1. ‫التحليل بطرق التفريق اللوني‬
‫التفريق اللوني على طبقة رقيقة ‪TLC‬الـ )اسْ ِشْرا ُ ال ّ َ َ ِ ال ّقي َة(‬
‫ت ب طبقة ر ق‬
‫المقدمة:‬
‫يتألف التفريق اللوني على طبقة رقيقة من محلول العينة ]المكون من مادتين أو أكثر الموجود[ المطبق‬
‫كبقعة أو كشريط طويل ضيق على بداية طبقة ممدودة على داعم )صفيحة معدنية ُطرقة ورقيقة متماثلة في‬
‫م‬
‫السماكة(‬
‫بعد تبخر ال ُذيب ُوضع الصفيحة المعدنية في وعاء أو حوض محكم الغلق يحتوي على مزيج ُحل قد ُختير‬
‫أ‬ ‫م‬ ‫ت‬ ‫م‬
‫ليكون عبارة عن طور متحرك ‪ ، mobile phase‬تتقدم هذه العملية عند تحرك الطور المتحرك باتجاه أعلى‬
‫الطبقة من خلل القوى أو الخاصة الشعرية )‪. (capillary forces‬‬
‫ويمكن توفير فصل أكثر تمايزً بطرق تعتمد الدوات كالتفريق اللوني على طبقة رقيقة بالضغط العالي ‪over‬‬
‫ا‬
‫‪ (pressured layer chromatography (OPLC‬أو التقدم المؤتمت على مراحل ‪automated multiple‬‬
‫‪(development (AMD‬‬
‫ُبعد الصفيحة المعدنية عن الحوض ونقوم بتحري المناطق التي حدث فيها الفصل من خلل :‬
‫ت‬
‫1.طرق فيزيائية أو كيميائية‬
‫‪ Rf‬التابعة للمواد المفصولة )‪:Rf‬هي المسافة التي‬ ‫٢. ونتعرف على المناطق بالمقارنة بين القيم النظرية للـ‬
‫تقطعها المادة المراد فصلها/ المسافة التي قطعها الطور المتحرك(‬
‫3.ومن ألوان مناطق المواد الشاهدة )العيارية(على الصفيحة المعدنية نفسها‬
‫٤. ثم قياس الكمية بالنظر أو آليا بواسطة المكثاف )مقياس الكثافة( ال ُعتمد على قياس حجم أو كثافة المنطقة‬
‫م‬
‫المراد قياسها وذلك على الصفيحة المعدنية نفسها.‬
‫يتم ال ُأ ّد من المناطق المحددة التي حدث فيها الفصل بشكل مباشر أو غير مباشر عبر ترافق الفصل على طبقة‬
‫تك‬
‫رقيقة مع استخدام مباشر- أثناء العمل- أو غير مباشر لقياس طيف مرئي أو فوق بنفسجي أو تحويل فورييه‬
‫للشعة تحت الحمراء أو رامان أو مطياف الكتلة. تشمل التطبيقات الصيدلنية للتفريق اللوني على طبقة رقيقة‬
‫تحليل المواد الولية البادئة والمواد الوسيطة والمواد الولية الصيدلنية والمنتجات ال ُصاغة والدوية‬
‫م‬
‫ومستقلباتها في الوساط البيولوجية.‬
‫إن عملية التفريق اللوني على طبقة رقيقة هي عملية مرنة ومتعددة الستعمال واقتصادية ، و تحوي على مراحل‬
‫مختلفة )الشكل.1( ُنفذ بشكل مستقل ، وقد لخصت أفضلية الترتيب اللمركزي مقارنة مع عملية مركزية )كما‬
‫ت‬
‫في الستشراب السائل عالي الداء" ‪ ("HPLC‬وهي تتضمن ما يلي:‬
‫١. ُوفر مدى عظيم من الطوار الثابتة مع انتقائية فريدة لمكونات الخليط المحل‬
‫ت‬
‫2. المقدرة على اختيار المذيبات لتكون كطور متحرك ليست ُقيدة بشفافية منخفضة للشعة فوق البنفسجية أو‬
‫م‬
‫الحاجة لنقاوة عالية ]كونها تتبخر قبل مرحلة الكشف خلف ً للتفريق عالي الداء[‬
