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- 1. VIROLOGIA VIROLOGIA Os Vírus Os Vírus O virion O virion Morfologias virais Morfologias virais Composição do virion Composição do virion Estrutura viral Estrutura viral Patogênese viral Patogênese viral Métodos de estudos dos vírus Métodos de estudos dos vírus
- 2. Os Vírus Os Vírus São seres infecciosos São seres infecciosos Microrganismos??? Microrganismos??? Não apresentam estrutura celular Não apresentam estrutura celular
- 3. Tamanho Tamanho Os menores vírus medem Os menores vírus medem aproximadamente 20nm aproximadamente 20nm Os maiores medem Os maiores medem aproximadamente 300nm aproximadamente 300nm Há exceções: vírus filamentosos Há exceções: vírus filamentosos
- 6. Estrutura viral Estrutura viral Capsídeo Capsídeo Capsômeros Capsômeros Protômeros Protômeros Sub-unidades proteicas Sub-unidades proteicas Envelope Envelope Espículas / fibras Espículas / fibras Core Core Nucleo-capsídeo Nucleo-capsídeo Obs. Vírus envelopados podem conter capsídeo Obs. Vírus envelopados podem conter capsídeo icosaédrico ou helicoidal icosaédrico ou helicoidal
- 10. Partículas subvirais Partículas subvirais Viróides – RNA livre Viróides – RNA livre Virusóides – RNA dependente de Virusóides – RNA dependente de vírus helper p/ capsídeo vírus helper p/ capsídeo Prions – apenas proteínas Prions – apenas proteínas
- 11. Replicação viral Replicação viral O ciclo: O ciclo: – Adsorção Adsorção – Penetração Penetração – Desnudamento/ decapsidação Desnudamento/ decapsidação – Síntese de proteínas precoces Síntese de proteínas precoces – Replicação de ácido nucléico Replicação de ácido nucléico – Síntese de proteínas tardias Síntese de proteínas tardias – Maturação Maturação – Montagem Montagem – Liberação Liberação
- 12. Adsorção Adsorção Contato vírus-célula Contato vírus-célula A colisão é casual A colisão é casual 01 em cada 10mil adsorve 01 em cada 10mil adsorve Superfície viral e celular: [-] Superfície viral e celular: [-] Adição de cátions favorece Adição de cátions favorece Dependente de receptores Dependente de receptores
- 13. Receptores X anti-receptores Receptores X anti-receptores ANTI-RECEPTORES VIRAIS ANTI-RECEPTORES VIRAIS Vírus Influenza: hemaglutinina Vírus Influenza: hemaglutinina HIV: GP120 HIV: GP120 Bacteriófagos: fibras Bacteriófagos: fibras
- 15. RECEPTORES CELULARES RECEPTORES CELULARES Proteínas, polissacarídeos e lipídeos Proteínas, polissacarídeos e lipídeos Raiva: receptor de acetilcolina Raiva: receptor de acetilcolina Epstein-Barr: receptor de Epstein-Barr: receptor de complemento complemento HIV: CD4 HIV: CD4 Receptores bacterianos Receptores bacterianos Vírus de plantas Vírus de plantas
- 16. PENETRAÇÃO PENETRAÇÃO Injeção de ácido nucléico Injeção de ácido nucléico Endocitose Endocitose Fusão de envelope Fusão de envelope translocação translocação
- 17. Injeção Injeção
- 18. Endocitose + fusão de envelope Endocitose + fusão de envelope
- 20. Síntese de proteínas precoces Síntese de proteínas precoces Replicação de ácidos nucléicos Replicação de ácidos nucléicos Síntese de proteínas tardias Síntese de proteínas tardias Classificação de Baltimore Classificação de Baltimore – Grupo I: DNA fd (ds) Grupo I: DNA fd (ds) – Grupo II: DNA fs (ss) Grupo II: DNA fs (ss) – Grupo III: RNA fd Grupo III: RNA fd – Grupo IV: RNA fs polaridade(+) Grupo IV: RNA fs polaridade(+) – Grupo V: RNA fs (-) Grupo V: RNA fs (-) – Grupo VI: RNA fs (+) + TR Grupo VI: RNA fs (+) + TR – Grupo VII: DNA fd + TR Grupo VII: DNA fd + TR
- 22. Maturação Maturação É o acabamento final nas estruturas É o acabamento final nas estruturas sintetizadas sintetizadas Digestão enzimática para possibilitar Digestão enzimática para possibilitar a montagem a montagem
- 23. Montagem Montagem Fenômeno espontâneo Fenômeno espontâneo Localizãção celular: Localizãção celular: – Núcleo para vírus de DNA Núcleo para vírus de DNA – Citoplasma para vírus de RNA Citoplasma para vírus de RNA Envelopamento Envelopamento – Retículo, golgi, núcleo ou citoplasma Retículo, golgi, núcleo ou citoplasma
