O documento discute a clonagem vegetal e animal. A clonagem vegetal refere-se à produção de indivíduos idênticos a partir de células ou segmentos de vegetais. Na clonagem animal, há duas técnicas: transferência nuclear e divisão embrionária. Ambas visam produzir clones idênticos, mas com limitações e riscos à saúde.

1. UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DE PERNAMBUCO
DEPARTAMENTO DE ZOOTECNIA
Profa. Andreia Fernandes de Souza

2. A clonagem vegetal refere-se à produção de
indivíduos idênticos a partir de células ou segmentos
de vegetais. A palavra clone deriva etimologicamente
do grego klón, que significa ‘broto’, o que pressupõe,
portanto, a existência de um indivíduo gerador e a
ocorrência de reprodução assexuada

3. Rápida de multiplicar uma determinada planta, ou genótipo, que
apresente características agronômicas desejáveis.
EX: Elevada produtividade,
Elevada qualidade de grãos ou frutos,
Tolerância a pragas ou doenças.

5. Rapidez na produção de um grande número de mudas.
Exemplo:
- Uma planta de bananeira podem ser obtidas através da
micropropagação aproximadamente 100 mudas, no prazo de 8 meses.
-Campo são obtidas até 12 mudas em um período similar.
-Orquídeas, leva-se cerca de dois anos para a obtenção de uma boa
muda ----- Centenas de muda no mesmo período.

6. 1 Passo : Planta matriz
Doadora de Explantes - Escolha
OBS:Os cuidados com a planta matriz devem assegurar o seu bom
estado fisiológico (nutricional e hídrico) e fitossanitário. Nessas
condições as plantas, em geral, fornecem melhores explantes.
O estágio de desenvolvimento da planta - utilizar explantes
coletados de regiões meristemáticas juvenis.
A sanidade da planta matriz é um importante fator no que tange à
facilidade de descontaminação do explante no processo de
isolamento

8. 2 PASSO: Seleção e coleta dos explantes
Qualquer tecido é capaz de expressar a totipotencia
Totipotencia - Capacidade de formação de uma planta inteira, a partir de
uma única célula
Selecione:
Explantes de tecidos jovens com tamanhos que podem variar de 0,2 a
20mm ou mais.
O tamanho do explante determina suas chances de sobrevivência e
desenvolvimento.
A assepsia durante a coleta é um ponto de grande importância, devendo-se
usar instrumentos limpos ou mesmo esterilizados.
O explante, quando coletado de uma planta distante do laboratório, deverá
ser acondicionado em recipiente limpo e mantido ao abrigo da luz e
umedecido, para evitar seu ressecamento.

11. 3 PASSO:Desinfestação
Pré-tratamentos aplicados na planta matriz, principalmente para
combater microorganismos.
Substâncias utilizadas : Etanol, o hipoclorito de sódio e o de cálcio, o
cloreto de mercúrio, ácido clorídrico, peróxido de hidrogênio, entre
outros.
Concentração dos agentes desinfetantes e o tempo de exposição pode
variar, de acordo com o objetivo do trabalho, o tamanho e natureza do
explante.

12. Extração do explante -Feita em câmara de fluxo estéril, com
flambagem de todos os instrumentos utilizados.
Câmara deve ser limpa com etanol e esterilizada com lâmpada
germicida por um mínimo de 20 minutos.
A manipulação do explante deve ser rápida e precisa para evitar sua
desidratação.
Uso de lupas - os meristemas
Explantes diminutos podem ser úteis, além das pinças e bisturis,
agulhas, seringas hipodérmicas ou alfinetes, que sirvam como
microbisturis.
4 PASSO: Isolamento de Explantes

13. 5 PASSO: Meios de cultura
Inoculados em tubos de ensaio ou frascos contendo meio nutritivo, o
meio de cultura.
Não existe um meio padrão - Meio MS.
Abranger todos os minerais essenciais à nutrição vegetal - fonte de
carbono -um carboidrato -Algumas vitaminas e aminoácidos
Reguladores de crescimento, principalmente auxinas e citocininas
agentes gelificantes como a ágar (polissacarídeo produzido por algas
marinhas), gomas de gelan, amido, e outros.
Os cultivos em meio líquido devem ser mantidos sob agitação para
assegurar a aeração dos explantes
Suporte de algodão ou sobre pontes de papel, evitando que fiquem
submersos.

14. 6 PASSO: Condições de Incubação
Refere-se as condições ambientais em que serão mantidos os explantes
após sua inoculação no meio nutritivo.
A temperatura nas salas de incubação ou crescimento - 25 2oC.
Luminosidade podem variar desde o escuro total - fotoperíodo de 12 a
16 horas.

16. Na clonagem animal pode-se optar por dois processos:
1. Transferência Nuclear: Ocorre através da fusão (por meio de descargas
eléctricas) do núcleo de uma célula somática da matriz e de um óvulo não
fecundado e sem núcleo. Neste processo pode ser gerado um número sem
limite de clones da matriz.

17. 2. Divisão Embrionária: Ocorre a normal fecundação do óvulo através de
células sexuais, depois em laboratório é elaborada a divisão (entre 8 e 16
células) da célula embrionária em fase inicial de multiplicação, seguido da
sua implantação no útero.
Na clonagem por divisão embrionária só podem ser reproduzidos um
número limitado de clones e a matriz é gerada ao mesmo tempo. Este
processo é semelhante à reprodução de gémeos idênticos.

18. Em ambos os processos o novo embrião desenvolve-se inicialmente em
laboratório, e quando atinge o estádio blastocisto (composto entre 100
e 200 células) é transferido para o útero da «hospedeira» onde
permanecerá até ao final da gestação.
Células Somáticas : São as células que constituem os orgãos,
ossos e pele.

21. Técnica de baixa eficiência.
Vários fetos morrem durante a gestação ou logo após o
nascimento.
Grande número de anomalias
Envelhecimento Precoce
Os clones seriam maiores do que o normal, denominado de
síndrome do filhote grande (large offspring syndrome – LOS)
Lesões hepáticas, tumores, baixa imunidade.

22. Utilização da técnica de clonagem para obtenção de células tronco a fim
de restautar a função de um órgãos ou tecido.
A clonagem "terapêutica" teria a vantagem de não oferecer riscos de
rejeição se o doador fosse a própria pessoa.
Ex.: reconstituir a medula em alguém que se tornou paraplégico após um
acidente, ou substituir o tecido cardíaco em uma pessoa que sofreu um
infarto.
Diminuição ou fim do tráfico clandestido de órgãos
Ajudar casais inférteis que não podem ter filhos, mesmo após anos de
tratamento de infertilidade.
Melhoramento animal, resgate de material genético, maximização do
potencial genético de uma raça.

23. TRANSFERÊNCIA NUCLEAR DE CÉLULAS
SOMÁTICAS