‫ا‬
‫3. إمكانية تكرار إجراء تقييم قياس الكثافة تحت شروط مختلفة دون تكرار عملية التفريق اللوني بانتظام لتوخي‬
‫القياس الكمي المثل ، نظرً لن كل أجزاء عينة الفحص محفوظة على الصفيحة المعدنية.‬
‫ا‬
‫٤. تحليل كمية كبيرة من العينات لنه يمكن لعدد من العينات أن يفرق لوني ً مع ً.‬
‫ا ا‬
‫5. كلفة أقل للمذيب ال ُشترى وال ُرمى نظرً لن الكمية المطلوبة من الطور المتحرك لكل عينة صغيرة.‬
‫ا‬ ‫م‬ ‫م‬

2. ‫6. مضبوطية القياس ‪ accuracy‬ودقته ‪ precision‬عالية لن العينات والمواد المعيارية ُفرق لوني ً و ُقاس‬
‫ا ت‬ ‫ت‬
‫تحت نفس الشروط ؛ وذلك على نفس الصفيحة المعدنية للتفريق اللوني على طبقة رقيقة.‬
‫7. حدود حساسية التحليل عادة من مستويات النانوغرام ‪ ng‬إلى البيكوغرام ‪.pg‬‬
‫وجدت الدراسات المقارنة أن التفريق اللوني على طبقة رقيقة عالي أداء )‪ ( HPTLC‬أفضل وأرفع من عملية‬
‫الستشراب السائل عالي الداء ‪ HPLC‬من ناحية التكلفة الكلية والوقت ال ُتطلب للتحاليل الصيدلنية.‬
‫م‬
‫يحوي مسرد المراجع مصادر معلومات عامة عن مبادئ و نظريات وممارسة وأدوات وتطبيقات عن التفريق‬
‫اللوني على طبقة رقيقةالـ ‪ TLC‬والتفريق اللوني على طبقة رقيقة عالي الداء ‪ HPTLC‬ويمكن إيجاد معلومات‬
‫مفصلة عن المواضيع التي ذكرت أعله ومعلومات عن مواضيع وتطبيقات أخرى في هذه المصادر لتعذر ذكرها‬
‫هنا بسبب صغر حجم المقال.‬
‫الجراءات التجريبية:‬
‫تحضيـر العينـة : تشبـه إجراءات اسـتخلص وتنقيـة العينـة فـي التفريـق اللونـي )السـتشراب( على طبقـة رقيقـة‬
‫مثيلتها في التفريق اللوني الغازي الـ ‪ ، GC‬وفي الستشراب السائل عالي الداء الـ ‪.HPLC‬‬
‫إذا كان تركيز ال ُليلة )المادة ال ُحللة( عالي ً بما فيه الكفاية فيمكن أن يكون في أغلب الحيان حل أشكال الجرعات‬
‫ا‬ ‫م‬ ‫ح‬
‫الصـيدلنية ببسـاطة فـي المحـل الذي ُذيـب المادة ال ُحللة بشكـل تام ويترك السـواغات والعوامـل الغريبـة )الدخيلة(‬
‫م‬ ‫ي‬
‫ُ‬
‫الممزوج غير ذائبة ونحصل على محلول اختبار والذي يمكن وضعه مباشرة في بقع للتحليل بالتفريق اللوني على‬
‫طبقـة رقيقـة. قـد يكون مطلوب ً تنعيـم العينـة و تطـبيق الحرارة و/أو التعريـض للمواج الصـوتية لضمان انحلليـة‬
‫ا‬
‫المادة ال ُحللة ، و كذلك قد يلزم استخدام الترشيح أو التثفيل لزالة السواغات غير المنحلة.‬
‫م‬
‫في حال كانت المادة ال ُحللة موجودة بتركيز منخفض ضمن عينة ُعقدة فيلزم غالب ً القيام بإجراءات الستخلص‬
‫ا‬ ‫م‬ ‫م‬
‫بالمحـل و التنقيـة و زيادة التركيـز تسـبق عمليـة الــ ‪ TLC‬لزيادة تركيـز المادة ال ُحللة وتقليـل المواد الغريبـة‬
‫م‬
‫المتداخلة في محلول الختبار.‬
‫تحضير العينة واشتقاقها‬
‫اختيار الطوار‬ ‫غسل الطبقة قبل‬
