O documento descreve um teste enzimático colorimétrico para determinação do colesterol total no soro ou plasma. O método utiliza reagentes líquidos pronto para uso que contêm enzimas que reagem com o colesterol na amostra, gerando uma cor proporcional à quantidade de colesterol presente. O documento fornece detalhes sobre o princípio, reagentes, procedimento, cálculos, controle de qualidade e interpretação dos resultados do teste.

1. COLESTEROL
1. FINALIDADE Constituintes
Teste Enzimático Colorimétrico para a determinação do colesterol total no Constituinte Concentração
soro ou plasma usando reagente líquido pronto para uso. 4-Aminofenazona 0,25 mmol/L
Fenol 25 mmol/L
2. INTRODUÇÃO Colesterol Oxidase (CO) >100 U/L
O Colesterol é um esteróide sintetizado a partir da acetil-CoA e atua como Colesterol Esterase (CE) >150 U/L
Peroxidase (POD) >5000 U/L
intermediário metabólico para outros esteróides, ácidos biliares e vitamina D.
O colesterol é transportado por três lipoproteínas, Lipoproteína de alta
densidade (HDL-Colesterol), Lipoproteína de baixa densidade (LDL -
Colesterol) e Lipoproteína de muito baixa densidade (VLDL-Colesterol).
- Padrão de Colesterol: Solução padrão contendo 200 mg/dL de colesterol
3. IMPORTÂNCIA CLÍNICA
em etilenoglicol monometil-éter e ativadores .
A determinação do colesterol total faz parte do per fil lipídico do sangue, ao
lado das determinações de triglicérides, lipoproteínas e colesterol ligado às
c- Armazenamento e estabilidade
lipoproteínas de densidade muito baixa (VLDL), densidade baixa (LDL) e alta
No laboratório, devem ser mantidos em geladeira (2-8 oC) condição na qual
densidade (HDL). Atualmente a determinação isolada do colesterol total
se mantém estáveis até a data de vencimento expressa em rótulo desde que
possui pouca utilidade clínica, uma vez que, no diagnóstico das doenças
isentos de contaminação química ou microbiana. O Reagente de Trabalho
coronarianas e cardiocirculatórias, o perfil lipídico completo estabelece as
mantém-se estável por até a data indicada em rótulo, sob refrigeração (2-
condições de risco do paciente. Portanto, a determinação isolada do
8oC) desde que isento de contaminação química e microbiana.
colesterol total pode ser de interesse no diagnóstico e controle de outras
doenças que não as cardiocirculatórias, tais como as patologias ligadas a
d- Precauções e cuidados especiais
tireóide, xantomatoses e etc.
- Procurar tirar a alíquota de trabalho sem o uso de pipetas, de forma a
manter a integridade do reagente e evitar variação de temperatura;
4. AMOSTRA
- Os reagentes não devem ser congelados bem como expostos à luz direta.
a- Preparo do paciente
Quando utilizado em equipamentos de automação, a transferência do
Recomenda-se um jejum prévio de 12h .
reagente para os recipientes do equipamento deve ser feita cuidadosamente
de forma a evitar possíveis contaminações que venham a interferir em sua
b- Tipos de amostra
performance;
Não se registram interferências em amostras com até 200 mg/dL de
- O reativo Colesterol líquido pode desenvolver uma coloração ligeiramente
hemoglobina e até 20 mg/dL de bilirrubinas. Em amostras ictéricas ou com
rósea, que não interfere em sua performance desde que sua absorbância a
hemólise tolerável, recomenda-se fazer o branco de amostra.
500 nm frente a água não ultrapasse 0,300 ;
- Crescimento bacteriano neste reativo inviabiliza sua utilização;
- Soro: aconselha-se o uso de soro recém-cole tado, não hemolisado e,
- Os reagentes destinam-se ao uso in vitro, devendo-se evitar seu contato
separado o mais rapidamente possível após sua coleta.
com a pele, olhos e mucosas.
- Plasma: usar plasma recém-coletado com heparina ou EDTA , pois
plasmas fluoretados e oxalatados induzem a valores artificialmente baixos e
6. MATERAIS E EQUIPAMENTOS NECESSÁRIOS (porém não fornecidos)
separado o mais rápidamente possível após sua coleta.
- Espectrofotômetro , fotocolorímetro ou equipamento automático;
- Banho - maria;
c- Armazenamento e estabilidade
- Cronômetro;
O colesterol presente na amostra de soro mantém-se estável por 5 dias à
- Pipetas graduadas;
temperatura ambiente, até 2 semanas em geladeira (2-8 oC) ou até 6 meses
- Micropipetador.
congelado (abaixo de 0 oC).
7. PROCEDIMENTO TÉCNICO
d- Critérios de rejeição
(para equipamentos manuais e semi-automáticos)
Rejeitar as amostras com hemoglobina superior a 200 mg/dL, bilirrubinas
- Deixar os reagentes e amostras adquirirem a temperatura ambiente;
acima de 20 mg/dL ou que apresentem sinais de contaminação bacteriana.
