disso, observamos uma taxa de retenção mais alta nos quartos traseiros, que normalmente produzem mais leite do que nos quartos dianteiros. De fato, o plugue ITS estava presente em 86% dos quartos traseiros e em 80% dos quartos dianteiros. Outra possibilidade para explicar a ausência do tampão ITS na primeira ordenha é a dispersão pós-infusão do produto na cisterna da glândula. Essa possibilidade foi observada porMeaney, 1977eBradley et al., 2010. Tal evento poderia explicar trimestres sem tampão de ITS na primeira ordenha e possivelmente também aumentar a persistência de resíduos de ITS no leite no início da lactação. No entanto, observamos um cenário inverso. Quartos sem plug ITS ao parto apresentaram menor persistência de resíduos observáveis. Assim, nosso estudo sugere que a dispersão pós-infusão, se ocorrer, não aumentaria o número de dias de resíduos após o parto. No estudo atual, a administração de ITS em conjunto com um antimicrobiano IMM resultou em menores taxas de retenção. Se a administração desses antimicrobianos pode dificultar a formação ou retenção do tampão, ou promover a dispersão do produto na glândula, possivelmente vale a pena investigar porque esses produtos são frequentemente usados ​ ​ em conjunto. A mesma questão foi levantada porBradley et al., 2010. Os autores posteriores levantaram a hipótese de que a miscibilidade de um ITS e um antimicrobiano à base de óleo pode modificar a viscosidade do ITS e, consequentemente, afetar a capacidade de formação do tampão. Assim, eles apresentam uma proposta para o uso de um antimicrobiano à base de água quando um antimicrobiano é usado em combinação com um ITS. Também consideramos que a duração do período seco pode influenciar a prevalência de quartos sem rolha ITS ao parto. No entanto, nenhuma associação significativa foi observada entre a duração do período seco e as chances de ter um plug ITS observável na primeira ordenha.Woolford et al., 1998relataram que o material selante ainda estava presente na base do teto em 19 quartos radiografados após 100 dias do período seco. No estudo atual, todas as env   
  • 24. 27/08/2022 07:39 Um estudo observacional de coorte sobre a persistência de resíduos de selante interno de tetos no leite após o parto em va… https://www.journalofdairyscience.org/article/S0022-0302(18)30308-4/fulltext#seccestitle180 24/32 vacas tiveram duração do período seco < 75 dias, portanto, possivelmente, não é longa o suficiente para afetar a retenção de ITS. Persistência de resíduos de ITS no leite após o parto Meaney, 1977relataram a presença de resíduos de ITS no leite após o parto durante os primeiros 5 dias de lactação. NoMeaney, 1977No estudo, foram observados resíduos de ITS com nível <2,5 µg de resíduos/mL de leite composto a 10 DIM. No d 5, nenhum resíduo estava presente em 26/40 (60%) das amostras, e ≤5 µg de resíduos/mL de leite a granel em 13 amostras (32,5%) e 5,1 a 16,7 µg de resíduos/mL em 1 amostra (2,5%). Da mesma forma, em nosso estudo, 75% dos trimestres expulsaram os últimos resíduos de ITS por 5 DIM. Para alguns trimestres, entretanto, foram observados resíduos até 12 DIM. Nossos resultados sobre a persistência de resíduos de ITS também são semelhantes aos deButto et al., 2011. Esses autores relatam que a parte principal do selante é removida na primeira ordenha e que a parte restante é observada no leite durante as ordenhas subsequentes. No entanto, neste estudo posterior, a duração exata da excreção não foi relatada. Esses resultados diferem de outro estudo (Berry e Hillerton, 2002a) que relataram resíduos de STI no leite até 3 semanas em alguns trimestres. No entanto, esses autores observaram que nenhum dos produtores de laticínios envolvidos no estudo relatou que a persistência de resíduos era uma preocupação séria. Although we were able to highlight