‫الثابتة والمتحركة‬ ‫العمل‬
‫تطبيق العينة‬
‫الشتقاق في موقعه‬
‫إعداد الطبقة‬
‫الصلي )من الطبقة(‬
‫تقدم المخطط‬
‫الستشرابي‬
‫التوثيق بالصور‬
‫كشف منطقة البقعة‬
‫والفيديو‬
‫تقييم المخطط الستشرابي من خلل‬
‫قياس الكثافة للتحليل النوعي والكمي‬

3. ‫الحساب وذكر النتائج‬
‫الشكل- ١ }المخطط البياني لخطوات التفريق اللوني على طبقة رقيقة.{‬
‫نظرً لن الطبقات ل ُعاد اسـتخدامها فمـن الممكـن تطـبيق عينات أقـل اسـتخلص ً مـن تلك التـي يمكـن حقنهـا فـي‬
‫ا‬ ‫ي‬ ‫ا‬
‫عامود الستشراب الغازي ‪ ، GC‬والستشراب السائل رفيع الداء ‪HPLC‬؛ و تتضمن هذا العينات التي تحوي‬
‫شوائب ُمتزة بشكل غير قابل للعكس)نهائي(.‬
‫م‬
‫وتســتخدم الجراءات التقليديــة لفصــل وتنقيــة العينــة قبــل الســتشراب على الطبقــة الرقيقــة والتــي مازالت كثيرة‬
‫السـتعمال كالتوزع سـائلسـائل ، وعمود التفريـق اللونـي ، واتنزاع الملح ، وانتزاع البروتيـن ، و لكـن الطرق‬
‫الحدث يتزايـد اسـتخدامها للطبقـة الرقيقـة ؛ كالسـتخلص بالمايكرويـف )الموجـة الدقيقـة( ، والسـتخلص بالطور‬
‫الصلب ))‪ ، SPE‬ووسائل الستخلص السائل فوق الحرج )‪.(SEF‬‬
‫تمكّن بعض الصفائح المعدنية الخاصة المجهزة بمناطق ما قبل المتزاز أو مناطق خاصة للتركيز مؤلفة من مادة‬
‫خاملة على المتزاز كــ ‪ kieselguhr‬أو ثانـي أوكسـيد السـيليكون وقـد تعطـي هذه المناطـق تنقيـة للعينـة مـن خلل‬
‫الحتفاظ ببعض المواد ال ُتداخلة.‬
‫م‬
‫تتضمـن عادة مبادئ التحليـل الكمـي والنوعـي للعينات؛ كالقراص، أخـذ عدة أقراص )مث ً: ٠١ _٠٢ قرصـً( ثـم‬
‫ا‬ ‫ل‬
‫طحنهـا وخلطهـا بشكـل جيـد وأخـذ عينـة بوزن مكافـئ لقرص واحـد ، وهذا أفضـل مـن تحليـل قرص واحـد فقـط ؛‬
‫وبذلك تكون العينة أفضل تمثيلً لوجبة القراص ال ُختبرة.‬
‫م‬
‫الطوار الثابتة:‬
‫ُسـتعمل عملي ً فـي كـل التحليلت الطبقات التجاريـة المكسـوة مسـبق ً والمحمولة على داعـم زجاجـي ، و ُسـتعمل فـي‬
‫ي‬ ‫ا‬ ‫ا‬ ‫ت‬
‫الــ"‪ "HPTLC‬الصـفائح الصـغر )٠١×٠١ أو ٠١×٠٢ سـنتيمتر( ولهـا طبقـة أرق )١.٠_٢.٠ ميليمتـر( مكونـة‬
‫من عامل امتزاز "‪ "sorbent‬له حجم متوسط للجزيئة أكثر دقة )٥_٦ ميكرومتر( وتجرى العملية على مسافات‬
‫أقصر )٧_ ٣ سنتيمتر . ‪ (ca‬وهذا بالمقارنة مع صفائح عملية التفريق اللوني على طبقة رقيقة التقليدية )٠٢×٠٢‬
‫سنتيمتر( الذي يكون بشكل عام )٠٢×٠٢ سنتيمتر( مع طبقة بسماكة ٥٢.٠ ميليمتر ويجرى الفصل على مسافة )‬
‫٠١_٢١ سنتيمتر(‬
‫ُ ّودنـا الصـفائح المعدنيـة التابعـة لعمليـة التفريـق اللونـي عالي الداء )‪ (HP‬بتحليـل حسـن )تمايـز أفضـل( ، ووقـت‬
‫تز‬
‫أقصـر للتحليـل ، وحسـاسية كشـف أعلى ، وقياس كمـي أفضـل فـي الموقـع الصـلي للبقعـة ، وتسـتخدم هذه الصـفائح‬
