Teste de tetrazólio em sementes.

1. UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO SEMI-ÁRIDO
CENTRO DE CIÊNCIAS AGRÁRIAS
PROGRAMA DE PÓS GRADUAÇÃO EM FITOTECNIA
DISCIPLINA: ANÁLISE DE SEMENTES
TESTE DE TETRAZÓLIO EM SEMENTES
Sara Monaliza Costa Carvalho

2. SEMENTES
GENÉTICA
FISIOLÓGICA
FÍSICA
SANITÁRIA

3. Potencial fisiológico

4. • 1922 e 1925 - Primeiras tentativas com sucesso na
avaliação da viabilidade das sementes com bio-corantes
– telúrio e selênio
• Georg Lakon - Procurou por um sal similar – 2,3,5-trifenil
cloreto de tetrazólio. Desenvolveu metodologia para
várias espécies de milho e cereais.
• Década de 60 - Progressos, aplicação prática –
Delouche e colaboradores lançaram o Primeiro Manual
sobre o Teste para um grande número de espécies –
Universidade do Mississipi.
• 1970: AOSA publica metodologia para soja, algodão,
milho e trigo.
• 1985: ISTA publica Manual para mais de 650 espécies.
Histórico

5. No Brasil

9. Executado em todos os Laboratórios de Análise
de Sementes brasileiros que trabalham com a
espécie.
O Brasil é o líder mundial de utilização do teste
de tetrazólio a nível de rotina.
Cerca de 300.000 análises anualmente, apenas
com a soja.

10. TESTE DE
TETRAZÓLIO
COLORAÇÃO
DOS TECIDOS
VIVOS

11. Promissor
Diagnóstico
da causa da
perda de
viabilidade
Rápido

12. Método indireto
de avaliação
Suplementa
testes
de germinação
(FRANÇA-NETO et al., 1998;
FRANÇA-NETO, 1999)

13. Introdução
TESTE DE
GERMINAÇÃO
(Longo) TOMADA DE
DECISÕES

14. 250 dias 180 dias
Eugenia stipitata (araçá-boi)
Minquartia guianensis (acariquara)
Astrocaryum tucuma (tucumã) Annona crassiflora (araticum)
120 dias 120 dias
Longo período para germinar

15. MORFOLOGIA

16. EMBRIÃO
COTILÉDONES
PRIMÓRDIOS
FOLIARES
TEGUMENTO
CILINDRO CENTRAL
CÓRTEX

17. (MARCOS FILHO, 2005; ROVERSI; THEISEN, 2005)
2, 3, 5
trifenil
cloreto de
tetrazólio
PRINCÍPIO DO TESTE DE TETRAZÓLIO
𝑯+
Enzimas
desidrogenases

18. Vermelho
brilhante
ou rosa
Vermelho-
carmim
forte
Sem
coloração
(BARROS et al., 2010)
𝑯+
𝑯+
𝑯+
𝑯+
𝑯+
𝑯+
𝑯+
𝑯+
𝑯+
𝑯+ 𝑯+
𝑯+
𝑯+
𝑯+
𝑯+
𝑯+
𝑯+

19. PRÉ-UMEDECIMENTO PREPARO
Tempo Temperatura
Concentração
(BHERING et al., 2005; COSTA et al., 2010)
Fatores que interferem no teste de tetrazólio:

20. PREPARO
Com
tegumento
Sem
tegumento
Corte
longitudinal

21. Teste de Tetrazólio

22. Viável ou inviável

23. A diferenciação de cores dos tecidos de acordo com
os critérios estabelecidos para o teste de tetrazólio:
• vermelho brilhante ou rosa
• vermelho-carmim forte
• Sem coloração

24. VIÁVEIS
Sementes com coloração rosa e tecidos com aspecto normal
e firme; cotilédones com regiões necrosadas, mas não
afetando a região de ligação com o eixo embrionário; eixo
embrionário com coloração vermelha intensa, porém, sem
atingir o cilindro central.
(Moore, 1972; Delouche et al., 1976; Grabe, 1976)
INVIÁVEIS
Sementes com mais de 50% dos cotilédones descoloridos,
com coloração vermelha intensa ou necrosados; eixo
embrionário com regiões descoloridas, vermelha intensa e/ou
necrosada, atingindo o cilindro central.

25. As menores concentrações são mais
indicadas por apresentarem menor custo
com o sal e por possibilitarem melhor
visualização dos distúrbios de coloração
e identificação de diferentes tipos de
injúrias (França Neto et al., 1998).

26. Soja
(FRANÇA NETO; KRZYZANOWSKI e COSTA , 1998)
• Pré-umedecimento em papel por 16h a 25 °C/ por 6h a 41° C
• Solução de 0,075% de 35 a 40 °C por 150 a 180 min.