- 24. Liberação Liberação Lise celular – Lise celular – necrose necrose Brotamento Brotamento
- 25. MÉTODOS DE ESTUDOS DOS MÉTODOS DE ESTUDOS DOS VÍRUS VÍRUS
- 26. CARACTERIZAÇÃO CARACTERIZAÇÃO ESTRUTURAL E MORFOLÓGICA ESTRUTURAL E MORFOLÓGICA MICROSCOPIA ELETRÔNICA MICROSCOPIA ELETRÔNICA – TRANSMISSÃO TRANSMISSÃO – VARREDURA VARREDURA – CRIOFRATURA CRIOFRATURA TÉCNICAS ESPECIAIS TÉCNICAS ESPECIAIS – MICROSCOPIA DE FORÇA ATÔMICA MICROSCOPIA DE FORÇA ATÔMICA – MICROSCOPIA DE FORÇA POSITRÔNICA MICROSCOPIA DE FORÇA POSITRÔNICA – CRISTALOGRAFIA DE RAIOS-X CRISTALOGRAFIA DE RAIOS-X
- 27. Vírus com Simetria Helicoidal Vírus com Simetria Helicoidal
- 28. Vírus com Simetria Icosaédrica, Vírus com Simetria Icosaédrica, cúbica ou poliédrica cúbica ou poliédrica Adenovírus DNAds – 90nm Adenovírus DNAds – 90nm
- 30. Herpesvírus Herpesvírus DNAds – 100nm DNAds – 100nm
- 31. Vírus da Hepatite B Vírus da Hepatite B Hepadnavidae – DNA + RT – 42nm Hepadnavidae – DNA + RT – 42nm
- 32. Poxviridae Poxviridae Vírus do Molusco contagioso Vírus do Molusco contagioso Partículas com 350 X 270nm Partículas com 350 X 270nm DNA ds DNA ds
- 33. Parvovírus Parvovírus DNAss – 25nm DNAss – 25nm
- 34. Vírus da Influenza Vírus da Influenza ( (Ortomyxoviridae) Ortomyxoviridae) RNAss – 100nm RNAss – 100nm
- 35. Rotavírus Rotavírus RNAds – 100nm RNAds – 100nm
- 38. Partículas dos Norovírus Partículas dos Norovírus Morfologia esférica típica, Morfologia esférica típica, apresentando a estrela de David apresentando a estrela de David
- 39. Partículas dos Astrovírus Partículas dos Astrovírus Morfologia esférica típica, Morfologia esférica típica, apresentando estrela de 5 pontas apresentando estrela de 5 pontas
- 40. Partículas dos Poliovírus Partículas dos Poliovírus Morfologia esférica Morfologia esférica
- 42. VÍRUS DA RAIVA ( VÍRUS DA RAIVA (Rhabdoviridae) Rhabdoviridae) Partículas com 180 X 80 nm Partículas com 180 X 80 nm Corpúsculos de Negri em neurônios piramidais do Corpúsculos de Negri em neurônios piramidais do hipocampo – patognomônico de raiva hipocampo – patognomônico de raiva
- 43. DETECÇÃO DE ANTÍGENOS VIRAIS OU DETECÇÃO DE ANTÍGENOS VIRAIS OU ANTICORPOS ESPECÍFICOS ANTICORPOS ESPECÍFICOS REAÇÃO Ag-Ac REAÇÃO Ag-Ac – Imunodifusão Imunodifusão – Hemaglutinação Hemaglutinação – Aglutinação em lâmina Aglutinação em lâmina – Reação de fixação de complemento Reação de fixação de complemento – Neutralização viral Neutralização viral – Imunofluorescência Imunofluorescência – Imunoenzimáticas Imunoenzimáticas Elisa Elisa Western blot Western blot – Separação de células ativada por fluorescência Separação de células ativada por fluorescência - FACS - FACS
- 44. IMUNOFLUORESCÊNCIA IMUNOFLUORESCÊNCIA ANTICORPOS MARCADOS COM ANTICORPOS MARCADOS COM FLUORÓFORO – FITC, RODAMINA FLUORÓFORO – FITC, RODAMINA DIRETA DIRETA INDIRETA INDIRETA SANDWICH SANDWICH MAb MAb
- 48. PRECIPITAÇÃO E AGLUTINAÇÃO PRECIPITAÇÃO E AGLUTINAÇÃO
- 51. IMUNODIFUSÃO RADIAL DUPLA IMUNODIFUSÃO RADIAL DUPLA OU OUCHTERLONY OU OUCHTERLONY
- 52. AGLUTINAÇÃO EM LÂMINA AGLUTINAÇÃO EM LÂMINA
- 54. CULTURA CELULAR CULTURA CELULAR CULTURAS PRIMÁRIAS OU LINHAGENS CULTURAS PRIMÁRIAS OU LINHAGENS ESTABELECIDAS ESTABELECIDAS
- 56. DETECÇÃO DO ÁCIDO NUCLÉICO DETECÇÃO DO ÁCIDO NUCLÉICO VIRAL VIRAL DIRETAMENTE DAS AMOSTRAS DIRETAMENTE DAS AMOSTRAS APÓS AMPLIFICAÇÃO APÓS AMPLIFICAÇÃO ELETROFORESE EM GEL DE ELETROFORESE EM GEL DE POLIACRILAMIDA POLIACRILAMIDA ELETROFORESE EM GEL DE AGAROSE ELETROFORESE EM GEL DE AGAROSE SOUTHERN BLOT SOUTHERN BLOT NORTHERN BLOT NORTHERN BLOT
- 60. GEL DE AGAROSE GEL DE AGAROSE BANDAS CORADAS COM BROMETO DE ETÍDIO - BANDAS CORADAS COM BROMETO DE ETÍDIO - UV UV
- 61. EGPA – ELETROFORESE EM EGPA – ELETROFORESE EM GEL DE POLIACRILAMIDA GEL DE POLIACRILAMIDA Bandas coradas com Nitrato de prata Bandas coradas com Nitrato de prata
- 63. Western Blot for HIV
- 64. AMPLIFICAÇÃO AMPLIFICAÇÃO REAÇÃO DE POLIMERASE EM CADEIA REAÇÃO DE POLIMERASE EM CADEIA
- 65. PRODUTO DO PCR PRODUTO DO PCR