‫في التحاليل الكمية بقياس الكثافات في قطاع الصيدلنيات الصناعية .‬
‫ُستعمل عادة صفائح الـ ‪ TLC‬للتعرف النوعي ولدراسات النقاوة وفق محتوى دساتير الدوية ، ُستعمل في أكثر‬
‫أ‬ ‫ت‬
‫من 09% من التحليلت ال ُخبر عنها للمواد الصيدلنية والدوية استشراب الطبقة رقيقة بطور ممتز عادي على‬
‫م‬
‫ُلم السيليكا مع طور ُتحرك أقل قطبية مثل )مزيج الكلوروفورم - ميتانول( .‬
‫م‬ ‫ه‬
‫ويسـتعمل للتفريـق المعكوس على طبقـة رقيقـة أطوار محبـة للدسـم مـن سـيليكا جيـل معدلة كيماوي ً بالفينيـل 81‪C‬‬
‫ا‬
‫2‪ ، C8__C‬وصـفائح سـيلكيا جـل مشربـة بالهيدروكربون ويتـم إجراء العمليـة مـع طور ُتحرك أكثـر قطبيـة مثـل‬
‫م‬
‫)الميتانول والماء ، أو الماء والديوكسان(‬
‫ـــتتضمن الطبقات المســتعملة الخرى والمكســوة مســبق ً ؛ أوكســيد اللمنيوم ، وســيليكات المغنزيوم ، وأوكســيد‬
‫ا‬
‫المغنزيوم ، وعديـــد الميـــد )بولي أميـــد( ، والســـيللوز ، و ‪ ، kieselguhr‬و ُبادلت الشوارد )مثال على ذلك:‬
‫م‬
‫‪ ((PEI‬ســيلللوز ُبادل للنيونات( وطبقات هلم الســيليكا ال ُعدلة قطــبي ً والتــي تحوي على مجموعات مرتبطــة‬
‫ا‬ ‫م‬ ‫م‬
‫أمينية و سيانية ومجموعة التيول.‬

4. ‫الطوار ذات الروابـط القطبيـة التـي ترتبـط المجموعات الوظيفيـة مـع هلمـة السـيليكا بواسـطة فراغ كاره للماء ،‬
‫)مثال على ذلك: نظامـــي البروبيـــل( و ُمكـــن أن يعمـــل مـــع آليات ُتعددة الدوارج اعتمادً على تركيـــب الطور‬
‫ا‬ ‫م‬ ‫ي‬
‫ال ُتحرك‬
‫م‬
‫و ُمكن أن تكون هلمة السيليكا ُش ّبة بكواشف مختلفة لتحسين الفصل )مثال على ذلك: الـ ‪ EDTA‬لجل تحليل‬
‫م ر‬ ‫ي‬
‫التتراسيكلين (‬
‫وذكـر فـي الغالب لتحليـل الحماض المينيـة و ُشتقاتهـا فصـل ال ُماكـب البصـري الذي يجرى على طبقـة عديمـة‬
‫م‬ ‫م‬
‫التناظر الضوئي )المرأتي( ‪ُ chiral‬نتجة من 81‪ C‬بتعديل هلمة السيلكيا بإشرابها ملح النحاس الثنائي )‪II)Cu‬‬
‫م‬
‫ومشتــق نشيـط ضوئي ً هـو هيدروكسـي البيروليــن صـافي المصـاوغة المرأتيــة ‪ enantiomerically‬على طبقـة‬
‫ا‬
‫السـيليكا ال ُش ّبـة بعديـم التناظـر الضوئي )مثـل البروسـين( ، أو على متماثرات الجزيئات الكـبيرة )البوليميرات(‬
‫م ر‬
‫المطبوعــة بشكــل جزيئي على ناهضات )مقلدات( ُســتقبلت ألفــا ، أو على طور ُتحرك ســيللوزي ُضاف إليــه‬
‫م‬ ‫م‬ ‫م‬
‫محددات عدم التناظـر الضوئي مثـل السـيكلوديكسترينات. وقـد ُسـتعمل مزيـج المواد ال ُمتزة لتحضيـر طبقات ذات‬
‫م‬ ‫أ‬
‫صفات انتقائية خاصة.‬
‫ُنظف الطبقات غالب ً بإمرار مسبق للطور المتحرك أوبإمرار مزيج حجم لحجم كلور الميتيلين مع الميتانول ):١‬
‫ا‬ ‫ت‬
‫١( أو بغمرها في الميتانول قبل تطبيق العينة وخصوصا في الـ ‪ TLC‬الكمي.‬