1. Criopreservação de espermatozóides eqüinos
comparando duas curvas de congelamento combinadas
com diluentes comerciais: uma análise laboratorial
Cryopreservation of equine spermatozoa comparing
different freezing rates combined with commercial
extenders: laboratorial analysis
Terraciano et. al; Ciência Rural, 2008

2. Introdução
Animais de alto Transporte de
valor zootécnico sêmen
Preservação e
armazenamento Seguro biológico
de sêmen
Biotécnicas
Reprodutivas

3. Introdução
Curva de
congelamento • Leite x ovo
• Bovinos • Lesões celulares • Amida x glicerol
• Desidratação
• Cristais
Baixos índices
Modificações
de fertilidade
(MOORE et al., 2006) (PALMER 1984, VIDAMENT et al.,
(PARKS & GRAHAM, 1992)
2001, ALVARENGA et al., 2005)

4. Objetivo
Duas curas
Dois diluentes
Estruturais e funcionais

5. Material e Métodos

6. Material e Métodos
Puro Sangue Inglês Mestiço
6 anos de idade 30 anos de idade
- A cada 3 dias
- 10 coletas
- Outubro – Dezembro 2006
1ml congelamento
Gel

7. Material e Métodos
 20 µl
 Motilidade progressiva
 Motilidade total
Contrate de fase
200x

8. Material e Métodos
Integridade física da membrana
 400 µl sêmen
- 37°C
 3 µl PI - 8 minutos
 2 µl CFDA
 Fluorescência
 1000x
 100 SPTZ
 Verde

9. Material e Métodos
Integridade funcional da membrana
 Teste hiposmótico
 100mOsmol kg-1
 400 x
 Enrolamento de cauda

10. Material e Metodos
650 G
10 min.
FR-1®
Botu-Sêmen®
- 0,5 ml
FR-1®
Botu-Sêmen®
A B

11. Material e Métodos
Curva A Curva B
24°C  5°C Palhetas
(0,3°C min-1) horizontalmente
5°C a -15°C Estante 3cm acima
(10°C min-1) do nitrogênio
-15°C até -100°C 20 minutos 
(-25°C min-1) imediatamente
-100°C
-70°C min-1
(30°C min-)
(SPRECKELS, 1994) (KNEIßL, 1993)

12. Material e Métodos
 Descongeladas a 37°C
 Motilidade total
 Motilidade progressiva
 Integridade da membrana plasmática
 Funcionalidade da membrana
plasmática

13. Analise estatística
 Analise de variância
Teste de Turkey 5%
Minitab 14.1

14. Resultados

15. Resultados
Quadro 1. Médias dos parâmetros analisados para o sêmen fresco
Parâmetros Avaliados Médias
Motilidade Progressiva 14,2% 6,9
Motilidade Total 70% 18,2
Integridade física da membrana 81,9% 8,9
Integridade funcional da 71,5% 10,1
membrana

16. Resultados
Figura 1. Valores da média e desvio padrão da motilidade progressiva, motilidade total, integridade e
funcionalidade da membrana espermática do sêmen criopreservado com curva automatizada (A) e curva não-
automatizada (B), e os diluentes Botucrio e FR-5. * e # significam diferença significativa entre os diluentes
(P<0,05); & significa diferença significativa entre as curvas de congelamento (P<0,05).

17. Criopreservação de espermatozóides eqüinos
comparando duas curvas de congelamento combinadas
com diluentes comerciais: uma análise laboratorial
Cryopreservation of equine spermatozoa comparing
different freezing rates combined with commercial
extenders: laboratorial analysis
Terraciano et. al; Ciência Rural, 2008