Este documento resume um estudo sobre a caracterização molecular de amostras de Echinococcus granulosus em Portugal. O estudo analisou 204 amostras biológicas para identificar os genótipos existentes no país e realizou uma análise filogenética de fragmentos dos genes mitocondriais COI, 12S, 16S, ATP6 e NDI para caracterizar as estirpes genéticas. Os resultados contribuirão para o conhecimento da epidemiologia do quisto hidático em Portugal.

1. Caracterização molecular de
amostras de Echinococcus
granulosus em Portugal
Beato, Sílvia, Parreira, Ricardo, & Grácio, Maria Amélia
(IHMT, Lisboa)
III JORNADAS CIENTÍFICAS DO IHMT

2. Nota Introdutória
 Quisto Hidático Patologia Molecular
Echinococcus granulosus
o Helminta (vermes achatados)
o Família Taenidae
o Disseminação Mundial
o Portugal considerado hiperendémico
o Variabilidade genética (genótipos - G1 a G10)
http://www.bayervet.com.pt

3. Genótipo Estirpe
G1 Ovelha comum
G2 Ovelha da Tasmânia
G3 Búfalos
G4 Cavalo
G5 Bovina
G6 Camelo
G7 Porco
G8 Cervídeos
G9 ? Humanos
G10 Cervídeos
? Leão
Nota Introdutória

4. Genótipo Estirpe
G1 Ovelha comum
G2 Ovelha da Tasmânia
G3 Búfalos
G4 Cavalo
G5 Bovina
G6 Camelo
G7 Porco
G8 Cervídeos
G9 ? Humanos
G10 Cervídeos
? Leão www.edelkatzen.de/m-wurm.htm
(Thompson, R, 2008, Exp Parasit)
Nota Introdutória

5. 1. Epidemiologia e caracterização das estirpes genéticas de
E. granulosus existentes em Portugal;
2. Análise filogenética de fragmentos dos genes
mitocondriais e nucleares:
- Genes Mitocondriais (COI, 12S,16S,ATP6 e NDI);
- Genes Nucleares (em curso)
TRABALHO REALIZADO

6. METODOLOGIAS
 Material Biológico:
204 amostras biológicas (ovino, caprino,
bovino e humano) – recolha 2009 e 2011
78 amostras férteis (pulmão, fígado e
pâncreas)
estudo molecular
 Extracção do DNA:

7.  Desenho de “primers”:
ATP6F: 5’ – AAACTGTRGGGTTCATGTCYC – 3’
ATP6R: 5’ – CACAACATAAAHGGAAAYAAACCAAAC – 3’
12SrF: 5’ – GGTTTATTTGCCTTTTGCATCATGC – 3’
12SrR: 5’ – CCTAAGTCAACATCGAGGTGGCAAAC – 3’
16SrF: 5’ – AGCCAGGTCGGTTCTTATCTATTG – 3’
16SrR: 5’ – CGAGGGTGACGGGCGGTGTGTAC – 3’
CytBF: 5’ – AGATTGTGGTTYTGTTGARTRCTA – 3’
CytBR: 5’ – ATACACCGAAGAATAGCATAAAAYGC – 3’
(Base nos genomas mitocondriais depositados no NCBI)
Amplificação do DNA:
- Citocromo c oxidase sub-unidade 1
- Primers: JB 3 (F): 5’ – TTTTTTGGGCATCCTGAGGTTTAT – 3’
JB 4.5 (R): 5’ – TAAAGAAAGAACATAATGAAAATG – 3’
Sequenciação
(Bowles & McManus , 1992, Molec. Biochem. Parasitol, 54, 165-174)

8. 2. Análise Filogenética
• Amplificação de fragmentos do gene COI
(Bowles and McManus, 1992).
• Amplificação de fragmentos dos genes 12S, 16S
e ATP6

9. 2. Análise Filogenética
(Thompson, R.C., 2008, Exp Parasitol.)

10. 2. Análise Filogenética
Fragmentos dos genes mitocondriais (COI, 12S, 16S e ATP6)
concatenados (~2700 pb)

12. AGRADECIMENTOS