1. Avaliação de resíduos de glyphosate e AMPA,
produtividade, teor de óleo, conteúdo de proteína
Fevereiro 2011
produtividade, teor de óleo, conteúdo de proteína
bruta e aminoácidos na soja (Glycine max (L.) Merrill)
resistente ao glyphosate
Aluno: Guilherme Pires d’Ávila de Almeida
Orientador: Prof. Dr. Valdemar Luiz Tornisielo

2. Soja - importância
• 23,0 milhões ha
• 67 milhões t grãos
Introdução
2
CONAB (2010)
Total - 47,6 milhões ha
16,2 milhões ha – Soja RR
(SRG)
CONAB (2010)
James (2009)
Área plantada – Grãos (%)
2009/2010
Lei 11.105 (2005)
Aumento da área – Soja RR

3. Introdução
SOJA- MANEJO COM HERBICIDAS
MAPA – Soja
• 126 ingredientes ativos
• 54 % herbicidas
3
• 54 % herbicidas
Glyphosate
• principal herbicida (área e volume)
• 45 registros-formulações diferentes
• em 2005, apenas 1 formulação p/ soja transgênica
• Pós-emergente
• Sistêmico
BRASIL (2005)

4. Introdução
Carne
Diversos
Consumo
4
Grãos
Óleo
Ração
SEGURANÇA
ALIMENTAR

5. Revisão de Literatura 5
Análise de Resíduos
Substância ou mistura de substâncias remanescentes ou existentes em
alimentos ou no meio ambiente
• inclusive metabólitos, produtos de reação e impurezas
• toxicológica e ambientalmente importantes ANVISA (2006)
IDA (ANVISA - RDC nº 347 16/12/2002)
Ingestão diária de um agente químico, que durante
toda a vida, parece não apresentar risco apreciável,
com base nos dados conhecidos até o momento.
LMR
Limite máximo de resíduos: ppm; mg kg-1

6. 0,2 mg kg-1
(antes SRG)
10,0 mg kg-1
(após soja SRG)LMR
POLÊMICA
6
Revisão de Literatura
LMR para a cultura da soja (ANVISA, 2006)
• aplicação em pós-emergência
• plantas infestantes;
• cultura da soja geneticamente modificada
que expressa resistência ao glifosato
Pré-emergência
(cultura)
Pós-emergência
(cultura)

7. Glyphosate – herbicida pós-emergente
7
ingrediente ativo x adjuvantes
(exemplo adjuvante = surfactante)
surfactante + ingrediente ativo = formulação comercial
Sistêmico
Durigan (1993)
Surfactantes distintos
Revisão de Literatura
Aumento de
resíduos??
Surfactantes distintos
Corte
transversal
da folha
www.monsanto.co.uk (2005)

8. 47,6 milhões ha
Soja 23,0 milhões ha
16,2 milhões ha SRG
Área plantada – Grãos (%)
2009/2010
Justificativa 8
LMR POLÊMICA
Glyphosate na soja
0,2 mg kg-1 10,0 mg kg-1
X
16,2 milhões ha SRG
pode aumentar os resíduos
Formulação
Soja RR 21,4 milhões ha
Roundup Ready -Exclusivo
Glifosato – 45 formulações
Produto mais tóxico
Classe II
UFPR (2006) 0,2 a 8,8 mg kg-1

9. Histórico do aluno Guilherme – Pós Graduação 9
Fev 2005
Início
Mestrado
Ago 2006
Passagem
Doutorado
Direto
Jan 2008
Qualificação
Doutorado
Direto
Jan 2011
Depósito
Tese
Dez 2005
Início
Execução
Projeto
Mestrado
Nov 2006
Início
Execução
Projeto
Doutorado
Direto

10. Determinar: quantidade residual de glyphosate
grãos - cultivar de SRG
• formulações distintas
Objetivos/Material e Métodos - Mestrado
10
Aplicação
1,2 kg ha-1
Resíduos
Glif.
Rup
Orig.
Rup
Ready CTRL
[14C]glyphosate (0,50%)
1,2 kg ha-1
V4
25 dae 112 dae
E1/E2
inteiramente
casualizado

