Terapia fotodinâmica

1. Efeitos da Terapia
Fotodinâmica associada a
fotossensibilizador
nanoestruturado em
Cultura 2D e 3D
Proponente: Aveline Ventura
Orientador: Leandro José Raniero, prof Dr.
Coorientadora: Sônia Khouri Sibelino, prof Dra.

2. Objetivos
Otimização dos parâmetros para
fabricação de moldes de agarose
em diferentes dimensões, para
otimização do crescimento de
esferoides, cultura 3D;
01
Otimização dos parâmetros de
cultivo para Cultura 2D;
02
Avaliação dos efeitos da TFD nas
culturas 2D e 3D, utilizando a
linhagem celular MDA-MB468;
03
05
06
Detectar viabilidade celular e a morte
celular reprodutiva decorrente da TFD em
cultura 2D, por meio dos ensaios de
atividade mitocondrial, Azul de Tripan e
clonogênico;
Determinar regiões de necrose após a
TFD, em cultura 3D, por meio da análise
histológica dos esferoides e comparação
com dados de tecido in vivo existentes na
literatura.

3. Revisão de Literatura
Cancer de mama
Esquema representando o tumor do câncer de mama
Fonte: Adaptado de Uol - Mundo Educação
Segundo as definições relatadas pela Organização
Mundial de Saúde (OMS), o câncer é denominado por um
grupo de doenças que tem em comum a proliferação
celular desordenada, carregando algum tipo de mutação
gênica, sendo classificado como um tumor maligno;
Grande parte dos tumores malignos de mama é
classificada como carcinoma ductal infiltrante. Este tipo
de câncer de mama se desenvolve nos ductos (canais) de
leite. É importante ressaltar que o câncer de mama não é
uma doença exclusiva de mulheres, indivíduos do sexo
masculino também podem apresentar a enfermidade,
mesmo que raro.

4. Revisão de Literatura
Terapia Fotodinâmica
Fonte: Adaptado de, EESC – USP (Foto de Rodrigo Gounella)
A TFD é definida como uma reação fotoquímica que tem
como objetivo causar destruição de um determinado
tecido, sem causar prejuízos as demais regiões;
Esta técnica consiste em duas etapas: Utiliza-se uma
droga sensibilizante juntamente, em seguida é realizada a
irradiação do local com um comprimento de onda
adequado.
Para ser empregado na TFD, um fotossensibilizador
precisa apresentar características especificas.
Esquema representando a Terapia Fotodinâmica

5. Revisão de Literatura
Fotossensibilizadores Nanoestruturados
Fonte: National Center for Biotechnology Information (2022).
a Clorina Ce6 se destaca pela banda de absorção entre
660-670nm, sendo considerada um fotossensibilizador
de segunda geração e frequentemente utilizada nas
práticas clínicas, por apresentar vantagens como alta
sensitividade e rápida excreção do organismo;
Atualmente as nanoparticulas de ouro (AuNPs) vem
sendo estudada como carreadoras de fármacos e
fotossensibilizantes;
Neste âmbito, as AuNPs serão revestidas com Ce6
formando o FS nanoestruturado, aumentando a ação
deste FS, a novidade deste estudo será o uso deste FS
nanoestruturado em cultura 3D em comparação a 2D.
Estrutura química da clorina Ce6

6. Materiais e Métodos
Cultura celular 2D
Cultura celular em monocamada (2D)
Tripsina EDTA 0,25%
Placa de 96 poços

7. Materiais e Métodos
Cultura celular 3D
Gel de agarose 2%
Fabricação do molde
Semeadura das células
Crescimento do esferoide
21 dias de incubação

8. Materiais e Métodos
Análise histológica do microambiente celular tridimensional
Avaliação da viabilidade celular
Ensaio Clonogênico

9. Resultados
Resultados preliminares Nesta figura podemos observar o processo de fabricação dos
esferoides em que os itens representam:
a) Moldes recém fabricados;
b) Molde durante o equilíbrio;
c) Moldes equilibrados sem a adição de células;
d) Esferoide no dia 0 em aumento de 4x;
e) Esferoide no dia 0 em aumento de 10x;
f) Esferoide no dia 0 em aumento de 20x;
g) Esferoide no dia 5 em aumento de 4x;
h) Esferoide no dia 5 em aumento de 10x;
i) Esferoide no dia 5 em aumento de 20x.
Fabricação dos esferoides
Fonte: A autora

10. Nesta sequência de imagens é possível observar macroscopicamente o processo de
crescimento do esferoide em dois tipos de molde. Os itens:
a) Consiste em esferoides semeados em um molde de 256 poços.
b) Consiste em esferoides semeados em um molde de 81 poços;
Utilizando o programa ImageJ foi possível determinar os seguintes parâmetros em
relação ao processo de desenvolvimento no molde de 81 poços:
Resultados
Resultados preliminares
Area: 0.132 mm;
Perímetro: 1.284 mm;

11. Resultados
Resultados preliminares
Nesta sequência de imagens é possível observar a formação completa do esferoide, em que os itens:
a) Consiste em um esferoide semeado em um molde de 81 poços;
b) Consiste em um esferoide semeado em um molde de 256 poços, o mesmo foi corado através técnica de imunofluorescência, em
seguida teve a estrutura analisada utilizando o microscópio óptico invertido e confocal;
c) Consiste em uma imagem ampliada do item b), no qual é possível observar o núcleo em tom azul (marcador Dapi) e o
citoesqueleto em tom arroxeado (marcador de Rodamina e Faloidina).