Apresentação formal para qualificação de mestrado na área de biológicas, no assunto de imunoterapia anti-angiogênica para tumores.

1. Avaliação do uso combinado de
imunização ativa com mAb 10.D7
e passiva com mAb 3F12E7
em modelo de melanoma murino B16F10
Mestranda: Bárbara Hamaguchi
Orientadora: Jane Zveiter de Moraes

2. Tumores sólidos
DEPENDENTES
de fatores
ANGIOGÊNICOS

3. Angiogênese
CRISTOFANILLI, CHARNSANGAVEJ e
HORTOBAGYI; Nat. Rev. Drug Discov.1(6), 2002.

4. VEGF-A
Vascular Endothelial Growth Factor A
Bevacizumab (Avastin®)
Efeitos adversos
mAb anti-id 10.D7

5. Antígeno
(VEGF)
Bevacizumab
(Id)
10.D7
(anti-Id)
Resposta
anti-anti-Id
Teoria da Rede Idiotípica
id

6. Imunização com
mAb 10.D7
aumenta
sobrevida livre
sem tumor
e retarda
crescimento
tumoral de
melanoma B16F10
(SANCHES et al; Cancer Sci 107 (2016):551–555)

7. FGF2
Fibroblast Growing Factor 2
Correlação com
neovascularização tumoral
mAb 3F12E7
Todas etapas da angiogênese

8. Tratamento com mAb 3F12E7 retarda crescimento tumoral e reduz a
densidade microvascular de melanoma B16F10
(AGUIAR et al, Cancer Letters 2016, 371(2):151-60)

9. 3F12E7
10.D7
(VEGF)
(FGF)

10. Objetivo
Verificar se a atividade conjunta de
mAb anti-id10.D7 e mAb 3F12E7
levam a efeitos sinérgicos significativos
em inibir o crescimento tumoral

11. -17 -10
Céls. B16F10
s.c.
Coleta de soro
EutanásiaTratamento MAb 3F12
i.p.
0 5 7 9 11 13
1ª 2ª 3ª 4ª
Coleta de soro Coleta de soro Coleta de soro
Mensuração do volume tumoral
2ª imunização MAb 10.D7
c.p.
1ª imunização MAb 10.D7
s.c.
Dias pós-inóculo
Desenho experimental

12. Materiais e métodos
Cultivo celular
Purificação de anticorpos
SDS-PAGE
ELISA
In vivo

13. Pureza dos anticorpos
1 2 3 4 5 6 7 8
150 kDa
1 – 10.D7
2 – 3F12E7
3 – 1F5H2
4 – CTRL
5 – 10.D7
6 – 3F12E7
7 – 1F5H2
8 – CTRL
Forma não-reduzida
Forma reduzida
50 kDa
25 kDa

14. Atividade dos anticorpos

15. Experimento In vivo
mAb Irrelevante (s.c)
mAb Irrelevante
(i.p)
10.D7-KLH (s.c)
mAb Irrelevante
(i.p)
mAb Irrelevante (s.c)
3F12E7 (i.p)
3F12E7 (i.p)
10.D7-KLH (s.c)
10.D7–KLH (s.c)
Imunização ativa
3F12E7(s.c)
Imunização passiva
Ativa
Passiva
Ativa
Passiva
Ativa
Passiva
Ativa
Passiva
CEUA Nº 9203230715/2016

16. v v
In v iv o - C re s c im e n to tu m o ra l
D ia s p ó s -in ó c u lo B 1 6 F 1 0
Volume(mm³)
1 0 1 1 1 2 1 3
0
2 5 0
5 0 0
7 5 0
1 0 0 0
1 2 5 0
1 5 0 0
1 7 5 0
2 0 0 0
2 2 5 0
2 5 0 0
Resultados
1
F
5
H
2
-K
L
H
1
F
5
H
2
+
3
F
1
2
E
7
1
0
D
7
-K
L
H
+
1
F
5
H
2
1
0
D
7
-K
L
H
+
3
F
1
2
E
7
0 .0
0 .5
1 .0
1 .5
2 .0
2 .5
In v iv o - D ia 1 3
G ru p o s
Volumetumor(cm³)

17. 1ª Imunização
2ª Imunização
Inóculo (B16F10)
EutanásiaG R U P O S
D.O.(λ=490nm)
1
F
5
H
2
-K
L
H
+
1
F
5
H
2
1
0
D
7
-K
L
H
+
3
F
1
2
E
7
1
0
D
7
-K
L
H
+
1
F
5
H
2
0 .0 0
0 .0 5
0 .1 0
0 .1 5
0 .2 0
0 .2 5 D ia 0 7 .1 1 (S a
V o l tu m o ral (cm
3
)
D.O490nm
0 .5 1 .0 1 .5
0 .0 0
0 .0 5
0 .1 0
0 .1 5
Resultados

18. Próximos passos
Avaliar necrose
Avaliar microdensidade vascular
(Hematoxilina-eosina)
(Imunofluorescência CD34)
Repetir o experimento com n maior
Análise histopatológica dos cortes de tumores
Avaliação do microambiente tumoral

19. Agradecimentos
Profª Drª Jane Zveiter de Moraes
Tábata de Almeida da Silva
Rodrigo Barbosa de Aguiar
Renata Yoshiko Yamada
Letícia Teixeira Martins de Sousa
Marina Leonardo