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POTENCIAL GASTROPROTETOR DA
FRUTALINA
LECTINA α-D-GALACTOSE
LIGANTECONTRA AS LESÕES GÁSTRICAS INDUZIDAS POR
ETANOL
&
Ana Paula de Vasconcellos Abdon *
Greicy Coelho de Souza *
Lílian Noronha Coelho de Souza *
Renata Prado Vasconcelos *
Carolina Araújo Castro *
Marjorie Moreira Guedes **
Roberto César Pereira Lima Júnior **
Renato de Azevedo Moreira *
Ana Cristina de Oliveira Monteiro Moreira *
Adriana Rolim Campos *
* Universidade de Fortaleza, Curso de Doutorado em Biotecnologia, RENORBIO, 60811-905, Fortaleza, CE, Brasil
** Universidade Federal do Ceará, Departamento de Fisiologia e Farmacologia, 60430-270, Fortaleza, CE, Brasil
AUTORES
POTENCIAL GASTROPROTETOR DA FRUTALINA, UMA D GALACTOSE LECTINA DE LIGAÇÃO, CONTRA AS LESÕES GÁSTRICAS INDUZIDAS
POR ETANOL
02
As lectinas são proteínas ou glicoproteínas,
substâncias geralmente de origem vegetal capazes
de reconhecimento específico de ligações
reversíveis e porções glicoconjugadas complexas de
hidrato de carbono sem alterar a estrutura covalente
dos ligandos.
As lectinas também têm a propriedade de ligação a
açúcares nas membranas celulares, assim alterando
a fisiologia da membrana, levando a aglutinação, a
mitose, ou outras alterações bioquímicas na célula
INTRODUÇÃO
POTENCIAL GASTROPROTETOR DA FRUTALINA, UMA D GALACTOSE LECTINA DE LIGAÇÃO, CONTRA AS LESÕES GÁSTRICAS INDUZIDAS
POR ETANOL
03
1. Animais
2. Purificação da frutalina (FTL)
3. Lesões gástricas induzidas por etanol
4. Lesões gástricas induzidas por
indometacina
5. Efeitos do pré-tratamento da capsazepina
sobre a FTL
6. Efeitos do pré-tratamento sobre a
indometacina
7. Papel do óxido nítrico, canais K + ATP e
compostos sulfidrilo sobre o efeito
gastroprotetor da FTL
EXPERIMENTO
POTENCIAL GASTROPROTETOR DA FRUTALINA, UMA D GALACTOSE LECTINA DE LIGAÇÃO, CONTRA AS LESÕES GÁSTRICAS INDUZIDAS
POR ETANOL
04
8. Papel do ácido a 2 receptores sobre o
efeito gastroprotetor da FTL
9. Papel dos receptores opióides e canais
de cálcio sobre o efeito gastroprotetor
da FTL
10. Papel do domínio de lectina sobre o
efeito gastroprotetor da FTL
11. Ensaio de GSH
12. Ensaio de MDA
13. Análise estatística
ANIMAIS
POTENCIAL GASTROPROTETOR DA FRUTALINA, UMA D GALACTOSE LECTINA DE LIGAÇÃO, CONTRA AS LESÕES GÁSTRICAS INDUZIDAS POR
ETANOL
05
Camundongos machos
Swiss albino
(20-25 g)
**** **
A lectina purificado foi obtido a partir de sementes de Artocarpus
incisa* desidratada em solução tampão de fosfato (pH 7,4 PBS
agitados durante 6 h, a 4 ° C e, em seguida, centrifugado durante
20 min (1500 × g / 4 ° C).
O sobrenadante foi ultra-filtrada através de membrana e a FTL
purificada a partir do extrato bruto em uma coluna de D
Sepharose eluída com 0,2 M d -galactose em PBS**
A concentração de proteína foi determinada pelo método de
Bradford e a pureza de FTL em solução foi confirmada pela
presença de apenas duas bandas (15,5 kDa e 12 kDa) após
SDS-PAGE.***
PURIFICAÇÃO
POTENCIAL GASTROPROTETOR DA FRUTALINA, UMA D GALACTOSE LECTINA DE LIGAÇÃO, CONTRA AS LESÕES GÁSTRICAS INDUZIDAS
POR ETANOL
06
Indução por etanol (absoluto 96%, 0,2 ml / animal)
Pré-tratamento: NaCl 0,9% (10 mL / kg), cimetidina (100 mg /
kg) ou frutalina FTL (0,25, 0,5 e 1 mg / kg)
Após 30 min, os animais foram sacrificados, os estômagos,
abertos ao longo da curvatura maior e lavados com solução
salina (0,9%).