- Ajustar o comprimento de onda do equipamento para 500 nm (filtro verde
500-520 nm);
e- Precauções e cuidados especiais
- Identificar 3 tubos como B (branco), P (padrão) e T (teste) e proceder como
Todas as amostras devem ser manipuladas com extrema cautela, pois
indicado abaixo:
podem veicular diversas doenças infecto-contagiosas (hepatite, SIDA etc.).
Seu descarte deve ser feito preferencialmente após sua autoclavação Procedimento técnico
devendo-se evitar sua eliminação diretamente no meio ambiente. Igual Branco Amostra Padrão
cuidado se recomenda no descarte de outros materiais como ponteiras Amostra
-
-
0,01 mL
-
plásticas, agulhas e seringas.
5. INFORMAÇÕES GERAIS SOBRE O PRODUTO
Padrão
Reag. Trabalho 1,0 mL
-
1,0 mL
0,01 mL
1,0 mL
A- Princípio Misturar suavemente e incubar 5 min a 37 oC
O método enzimático da LABORCLIN para a determinação do colesterol, Ler a absorbância dos tubos de amostra e padrão, acertanto o zero com
utiliza o procedimento descrito por Allain7:: o Branco e depois efetuar os cálculos necessários descritos a seguir.
Ésteres Colesterol CE Colesterol + Ácidos Graxos A cor desenvolvida é estável por 60 minutos.
CO 8. CÁLCULOS
Colesterol + O2 Colest-4-en-3-ona + H2O2 Para se determinar a concentração de colesterol total na amostra
analisada, usar a seguinte fórmula:
2H2O2 + 4-Aminofenazona + Fenol POD quinoneimina + 4H2O
Absorbância do teste
Colesterol Total em mg/dL = X 200
Absorbância do padrão
A quantidade de cromogênio formada é diretamente proporcional à
quantidade de colesterol total presente na amostra.
Usando-se fator de calibração:
200
b- Reagentes
Fator =
- Colesterol Bioliquid: reagente pronto para uso contendo as seguintes Absorbância do padrão
concentrações mínimas de reativos.
Colesterol Total em mg/dL = Absorbância do Teste x Fator

2. 9. RESULTADOS resposta do produto, que tenham ocorrido comprovadamente por falha da
- Unidade utilizada: mg/dL Laborclin serão resolvidos sem ônus ao cliente, conforme o disposto em lei.
- Valores de referência
- Desejável até 200 mg/dL 14. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Liebermann, C., Ber, Deutsch Chem, 18, 1803, 1885.
- Interpretação 2. Burchard, H., Chem, Zentralb, 61, 21 ,1890.
Entre 200 e 239 mg/dL consideram-se os valores como “borderline” e acima 3. Zlatkis, A., Zak, B. and Boyle, A. N., J. Lab. Clin. Med., 41, 486, 1953.
de 240 mg/dL como valores elevados (risco).Apesar do diagnóstico efetivo do 4. Flegg, H. M. Ann. Clin. biochem. 10, 79, 1973.
risco de doenças caridiocirculatórias e coronarianas envolver o doseamento 5. Richmond, W., Scand J. Clin. Lab. Invest., 29, Suppl. 26, abstr. 3,25
do colesterol ligado à HDL e LDL, uma tabela extraída de Jacobs e cols.26 1972.
expressa os grupos etários de risco: 6. Richmond, W., Clin. Chem., 19,1350 ,1973.
7. Allain, C.C., Poon, L. S., Chan, C. S. G., Richmond, W., and Fu, P C., Clin.
.
Fatores de risco Chem., 20, 470 ,1974.
Idade Risco Moderado Risco Alto 8. Tarbutton, P N. and Gunter, C. R., Clin. Chem., 20, 724 ,1974.
.
20-29 > 200 mg/dL > 220 mg/dL 9. Burstein, M., and Scholnick, H. R., “Adv. Lipid Res.” 11:67 ,1973.
30-39 > 220 mg/dL > 240 mg/dL 10. Castelli, W. P et al: “Circulation”, Supplement, 11:51 and 52, 1975.
.,
> 40 > 240 mg/dL > 260 mg/dL 11. Castelli, W.P and Levitas I.M.: “Current Prescribing”, 6:39,1977.
.,
12. Gordon, T., et al: “Am. J. Med.”, 62:707, 1977.
10. LIMITAÇÕES DO MÉTODO 13. Quality Control Data Files - Laborclin Produtos para Laboratórios Ltda.
- Limite de diluição 14. Lopes-Virella, M.F est al: “Clin. Chem.”, 23:2 ,1977.
.,
A presente metodologia apresenta linearidade até se atingir uma 15. Bulletin, Serum Cholesterol Levels of Adults, Nati Center for Health
concentração de 750 mg/dL de colesterol na amostra analisada. Acima Statistics, Series II, Nº 22, p. 1, March, 1967 (Wash., D.C.).
deste limite, a amostra deve ser diluída 1/3 em solução fisiológica (NaCl 16. Roy A. V.: Personal Comunication ,1984.
