O documento resume os principais passos para o transporte e congelamento de sêmen, incluindo a diluição, envasamento, congelamento lento controlado, armazenamento em nitrogênio líquido a -196°C, e descongelamento para inseminação artificial.

1. Transporte e
Congelamento de
Sêmen
M.V. PhD. Adriana Pires Neves
Medicina Veterinária – URCAMP
Reprolab - UFRGS

2. Conservação do Sêmen
Retirar a fração gel

3. Filtragem
Através de uma gaze estéril ou filtros

4. Após a diluição
 Estocagem no próprio frasco
 Diluidor - +5oC - Geladeira
 Todas as células em contato
com o diluente
 Tubos
 Rotação

5. Tipos de Estocagem
• Anaeróbica
• Aeróbica –temp ambiente
(da Europa…)- INRA 96
• Sem diferença na fertilidade

6. Temperatura Crítica
 +20oC a + 5oC
 Choque térmico
 Danos à membrana do
spz.

7. Taxa de Resfriamento
• Até 20oC Rápido
• 20oC até 8oCLento <0,3oC/min
• 8oC até 5oC Rápido

8. Transporte de Sêmen
Recuperação
•Temperatura até destino – próxima a +5oC
•Vários tipos comerciais de containers
•Permanentes ou descartáveis (ambiente)

11. Tipos de Transporte
•Boa comunicação entre as
bases
•Identificação do sêmen
•Transporte aéreo ou
rodoviário – prós e contras

12. Sêmen Congelado

13. Vantagens
 Banco genético
 Animais em campanha
esportiva
 Mercado global
 Menos transporte de animais
e conseqüente risco
 Controle sanitário

14. Desvantagens
 Má congelabilidade
 Menores taxas de
fertilidade
 Menor tempo de vida
do spz
 Maior custo da IA

15. Passos para congelar
Aumento de concentração
•Diluição em solução crioprotetora
•Envasamento
•Congelamento
•Descongelamento
•Inseminação

16. Aumento de Concentração
Coleta Fracionada – 10% do
plasma seminal

17. Centrifugação  <2% plasma
•Concentrações
<300x106esp.
•Diluição 1+2
–EDTA – Glicose
•Centrifugação
–700 a
1000g/5min

18. Centrifugação
• Retirar o
sobrenadante
em um único
movimento

19.  Proteger durante a centrifugação, curva
de resfriamento e descongelamento
 Diluente de Martin
Diluição
•Lactose 11% 50 ml
•EDTA – glicose 25 ml
•Gema 25 ml
•Glicerol 5%

20. Diluente INRA 82
– Glicose 5g
– Lactose 300mg
– Rafinose 300mg
– Citrato Trisód. dihid. 60mg
– Citrato K 82mg
– Hepes 952mg
– Água 100ml
– Leite UHT desn. 100ml
– Penicilina 1UI/ml
– Gentamicina 0,1g/ml

21. Outros Diluentes
• Vidament et al. 2002
– Inra 82 + 2% gema + 3% glicerol
– Inra 82 + 2% gema + 2% glicerol
– Inra 82 + 2% gema + 2% Dimetil
formamida
• Papa et al. 2002
– Inra 82 + 5% Dimetil formamida

22. Envasamento
 Pellets
 Macrotubos 4 ml
 Palhetas 0,5ml
 Palhetas 0,25ml

23. Envasamento
 Palhetas e Macrotubos
– 50x106 espermatozóides/ml
• Pellets
– Diluição 1+2
• Congelamento

24. Congelamento
• Palhetas e
Macrotubos
• 20 minutos a 4 cm
do espelho de N2

25. Congelamento
•Velocidade de
congelamento
•+20oC a +5oC =
–5oC/min
•+5oC a -15oC =
–10oC/min
•-15oC a –150oC =
–25oC/min

27. Congelamento
 Deposição em
Nitrogênio Líquido
 (-196oC)

28. Descongelamento
Pellets
–37oC leite
desnatado
•Palhetas
–37oC /30s
•Macrotubos
–50oC 40s

29. Dose Inseminante
•Até 1980
–200x106
espermatozóides
•Após 1980
–400 a 500x106
espermatozóides

30. Inseminação
•Controle folicular
rigoroso- 6 em 6 h
•IDEAL:
-2h antes ou após a
ovulação
•Possível
-12 h antes ou 6h
após a ovulação

31. Inseminação intracornual profunda

32. Inseminação intracornual profunda
•Endoscopia
•Pipeta
•0,2 a 0,02ml
•5x106 spz

33. Muito obrigada!!