Hemorragias ou lesões ulcerativas foram medidos usando um
software de planimetria
LESÕES
POTENCIAL GASTROPROTETOR DA FRUTALINA, UMA D GALACTOSE LECTINA DE LIGAÇÃO, CONTRA AS LESÕES GÁSTRICAS INDUZIDAS
POR ETANOL
07
Indução por indometacina (30 mg / kg)
Pré-tratamento: FTL (0,25, 0,5 e 1 mg / kg), cimetidina 100
mg / kg, ) Ou NaCl 0,9% (10 mL / kg)
Sacrificio após 6 horas.
Os estômagos foram removidos, imerso em 5% de formalina
durante 30 minutos e em seguida aberto ao longo da
curvatura maior para registar a incidência e extensão da
ulceração.
LESÕES
POTENCIAL GASTROPROTETOR DA FRUTALINA, UMA D GALACTOSE LECTINA DE LIGAÇÃO, CONTRA AS LESÕES GÁSTRICAS INDUZIDAS
POR ETANOL
08
Efeitos do pré-tratamento com capsazepina*, e
indometacina** comparado ao tratatamento com
(FTL)
EFEITOS
POTENCIAL GASTROPROTETOR DA FRUTALINA, UMA D GALACTOSE LECTINA DE LIGAÇÃO, CONTRA AS LESÕES GÁSTRICAS INDUZIDAS
POR ETANOL
09
* ** Compostos de
Sulfidrila
Opioides
0
5
10
15
20
25
Controle (veículo) FTL Capsazepina Capsazepina + FTL
Dose (mg / kg) 0 0.5 0.5 5
Etanol área de lesão (%) 16.8 3.8 20.16 11.9
ANÁLISES/Resultados e discusões
POTENCIAL GASTROPROTETOR DA FRUTALINA, UMA D GALACTOSE LECTINA DE LIGAÇÃO, CONTRA AS LESÕES GÁSTRICAS INDUZIDAS
POR ETANOL
10
Efeito da capsazepina sobre
lesões gástricas induzidas
pelo etanol (0,2 ml / animal )
O pré-tratamento com
capsazepina (Tabela 2 )
bloqueou
significativamente a
gastroproteção
produzido por FTL
Tabela 2
+ 0,5
ANÁLISES/Resultados e discusões
POTENCIAL GASTROPROTETOR DA FRUTALINA, UMA D GALACTOSE LECTINA DE LIGAÇÃO, CONTRA AS LESÕES GÁSTRICAS INDUZIDAS
POR ETANOL
11
0
20
40
60
80
100
Controle
(veículo)
FTL FTL FTL Cimetidina
Dose (mg / kg) 0 0.25 0.5 1 100
Etanol área de lesão (%) 32.88 33.67 10.52 36.26 18.2
Indometacina área de lesão (%) 17.16 10.16 8 12.33 8.66
Efeitos da frutalina (FTL) sobre lesões
gástricas induzidas pelo etanol absoluto
(0,2 ml / animal ) ou indometacina (30 mg /
kg)
A administração
intraperitoneal de FTL
exibiu um efeito
protector contra o etanol
e lesões gástricas
induzidas por
indometacina
A cimetidina (100 mg /
kg), o controle positivo,
também oferece uma
protecção significativa.