11. Material e métodos - Análises
Separação p/ Quantificação da radioatividade
11
Folhas
GrãosCascas das
Folhas Folhas
(sem aplicação) GrãosRaízesCaule Cascas das
Vagens
Folhas
(com aplicação)
Oxidador Biológico Espectrometria de
Cintilação Líquida

12. Resultados e Discussão - Resíduos
12
5,0
10,0
Resíduosde14
C-glyphosate(%)
10,0
C-glyphosate(%)
GrãosE1
E2
Barras verticais mostram o erro padrão da média
0,0
Tratamento
Resíduosde
Roundup Original Roundup ReadyGlyphosate
0,0
5,0
Tratamento
Resíduosde14
C-glyphosate(%)
Roundup Original Roundup ReadyGlyphosate

13. Resultados e Discussão - Resíduos
13
15,0
20,0
25,0
30,0
35,0
14
C-glyphosate(%)
30,0
35,0
C-glyphosate(%)
FolhasGrãos Cascas
das Vagens
Σ
Raízes Caule
E1
E2
Barras verticais mostram o erro padrão da média
0,0
5,0
10,0
15,0
Tratamento
Resíduosde14
Roundup Original Roundup ReadyGlyphosate
0,0
5,0
10,0
15,0
20,0
25,0
Tratamento
Resíduosde14
C-glyphosate(%)
Roundup Original Roundup ReadyGlyphosate

14. 14
Resultados e Discussão
• efeito diluição
produção grãos resíduo
• influência da T(°C) e UR% (E1/E2)
• tamanho da gota e volume de calda
• concentração do produto
GLY – 7 dat
Fitotoxicidade
Rup Original – 7 dat
Rup Ready• tamanho da gota e volume de calda
• concentração do produto
• efeito da formulação
• recuperação em E2 = 44% > E1
• E2 – tratamento c/ maior recuperação=26%
• Pline et al. (2001) – 30% de recuperação (V4)
• algodão resistente a glyphosate em casa de vegetação
Rup
Ready
7 dat

15. 15
Conclusões e Justificativa Doutorado
condições de campo
com produtividade
próxima à média
nacional
LMR
sem diferença significativa
entre Roundup Ready e
Roundup Original
Máximo de 1,95 mg kg-1
Rup
Ready
Tendência de
aumento de resíduos
Pesquisar situações
limite e com
formulações distintas
Rup
Readyreferência: bula
nacional
AMPA
glyphosate
cromatografia líquida
de alta performance
(CLAE)
quantificação
Máximo de 1,95 mg kg

16. Determinar:
• quantidade residual: glyphosate e AMPA
Objetivos gerais - Doutorado
16
• grãos de soja-cultivar resistente ao glyphosate
• após a aplicação de formulações distintas
• em situações e momentos diferentes
• aplicação única e seqüencial
AMPA

17. Resultados: mg kg-1 glyphosate e AMPA
Objetivos específicos - Doutorado
17
Rodeo
Rup
Orig.
Rup
Ready CTRL
Rup
WG
0,96+0,72kg ha-1 e.a. glyphosate 1,2
20 30 20+35 30+45dae
0,96+0,72kg ha e.a. glyphosate 1,2
20 dae 30 dae 20+35 dae 30+45 dae
mg kg-1
X1 X2E1 20 dae – 0 dat
E1 30 dae – 0 dat

18. • produtividade (kg ha-1) e massa 100 grãos (g)
• óleo, proteína bruta e aminoácidos (g 100 g-1)
Objetivos gerais - Doutorado 18
Tan et al. (2006)

19. Material e métodos - Tratamentos
19
Rodeo
Rup
Orig.
Tipo *
ingrediente
ativo (i.a.)
conc.
eq.
ácido
%
e.a.
Surfactante
CS Sal de isopropilamina de
glifosato
648
g.L-1
480
g.L-1
48,0
m/v
---
CS Sal de isopropilamina de
glifosato
480
g L-1
360
g L-1
36,0
m/v
POEAOrig.
Rup
Ready
Rup
WG
* Formulação – CS = Concentrado Solúvel; GRDA = Grânulos Dispersíveis em Água
CS
glifosato g L-1
g L-1
m/v
POEA
GRDA Sal de amônio de
glifosato
792,5
g kg-1
720
g kg-1
72,0
m/m
CS
Sal de isopropilamina de
glifosato
648
g.L-1
480
g.L-1
48,0
m/v
X
POEA

20. Material e métodos
20
Fazenda Areão – Piracicaba-SP

21. U20 U30 S20 S30 S20 U20 S30 U30
S20 S30 U20 U30 S30 U30 S20 U20
Material e métodos - Delineamento
21
RD RO RW CTRL RR RO RD RW
CTRL RW RR RR RD CTRL CTRL RO
RO RD CTRL RD RO RW RO RD
RW RR RD RW CTRL RR RW RR
RR CTRL RO RO RW RD RR CTRL
RO RD CTRL RO RD RR RR CTRL
RW CTRL RW RW RR RO CTRL RD
RR RR RD CTRL RW CTRL RO RW
Parcelas subdivididas – Blocos casualizados
1 3
S20 S30 U20 U30 S30 U30 S20 U20
RD RO RO RR RO RW RD RO
CTRL RW RR RD CTRL RD RW RR
U20
U30
S20
S30
Rodeo
Rup
Orig.
Rup
Ready
CTRL
Rup
WG
Tratamentos
Parcelas
(subparcelas)
4 repetições
4 blocos
2 4
Réplica – E1/E2

22. Material e métodos – Delineamento
22
6
80 subparcelasRD RO RW CTRL RR RO RD RW
CTRL RW RR RR RD CTRL CTRL RO
RO RD CTRL RD RO RW RO RD
RW RR RD RW CTRL RR RW RR
RR CTRL RO RO RW RD RR CTRL
RO RD CTRL RO RD RR RR CTRL
RW CTRL RW RW RR RO CTRL RD
RR RR RD CTRL RW CTRL RO RW
RD RO RO RR RO RW RD RO
CTRL RW RR RD CTRL RD RW RR
Área tratada 4 x 2 m
4
2
6
3 Área total 6 x 3 m
2 m de bordadura em todos os lados
coleta 3 x 1,2 m
3 1,2
Total Experimento
(com bordadura)
0,20 ha

23. Material e métodos
Pulverizador costal
pressurizado com CO2
23
Ponta Turbo Teejet
11001
100 L ha-1
aplicação proteção - deriva

24. Material e métodos
24
coleta 3 x 1,2 m
3 1,2
MSOY 8000 RR
3 grupos de 5 plantas
amostradas por subparcela

25. Material e métodos - Análises
25
Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE)
CLAE Agilent
Série 1100 Reação
Pós-coluna
(RPC)
Esquema Geral
Glyphosate -Necessidade de derivatização
Pickering
Pinnacle PCX

26. Material e métodos - Análises
Extração – HCl 0,1M
26
Coluna aço inox
CLAE
Padrões analíticos
glyphosate
AMPA
Coluna aço inox
cátion K+
150 x 4 mm
Partículas 5 m
Adaptado de Cowell et al. (1986)
NaClO - Oxidante
Derivatização
pós-coluna
Pickering
Detector fluorescência
330 nm excitação
464 nm emissão

27. Material e métodos - Resultados
CLAE (Glyphosate e AMPA)
27
Resíduo mg kg-1 C x V=
W
x f
W
C = Concentração da solução extraída ( g mL-1 ; mg mL-1)
V = volume da solução extraída (mL)
W = peso da amostra extraída (g; kg)
f = fator de diluição
30 g
1
4 mL
50 L

28. Material e métodos - Análises
Óleo, Proteína Bruta e aminoácidos (g 100 g-1)
28
Óleo por NIR - Feed and Food 1255 Infratec Proteína Bruta - Método de Dumas
LECO FP-528
Aminoácidos- NIR
Protocolo e equipamento
CEAN ADISSEO Santa Maria-RS

29. Material e métodos - Análises
Produtividade – kg ha-1 e massa de 100 grãos (g)
29
3 1,2
Colheitadora Automotriz
3 linhas
colheita 3 x 1,2 m
Colheita
Estádio R8

30. Resultados e Discussão 30
Produtividade, massa 100 grãos, Óleo, Proteína Bruta e aminoácidos
Não houve diferença estatística entre os tratamentos
Massa de 100 grãos - E1 14,93 g (média)
E2 16,52 g (média)
Produtividade – E1 2.636 kg ha-1 (média)
E2 1.713 kg ha-1 (média)
média nacional - 2.798 kg ha-1 (CONAB, 2010)
E2 16,52 g (média)
Óleo – E1 22,76 g 100g-1 (média)
E2 22,61 g 100g-1 (média)
Proteína – E1 44,67 g 100g-1 (média)
Bruta E2 45,65 g 100g-1 (média)
Aminoácidos (médias em g 100g-1 )