27. Dano por umidade

28. Dano mecânico

29. Dano por percevejo

30. Girassol
Classe 1: alto
vigor
Classe 2: médio
vigor
Classe 3: baixo
vigor
Classe 4: não
viáveis
Classe 5: mortas
(SILVA et al., 2013)
Imersão em água por 16 horas
Solução de tetrazólio a 0,1% durante 3 horas a 30 °C

31. Melão
(LIMA et al., 2007)
• Pré-condicionamento em rolo de papel por 18 horas, sob temperatura ambiente.
• Corte longitudinal
• Solução de tetrazólio a 0,05% por 24 horas a 30 ºC

32. Melancia
(NERY, CARVALHO e OlIVEIRA, 2007)
• Solução de tetrazólio a 0,075% por 4h a 30 °C

33. Algodão
Sementes de algodoeiro submetidas ao teste de
tetrazólio avaliadas quanto à coloração: a) sem cor, b)
início de coloração, c) fraco d) adequado e e) excesso.
(CERVI & MENDONÇA, 2009)
Solução de tetrazólio a 0,075% , a 40ºC por 150 minutos.

34. Mamona
(GASPAR-OLIVEIRA; MARTINS e
NAKAGAWA, 2010)
• Pré-umedecimento em papel por 18 horas a 30 ºC
• Remoção do tegumento seguido de corte longitudinal e medianamente
• Solução de tetrazólio a 0,2% a 35 ºC por 120 minutos.

35. Vermelho
brilhante ou
rosa
Vermelho
carmim
forte
Sem
coloração
Catanduva
DIFERENCIAÇÃO DAS CORES NOS TECIDOS
(AZEREDO et al., 2011)

36. Pau-brasil
VERMELHO BRILHANTE OU ROSA

37. Fundamentação Teórica
VERMELHO CARMIM
FORTE

38. SEM
COLORAÇÃO
Fundamentação Teórica

39. Viáveis
Sementes com coloração rosa claro brilhante, tecidos com aspecto
normal e firme
Eixo embrionário com
coloração vermelha
intensa, porém, sem
atingir o cilindro
central.
Menos de 50% dos cotilédones
descoloridos, cotilédones com
regiões necrosadas não
afetando a região de ligação
com o eixo embrionário
Jucá

40. Inviáveis
Sementes com mais de 50% dos cotilédones descoloridos, com
coloração vermelha intensa ou necrosados; eixo embrionário com
regiões descoloridas, vermelha intensa e/ou necrosada, atingindo o
cilindro central .

41. AZERÊDO, G. A.; PAULA, R. C.; VALERI, S. V. Viabilidade de sementes de
Piptadenia moniliformis Benth. pelo teste de tetrazólio. Revista Brasileira de
Sementes, v. 33, n. 1 p. 061-068, 2011.
BANZATTO, D. A.; KRONKA, S. N. Experimentação agrícola. 4. ed. Jaboticabal:
FUNEP, 2006. 237p.
BARROS, D. I.; DIAS, D .C. F. S.; BHERING, M. M.; DIAS, L. A. S.; ARAÚJO, E. F.
Uso do teste de tetrazólio para avaliação da qualidade fisiológica de sementes de
abobrinha. Revista Brasileira de Sementes, v. 27, n. 2, p. 165-171, 2005
BRASIL. Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento. Regras para Análise
de Sementes. Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento. Secretaria de
Defesa Agropecuária. Brasília, DF: MAPA/ACS, 2009. 395p.
DIAS, M. C. L. L.; SILVA, W. R. Determinação da viabilidade de sementes de café
através do teste de tetrazólio. Pesquisa Agropecuária Brasileira, v. 21, n. 11, p.
1139-1145, 1986.
FERREIRA, D. F. Sisvar: A computer statistical analysis system. Ciência e
Agrotecnologia, v. 35, n. 6, p. 1039-1042, 2011.
Referências Bibliográficas

42. GRABE, D. F. Manual do teste de tetrazólio. Brasília: AGIPLAN, 1976. 85 p.
LAZAROTTO, M.; PIVETA, G.; MUNIZ, M. F. B.; REINIGER, L. R. S. Adequação
do teste de tetrazólio para avaliação da qualidade de sementes de Ceiba
speciosa. Semina: Ciências Agrárias, v. 32, n. 4, p. 1243-1250, 2011.
NASCIMENTO, W. M. O.; CARVALHO, N. M. Determinação da viabilidade de
sementes de jenipapo (Genipa americana L.) através do teste de tetrazólio.
Revista Brasileira de Sementes, v. 20, n. 2, p. 231-235, 1998.
OLIVEIRA, L. M.; CARVALHO, M. L. M.; DAVIDE, A. C. Teste de tetrazólio para
avaliação da qualidade de sementes de Peltophorum dubium (Sprengel) Taubert –
Leguminosae Caesalpinioideae. Cerne, v. 11, n. 2, p. 159-166, 2005a.
WETZEL, M. M. V. S.; CÍCERO, S. M.; FERREIRA, B. C. S. Aplicação do teste de
tetrazólio em sementes de seringueira. Revista Brasileira de Sementes, v. 14, n.
1, p. 83-88, 1992.
ZONTA, J. B.; SOUZA, L. T.; DIAS, D. C. F. S.; ALVARENGA, E. M. Comparação de
metodologias do teste de tetrazólio para sementes de cafeeiro. Idesia, v. 27, n. 2,
p. 17-24, 2009.
Referências Bibliográficas

43. Provérbios 3:5-6