Tabela 1
SEMINÁRIO DE BIOTECNOLOGIA
APRESENTADO EM 03/06/2016
BIOMEDICINA UNICHRISTUS - BENFICA
NCBI / PUMED.gov. Disponível em :
<http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22285860> Acesso em 27/05/2016
Sciencedirect. Disponivel em:
<http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0367326X12000329&> Acesso em 27/05/2016
REFERENCIAS
BIBLIOGRÁFICAS

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Potencial gastroprotetor da frutalina

  • 1. POTENCIAL GASTROPROTETOR DA FRUTALINA LECTINA α-D-GALACTOSE LIGANTECONTRA AS LESÕES GÁSTRICAS INDUZIDAS POR ETANOL &
  • 2. Ana Paula de Vasconcellos Abdon * Greicy Coelho de Souza * Lílian Noronha Coelho de Souza * Renata Prado Vasconcelos * Carolina Araújo Castro * Marjorie Moreira Guedes ** Roberto César Pereira Lima Júnior ** Renato de Azevedo Moreira * Ana Cristina de Oliveira Monteiro Moreira * Adriana Rolim Campos * * Universidade de Fortaleza, Curso de Doutorado em Biotecnologia, RENORBIO, 60811-905, Fortaleza, CE, Brasil ** Universidade Federal do Ceará, Departamento de Fisiologia e Farmacologia, 60430-270, Fortaleza, CE, Brasil AUTORES POTENCIAL GASTROPROTETOR DA FRUTALINA, UMA D GALACTOSE LECTINA DE LIGAÇÃO, CONTRA AS LESÕES GÁSTRICAS INDUZIDAS POR ETANOL 02
  • 3. As lectinas são proteínas ou glicoproteínas, substâncias geralmente de origem vegetal capazes de reconhecimento específico de ligações reversíveis e porções glicoconjugadas complexas de hidrato de carbono sem alterar a estrutura covalente dos ligandos. As lectinas também têm a propriedade de ligação a açúcares nas membranas celulares, assim alterando a fisiologia da membrana, levando a aglutinação, a mitose, ou outras alterações bioquímicas na célula INTRODUÇÃO POTENCIAL GASTROPROTETOR DA FRUTALINA, UMA D GALACTOSE LECTINA DE LIGAÇÃO, CONTRA AS LESÕES GÁSTRICAS INDUZIDAS POR ETANOL 03
  • 4. 1. Animais 2. Purificação da frutalina (FTL) 3. Lesões gástricas induzidas por etanol 4. Lesões gástricas induzidas por indometacina 5. Efeitos do pré-tratamento da capsazepina sobre a FTL 6. Efeitos do pré-tratamento sobre a indometacina 7. Papel do óxido nítrico, canais K + ATP e compostos sulfidrilo sobre o efeito gastroprotetor da FTL EXPERIMENTO POTENCIAL GASTROPROTETOR DA FRUTALINA, UMA D GALACTOSE LECTINA DE LIGAÇÃO, CONTRA AS LESÕES GÁSTRICAS INDUZIDAS POR ETANOL 04 8. Papel do ácido a 2 receptores sobre o efeito gastroprotetor da FTL 9. Papel dos receptores opióides e canais de cálcio sobre o efeito gastroprotetor da FTL 10. Papel do domínio de lectina sobre o efeito gastroprotetor da FTL 11. Ensaio de GSH 12. Ensaio de MDA 13. Análise estatística
  • 5. ANIMAIS POTENCIAL GASTROPROTETOR DA FRUTALINA, UMA D GALACTOSE LECTINA DE LIGAÇÃO, CONTRA AS LESÕES GÁSTRICAS INDUZIDAS POR ETANOL 05 Camundongos machos Swiss albino (20-25 g)
  • 6. **** ** A lectina purificado foi obtido a partir de sementes de Artocarpus incisa* desidratada em solução tampão de fosfato (pH 7,4 PBS agitados durante 6 h, a 4 ° C e, em seguida, centrifugado durante 20 min (1500 × g / 4 ° C). O sobrenadante foi ultra-filtrada através de membrana e a FTL purificada a partir do extrato bruto em uma coluna de D Sepharose eluída com 0,2 M d -galactose em PBS** A concentração de proteína foi determinada pelo método de Bradford e a pureza de FTL em solução foi confirmada pela presença de apenas duas bandas (15,5 kDa e 12 kDa) após SDS-PAGE.*** PURIFICAÇÃO POTENCIAL GASTROPROTETOR DA FRUTALINA, UMA D GALACTOSE LECTINA DE LIGAÇÃO, CONTRA AS LESÕES GÁSTRICAS INDUZIDAS POR ETANOL 06