0,85%) e novamente analisada , devendo o resultado obtido ser multiplicado 17. Wright, I. S.: “JAMA” 236:261, 1976.
pelo fator de diluição (3). 18. Keys, A. et al, Clin Chem. 1, 24 ,1955.
19. Stulb, S., et al, Am. J. Clin. Nutr., 16, 238 ,1965.
- Interferentes 20. Kabara, J., at al, Anal. Chem., 33, 305 ,1961.
Numerosas drogas medicamentosas podem eventualmente interferir nos 21. Young, D. S. Effects of Preanalytical Variables on Clinical Laboratory
níveis do colesterol sérico, bem como fatores tais como dieta (aumentos Tests. 2nd edition AACC Press, 1997.
entre 25-50%) , stress, exercícios físicos ou ainda variações sazonais. 22. Young, D. S. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. 4th edition AACC
Recomenda-se a leitura dos textos de Tietz e Young para maiores Press, 1995.
informações. 23. Tietz, N. W. Clinical Guide to Laboratory Tests. 3rd edition. Ed. Saunders,
1995.
11. CONTROLE DA QUALIDADE 24. National Cholesterol Education Program: Report of the expert panel on
- Materiais necessários blood cholesterol levels in children and adolescents. Pediatrics, 89: 529-
Amostras de controle originárias de pool de soros preparados pelo próprio 584, 1992.
laboratório e/ou controles de origem comercial, mapas e gráficos de controle. 25. The Expert Panel: Report of the National Cholesterol Education Program
Expert Panel on detection , evaluation and treatment of high blood
- Periodicidade cholesterol in adults. Arch. Int. Med., 148: 36-39, 1988.
Ao iniciar o trabalho com um novo lote de reagentes recomenda-se avaliar os 26. Jacobs, D.S. et al. Laboratory test handbook. 4 th ed.; Lexi Comp Inc;
mesmos quanto a precisão e exatidão. Durante a execução da rotina, Cleveland, p. 111 , 1996.
recomenda-se avaliar uma amostra de controle em paralelo com cada
bateria de testes. 15. INFORMAÇÕES COMPLEMENTARES
Os protocolos de programação para equipamentos automáticos podem ser
- Interpretação e avaliação requisitados junto ao SAC.
Como o objetivo do controle de qualidade é garantir que os resultados
liberados sejam compatíveis com a realidade do paciente, o laboratório deve 16. REGISTRO NO MINISTÉRIO DA SAÚDE: 100.970.10110
definir quais são os parâmetros de controle adotados bem como as medidas
para possíveis ações corretivas. 17. APRESENTAÇÃO
Kit contendo 2 frascos de 100 mL de reagente de trabalho pronto para uso e
12. ESTATÍSTICAS DO MÉTODO um frasco de padrão 200 mg/dL.
- Precisão foi estabelecida através do doseamento de amostra clínica e
soro controle em quintuplicata durante 5 dias, obtendo-se os seguintes
resultados:
Média 367 mg/dL (amostra clínica) e 128 mg/dL (controle) com C.V. 2,5 %
e 1% respectivamente interensaio e 3,5 e 2,9% respectivamente
intraensaio, limite de confiança 95%.
- Exatidão foi determinada pela análise de regressão linear de 66 amostras
de soro com faixa de variação entre 125 e 550 m g/dL contra um método
proveniente de outro fabricante, obtendo-se um coeficiente de correlação
0,991 e a seguinte fórmula:
Colesterol Total Bio Diagnóstica = 1,04 x Valor do outro método - 9,3
13. GARANTIA DA QUALIDADE
A Laborclin obedece o disposto na Lei 8.078/90 - Código de Defesa do
Consumidor. Para que o produto apresente seu melhor desempenho, é
necessário :
- que o usuário conheça e siga rigorosamente o presente procedimento
técnico;
- que os materiais estejam sendo armazenados em condições adequadas;
- que os equipamentos e demais acessórios necessários estejam em boas
condições de uso , manutenção e limpeza.
Antes de ser liberado para venda, cada lote do produto é submetido a testes
específicos, que são repetidos periodicamente até a data de vencimento
expressa em rótulo. Os certificados de análise de cada lote podem ser
solicitados junto ao SAC - Serviço de Assessoria ao Cliente, bem como em
caso de dúvidas ou quaisquer problemas de origem técnica, através do
telefone 0800-410027. Quaisquer problemas que inviabilizem uma boa
Laborclin produtos para laboratórios ltda.
Dúvidas, sugestões Rua Cassemiro de Abreu, 521 Pinhais/PR - CEP 83.321-210
.
e/ou reclamações CNPJ: 76.619.113/0001-31 - Inscrição Estadual: 13700129-26
ligue para o nosso: Responsável Técnico: Elisa H. Uemura CRF-PR 4311
www.laborclin.com.br
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