31. Resultados e Discussão 31
E1mg kg-1
U20 U30 S20 S30
Glyphosate
0,00
XXXXX XXXXX XXXXX XXXXX
0,01
0,00
0,00
0,00
0,01
0,03
0,01
0,01
0,01
0,00
0,00
0,00
0,00
0,01
0,00
0,20 b
U20 U30 S20 S30
E2Glyphosate mg kg-1
XXXXX XXXXX XXXXX XXXXX
0,28 a
0,01 c
0,00 c
0,01
0,00
0,16 ab
0,18 a
0,00
0,01
0,00
0,00
0,06 bc
0,02 c
0,01
0,00
0,20 b
Rodeo
Rup
Orig.
Rup
Ready CTRL
Rup
WG
Duke et al. (2003) – 0,18 a 0,23 mg kg-1 - doses sequenciais (similar a S20 e U20)
1,2 kg ha-1 e.a. glyphosate a 3 semanas após o plantio e
0,84 kg ha-1 e.a. glyphosate a 6 semanas após o plantio
Arregui et al. (2004) – 1,6 a 1,8 mg kg-1 - doses sequenciais
0,96 e 1,68 kg ha-1 e.a. glyphosate aos 83 dap

32. Resultados e Discussão 32
U20 U30 S20 S30
E2AMPA mg kg-1
XXXXX XXXXX XXXXX XXXXX
0,02 b
0,18 a
0,18
0,19
0,16 b
0,23 ab
0,24
0,24
0,12 a
0,20 a
0,29 a
0,18 b0,19 a
0,02 b
0,02 b
0,02 b
U20 U30 S20 S30
mg kg-1
AMPA E1
XXXXX XXXXX XXXXX XXXXX
0,17
0,13
0,15
0,21 a
0,19 a
0,03 b 0,17 ab
0,17 a
0,02 b
0,15 a
0,17 a
0,11 ab
0,05 b
0,15 ab
0,16
0,03 b
Duke et al. (2003) - 0,60 a 0,86 mg kg-1 - doses sequenciais (similar a S20)
1,2 kg ha-1 e.a. glyphosate a 3 semanas após o plantio e
0,84 kg ha-1 e.a. glyphosate a 6 semanas após o plantio
Arregui et al. (2004) – 0,40 a 0,90 mg kg-1 - doses sequenciais
0,96 e 1,68 kg ha-1 e.a. glyphosate aos 83 dap
Rodeo
Rup
Orig.
Rup
Ready CTRL
Rup
WG

33. Resultados e Discussão 33
Reddy et al. (2008)
E1 produção grãos resíduo
Absorção após degradação de
glyphosate nas folhas
Rup
Orig.
Rup
Ready
E2
U20
S20
AMPA
Duke et al. (2003)
Deriva?
áreas vizinhas?!
CTRL
Reddy et al. (2008)
AMPA
Duke et al. (2003) em SRG
Cessna et al. (2002) em ervilha
Vereecken (2008)
5 a 18 mg kg-1
a 70 e 90 cm
AMPA
AMPA no solo?

34. 34
Conclusões
H0: µRodeo = µRoundup Original = µRoundup WG
= µRoundup Ready = µControle
Produtividade, massa de 100 grãos,
teor de óleo, proteína bruta e aminoácidos
Grãos
Maiores valores de glyphosate
0,28; 0,20; 0,18; 0,16 mg kg-1
produção abaixo da média nacional
formulações com adjuvantes
Testes com
aplicação no solo em
parcelas adjacentes
Rup
Orig.
Rup
Ready
E2
U20
S20
houve metabolismo de
glyphosate em AMPA para
as demais situações
AMPA
CTRL
parcelas adjacentes
0,28 mg kg-1
valor mais
alto é
menor que
a LMR
10,0 mg kg-1

35. Obrigado!
“Nós acreditamos que fazemos experiências,
mas são as experiências que nos fazem”
Immanuel Kant
Obrigado!