  • 7. Indução por etanol (absoluto 96%, 0,2 ml / animal) Pré-tratamento: NaCl 0,9% (10 mL / kg), cimetidina (100 mg / kg) ou frutalina FTL (0,25, 0,5 e 1 mg / kg) Após 30 min, os animais foram sacrificados, os estômagos, abertos ao longo da curvatura maior e lavados com solução salina (0,9%). Hemorragias ou lesões ulcerativas foram medidos usando um software de planimetria LESÕES POTENCIAL GASTROPROTETOR DA FRUTALINA, UMA D GALACTOSE LECTINA DE LIGAÇÃO, CONTRA AS LESÕES GÁSTRICAS INDUZIDAS POR ETANOL 07
  • 8. Indução por indometacina (30 mg / kg) Pré-tratamento: FTL (0,25, 0,5 e 1 mg / kg), cimetidina 100 mg / kg, ) Ou NaCl 0,9% (10 mL / kg) Sacrificio após 6 horas. Os estômagos foram removidos, imerso em 5% de formalina durante 30 minutos e em seguida aberto ao longo da curvatura maior para registar a incidência e extensão da ulceração. LESÕES POTENCIAL GASTROPROTETOR DA FRUTALINA, UMA D GALACTOSE LECTINA DE LIGAÇÃO, CONTRA AS LESÕES GÁSTRICAS INDUZIDAS POR ETANOL 08
  • 9. Efeitos do pré-tratamento com capsazepina*, e indometacina** comparado ao tratatamento com (FTL) EFEITOS POTENCIAL GASTROPROTETOR DA FRUTALINA, UMA D GALACTOSE LECTINA DE LIGAÇÃO, CONTRA AS LESÕES GÁSTRICAS INDUZIDAS POR ETANOL 09 * ** Compostos de Sulfidrila Opioides
  • 10. 0 5 10 15 20 25 Controle (veículo) FTL Capsazepina Capsazepina + FTL Dose (mg / kg) 0 0.5 0.5 5 Etanol área de lesão (%) 16.8 3.8 20.16 11.9 ANÁLISES/Resultados e discusões POTENCIAL GASTROPROTETOR DA FRUTALINA, UMA D GALACTOSE LECTINA DE LIGAÇÃO, CONTRA AS LESÕES GÁSTRICAS INDUZIDAS POR ETANOL 10 Efeito da capsazepina sobre lesões gástricas induzidas pelo etanol (0,2 ml / animal ) O pré-tratamento com capsazepina (Tabela 2 ) bloqueou significativamente a gastroproteção produzido por FTL Tabela 2 + 0,5
  • 11. ANÁLISES/Resultados e discusões POTENCIAL GASTROPROTETOR DA FRUTALINA, UMA D GALACTOSE LECTINA DE LIGAÇÃO, CONTRA AS LESÕES GÁSTRICAS INDUZIDAS POR ETANOL 11 0 20 40 60 80 100 Controle (veículo) FTL FTL FTL Cimetidina Dose (mg / kg) 0 0.25 0.5 1 100 Etanol área de lesão (%) 32.88 33.67 10.52 36.26 18.2 Indometacina área de lesão (%) 17.16 10.16 8 12.33 8.66 Efeitos da frutalina (FTL) sobre lesões gástricas induzidas pelo etanol absoluto (0,2 ml / animal ) ou indometacina (30 mg / kg) A administração intraperitoneal de FTL exibiu um efeito protector contra o etanol e lesões gástricas induzidas por indometacina A cimetidina (100 mg / kg), o controle positivo, também oferece uma protecção significativa. Tabela 1
  • 12. SEMINÁRIO DE BIOTECNOLOGIA APRESENTADO EM 03/06/2016 BIOMEDICINA UNICHRISTUS - BENFICA NCBI / PUMED.gov. Disponível em : <http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22285860> Acesso em 27/05/2016 Sciencedirect. Disponivel em: <http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0367326X12000329&> Acesso em 27/05/2016 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS