Transplante fígado - Pós 1. Início

1. Mário Guimarães Pessôa
Hepatite colestática associada ao vírus da hepatite
C pós-transplante hepático: estudo virológico,
histopatológico e imuno-histoquímico
Tese apresentada à Faculdade de Medicina da
Universidade de São Paulo para obtenção do título de
Doutor em Ciências
Área de concentração: Patologia
Orientador: Prof. Dr. Venâncio Avancini Ferreira Alves
SÃO PAULO
2003

2. Aos meus pais,
Laura e Djalma Pessôa,
por toda a vida.

3. AGRADECIMENTOS

4. Gostaria de agradecer a todas as pessoas que direta ou indiretamente contribuíram
para a realização deste trabalho:
Ao meu orientador, Prof. Dr. Venâncio Avancini Ferreira Alves, pelo exemplo de
dedicação à pesquisa, ao trabalho e à família, e por ter depositado em mim total
confiança.
A minha mentora, Profa. Teresa Lynn Wright, por todas as oportunidades a mim
oferecidas nos quatro anos de convívio na Universidade da Califórnia, São
Francisco (UCSF).
Aos Profs. Drs. Norah Terrault, Linda Ferrell, Natalie Bzowej, Marina Berenguer,
Nancy Ascher, pela constante colaboração e ótimos momentos de trabalho conjunto
na UCSF.
Aos companheiros de laboratório Michael Kim e Yume Phung do Veterans Affairs
Medical Center/UCSF e Alda Wakamatsu do Instituto Adolfo Lutz, pela intensa
dedicação.
Aos Pesquisadores Geert Maertens e Bart van der Borght da InnoGenetics, Ghent,
Bélgica.
A Joaquim Guanaes Gomes, pela cuidadosa análise estatística.
A minha família e aos amigos queridos, pelo apoio de sempre.

5. SUMÁRIO

6. Lista de abreviaturas
Resumo
Summary
1 INTRODUÇÃO.................................................................................... 01
1.1 Recorrência da infecção pelo vírus da hepatite C........................ 02
1.1.1 Diagnóstico......................................................................... 03
1.1.2 História natural da infecção pelo VHC pós-transplante...... 04
1.1.3 Hepatite colestática grave................................................... 06
1.1.4 Fatores que influenciam a progressão da doença no
pós-transplante.................................................................... 07
1.1.4.1 Viremia pré e pós-transplante.................................. 08
1.1.4.2 Genótipo do VHC..................................................... 08
1.1.4.3 Concordância do sistema HLA................................ 09
1.1.4.4 Rejeição celular...................................................... 10
1.1.4.5 Imunossupressão..................................................... 10
1.1.4.6 Precocidade da recorrência e grau de lesão
histológica.............................................................. 10
1.1.4.7 Complexidade e diversidade do vírus da hepatite
C – quasispécies....................................................... 11
1.1.4.8 Detecção imuno-histoquímica de antígenos do
VHC no tecido hepático......................................... 13
2 OBJETIVOS........................................................................................ 15
3 POPULAÇÃO E MÉTODOS............................................................... 18
3.1 População.................................................................................... 19
3.2 Métodos........................................................................................ 20
3.2.1 Extração do HCV-RNA por PCR......................................... 21
3.2.2 Quantificação do HCV-RNA................................................ 22
3.2.3 Genotipagem do VHC......................................................... 23

7. 3.2.4 Ensaio de mobilidade de heteroduplex (Heteroduplex
Mobility Assay - HMA)....................................................... 23
3.2.5 Seqüenciamento da região E2 hipervariável-1 (E2
HVR1)............................................................................... 25
3.2.6 Análise filogenética............................................................. 25
3.2.7 Definições........................................................................... 25
3.2.8 Análise dos marcadores histológicos.................................. 27
3.2.8.1 Alteração estrutural.................................................. 28
3.2.8.2 Atividade necroinflamatória..................................... 29
3.2.9 Análise imuno-histoquímica................................................ 33
3.2.10 Análise estatística............................................................. 35
4 RESULTADOS................................................................................... 36
4.1 Características clínicas................................................................ 37
4.2 Características bioquímicas......................................................... 38
4.3 Características virológicas........................................................... 39
4.3.1 Genótipo do VHC................................................................ 40
4.3.2 HCV-RNA quantitativo........................................................ 40
4.3.3 Quasispécies do VHC......................................................... 41
4.3.3.1 Correlação entre a razão de mobilidade do
heteroduplex (HMR) e seqüenciamento de
nucleotídeos na avaliação de quasispécies do
VHC...................................................................... 41
4.3.3.2 Análise de heterogeneidade das quasispécies do
VHC em cada grupo por ensaio de mobilidade de
heteroduplex (HMA)............................................... 43
4.3.3.3 Comparação entre as populações de pacientes
transplantados imunossuprimidos e controles
imunocompetentes................................................. 47
4.3.3.4 Comparação entre os pacientes com hepatite
recorrente colestática grave e hepatite recorrente
leve pelo VHC pós-transplante............................... 51

8. 4.4 Características histopatológicas.................................................. 56
4.5 Análise imuno-histoquímica......................................................... 63
4.5.1 Imuno-expressão do antígeno core no tecido hepático de
pacientes com hepatite recorrente colestática grave e
hepatite recorrente leve pelo VHC pós-transplante............... 63
4.6 Correlação entre a imuno-expressão do antígeno core do VHC
e a quantificação sérica do HCV-RNA........................................
66
4.7 Correlação entre imuno-expressão do antígeno core do VHC e
a complexidade de quasispécies................................................ 67
5 DISCUSSÃO....................................................................................... 69
6 CONCLUSÕES................................................................................... 85
7 REFERÊNCIAS.................................................................................. 89
APÊNDICE

9. LISTA DE ABREVIATURAS

10. Anti-HBc Anticorpo anticore do vírus da hepatite B
Anti-HIV Anticorpo antivírus da imunodeficiência humana
AgHBs Antígeno de superfície do vírus da hepatite B
DNA Ácido desoxirribonucléico
Eq/mL Equivalentes por mililitro
GGT Gama-glutamil transferase
HCV-RNA Ácido ribonucléico do vírus da hepatite C
HIV Vírus da imunodeficiência humana
HLA Antígeno de histocompatibilidade
HMA Ensaio de mobilidade de “heteroduplex”
HMR Razão de mobilidade de “heteroduplex”
HVR1 Região hipervariável 1
LSN Limite superior da normalidade
Mg/dL Miligrama por decilitro
OKT3 Anticorpo antilinfocitário
PCR Reação em cadeia de polimerase
RNA Ácido ribonucléico
VHB Vírus da hepatite B
VHC Vírus da hepatite C
VHD Vírus da hepatite Delta
UI/L Unidades internacionais por litro