some statistically significant risk factors explaining persistency of residues following calving, observed differences were often relatively small and, perhaps, not very relevant from a clinical standpoint. For instance, 2 of the risk factors (dry period duration and quarter position) affecting ITS persistency in quarters for which the ITS plug could not be observed at first milking yielded differences in residues excretion <1 d. Parity, however, appeared to affect residue persistency more substantially, with >1 additional day of excretion for quarters of cows ≥4th lactation. Data from this study indicate a higher probability of postinfusion dispersion of the product in the gland cistern for ≥4th lactation. The reasons for this are unclear, but it may be due to the teat conformation in older cows, the higher hydrostatic milk pressure, or other unknown factors. No presente estudo, devido ao tamanho da amostra relativamente grande, as imagens de raios- x que ilustram a localização e a persistência do plug ITS durante o período seco e após o parto não puderam ser coletadas como foi feito em outros estudos (Meaney, 1977;Woolford et al., 1998). Mais estudos serão necessários para confirmar nossos resultados sobre a presença de um tampão ITS observável na primeira ordenha, na excreção de resíduos de ITS durante o início da lactação e no efeito da paridade de vacas na retenção e excreção de resíduos de ITS. Por exemplo, em estudos futuros, exames repetidos de ultra-som durante o período seco e no   
  • 25. 27/08/2022 07:39 Um estudo observacional de coorte sobre a persistência de resíduos de selante interno de tetos no leite após o parto em va… https://www.journalofdairyscience.org/article/S0022-0302(18)30308-4/fulltext#seccestitle180 25/32 início da lactação poderiam ser usados ​ ​ para ajudar a entender a formação, retenção e dinâmica de excreção do ITS durante esses períodos de tempo. CONCLUSÕES Os resultados do nosso estudo revelaram que um tampão ITS estava presente até a primeira ordenha após o parto em 83% dos quartos e os resíduos de ITS puderam ser observados no leite até 12 DIM. Não houve evidência de que quartos sem rolha ITS na primeira ordenha após o parto tenham maior risco de NIMI ou NIMI durante o período seco. AGRADECIMENTOS Esta pesquisa foi apoiada pela Agriculture and Agri-Food Canada e por contribuições adicionais dos Dairy Farmers of Canada, da Canadian Dairy Network e da Canadian Dairy Commission sob a Agri-Science Clusters Initiative, por meio da Canadian Bovine Mastitis and Milk Quality Research Network programa de pesquisa, por Zoetis, e por um dos autores (Dufour) Natural Sciences and Engineering Research Council of Canada (NSERC)-Discovery grant funds (RGPIN/435637-2013). O primeiro autor também foi apoiado pelo NSERC-Collaborative Research and Training Experience Program (CREATE) no programa Milk Quality. De acordo com o acordo de pesquisa, além de fornecer apoio financeiro, os financiadores não têm papel na concepção e condução dos estudos, coleta e análise de dados ou interpretação dos dados. Os pesquisadores mantêm a independência na condução de seus estudos, possuem seus dados e relatam os resultados, independentemente dos resultados. A decisão de publicar os resultados cabe exclusivamente aos pesquisadores. Agradecemos a todos os produtores participantes por sua cooperação, Roxanne Mandeville (Université de Montréal, St-Hyacinthe, Québec, Canadá) por seu apoio como técnica de saúde animal, e Natasha Robinson e Marguerite Cameron (ambas da University of Prince Edward Island, Charlottetown, Prince Edward Island, Canadá) por seu trabalho de laboratório. REFERENCES env Berry E.A. •Hillerton J.E. The effect of an intramammary teat seal on new intramammary infections. J. Dairy Sci. 2002; 85 (12416803): 2512-2520 View in Article  1.   
  • 26. 27/08/2022 07:39 Um estudo observacional de coorte sobre a persistência de resíduos de selante interno de tetos no leite após o parto em va… https://www.journalofdairyscience.org/article/S0022-0302(18)30308-4/fulltext#seccestitle180 26/32 Scopus (87) •PubMed •Abstract •Full Text •Full Text PDF •Google Scholar Berry E.A. •Hillerton J.E. The effect of selective dry cow treatment on new intramammary infections. J. Dairy Sci. 2002; 85 (11860103): 112-121 View in Article  Scopus (135) •PubMed •Abstract •Full Text PDF •Google Scholar 2. Bhutto A.L. •Murray R.D. •Woldehiwet Z. The effect of dry cow therapy and internal teat-sealant on intra-mammary infections during subsequent lactation. Res. Vet. Sci. 2011; 90 (20598329): 316-320 View in Article  Scopus (17) •PubMed •Crossref •Google Scholar 3. Bradley A. Bovine mastitis: An evolving disease. Vet. J. 2002; 164 (12359466): 116-128 View in Article  Scopus (526) •PubMed •Crossref •Google Scholar 4. Bradley A.J. •Breen J.E. •Payne B. •Williams P. •Green M.J. The use of a cephalonium containing dry cow therapy and an internal teat sealant, both alone and in combination. J. Dairy Sci. 2010; 93 (20338434): 1566-1577 View in Article  Scopus (63) •PubMed •Abstract •Full Text •Full Text PDF •Google Scholar 5. Cameron M. •Barkema H.W. •De Buck J. •De Vliegher S. •Chaffer M. • Lewis J. •Keefe G.P. Identification of bovine-associated coagulase-negative staphylococci by matrix- assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry using a direct transfer protocol. J. Dairy Sci. 2017; 100 (28041734): 2137-2147 6.   
  • 27. 27/08/2022 07:39 Um estudo observacional de coorte sobre a persistência de resíduos de selante interno de tetos no leite após o parto em va… https://www.journalofdairyscience.org/article/S0022-0302(18)30308-4/fulltext#seccestitle180 27/32 View in Article  Scopus (57) •PubMed •Abstract •Full Text •Full Text PDF •Google Scholar CBMQRN Administration technique of intramammary treatment in dairy cows [Online]. http://www.medvet.umontreal.ca/rcrmb/dynamiques/PDF_AN/Toolbox/Factsheets/Administra tionTreatmentPro.pdf Date: 2010 Date accessed: December 14, 2017 View in Article  Google Scholar 7. Dingwell R.T. •Kelton D.F. •Leslie K.E. Management of the dry cow in control of peripartum disease and mastitis. Vet. Clin. North Am. Food Anim. Pract. 2003; 19 (12682945): 235-265 View in Article  Scopus (67) •PubMed •Abstract •Full Text •Full Text PDF •Google Scholar 8. Dingwell R.T. •Leslie K.E. •Schukken Y.H. •Sargeant J.M. •Timms L.L. • Duffield T.F. •Keefe G.P. •Kelton D.F. •Lissemore K.D. •Conklin J. Association of cow and quarter-level factors at drying-off with new intramammary infections during the dry period. Prev. Vet. Med. 2004; 63 (15099718): 75-89 View in Article  Scopus (126) •PubMed •Crossref •Google Scholar 9. Godden S. •Rapnicki P. •Stewart S. •Fetrow J. •Johnson A. •Bey R. • Farnsworth R. Effectiveness of an internal teat seal in the prevention of new intramammary infections during the dry and early-lactation periods in dairy cows when used with a dry cow intramammary antibiotic. J. Dairy Sci. 2003; 86 (14740825): 3899-3911 View in Article  Scopus (96) •PubMed •Abstract •Full Text •Full Text PDF •Google Scholar 10.   
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  • 32. 27/08/2022 07:39 Um estudo observacional de coorte sobre a persistência de resíduos de selante interno de tetos no leite após o parto em va… https://www.journalofdairyscience.org/article/S0022-0302(18)30308-4/fulltext#seccestitle180 32/32 Related Articles   Usamos cookies para ajudar a fornecer e aprimorar nosso serviço e personalizar o conteúdo. Para atualizar suas configurações de cookies, visite o Configurações de cookie para este site. Copyright © 2022 Elsevier Inc. exceto determinados conteúdos fornecidos por terceiros. O conteúdo deste site destina-se a profissionais de saúde. Política de Privacidade   Termos e Condições   Acessibilidade   Ajuda e contato Home ARTICLES AND ISSUES Articles In Press Current Issue List of Issues Supplements FOR AUTHORS Instructions to Authors Permissions Researcher Academy Submit Manuscript FOR REVIEWERS Review a Manuscript Scientific Sections in the Journal JOURNAL INFO About the Journal About Open Access Abstracting/Indexi ng Contact Information Content Alerts Editorial Board Journal Editors Display Advertisers Recruitment Advertising Media ADSA ADSA Home Membership Benefits ADSA Meetings S-PAC Collections Editor's Choice Meeting Abstracts JDS Club 100 FOLLOW US Facebook Twitter 