Este estudio comparó tres pruebas diagnósticas para detectar Chlamydia trachomatis en 125 mujeres embarazadas: Papanicolaou, ensayo inmunoenzimático (EIA) y reacción en cadena de la polimerasa (PCR). La PCR mostró la mayor sensibilidad y especificidad, detectando 3 casos positivos. El EIA detectó 12 casos y el Papanicolaou solo 4 casos. Aunque el Papanicolaou no es considerado confiable para detectar Chlamydia, este estudio mostró que puede detectar algunos casos si se observan cuid

1. Detección de Chlamydia trachomatis en Mujeres
Embarazadas por la Técnica de Papanicolaou,
Ensayo Inmunoenzimatico y Reacción en
Cadena de la Polimerasa
Ponente: Sergio Cardona Tebar
Octubre 2010

2. OBJETIVO
Comparar tres diferentes pruebas diagnosticas utilizadas para
la detección de Chlamydia trachomatis a 125 mujeres
embarazadas con o sin síntomas que asistieron a su primera
consulta en el Hospital General Regional Ignacio Zaragoza de
México D. F.
Técnica de Papanicolaou
Ensayo inmunoenzimatico
Reacción en cadena de la polimerasa

3. CONCEPTOS GENERALES

4. Clasificación científica de la Chlamydia trachomatis
Chlamydia:
Palabra del griego khlamýs, khlamýdös que significa "capa" o
"encapotado"
REINO ORDEN FAMILIA GENERO ESPECIE
C. Abortus
C.Psittaci
Chlamydophila C. Pecorum
C. Caviae
Bacteria Chlamidiales Chlamydiaceae
C. Felis
C. Trachomatis
Chlamydia C. Muridarum
C. Suis
Nueva clasificación propuesta por Karin Everett, Bush y Anderson en 2002

5. Chlamydia trachomatis
características
• En un microorganismo intracelular obligado que infecta a las
células del epitelio plano, glandular y especialmente el de
reparación o de metaplasia.
• Es una bacteria Gram-negativa, aerobia y no móvil.
• La Chlamydia es reconocida como el patógeno de transmisión
sexual más común en el mundo.
• Tiene propiedades similares a los VIRUS , ya que contienen
DNA Y RNA.
• Se comporta como PARASITO intracelular ya que utiliza las
proteínas celulares para su crecimiento y multiplicación.

6. Chlamydia trachomatis características
• No pueden sintetizar ATP *, por lo que requieren un hábitat
intracelular.
• Inhibición de fusión de los lisosoma
• Se dividen por fisión binaria.
• Son esféricas u ovaladas observándose como cocos.
• Morfológicamente presenta dos estructuras diferentes que
son los llamados Cuerpos Elementales (CE) y los Cuerpos
Reticulados (CR).
• la Chlamydia se adhiere a la base de los micro vellos de la
célula y de allí se interna por un mecanismo de endocitosis.
*Trifosfato de adenosina (ATP), molécula que se encuentra en todos los seres vivos y constituye la fuente principal de energía
utilizable por las células para realizar sus actividades.

7. Ciclo de vida de la Chlamydia trachomatis
La diferencia de la Chlamydia de otras bacterias y de los virus
es que presentan dos estructuras morfológicas diferentes.
Cuerpos Elementales.
Cuerpo Reticulares.

8. Cuadro comparativo
Cuerpos elementales y Cuerpos reticulares
Características Cuerpos elementales Cuerpos reticulares
Forma Redondos Redondos
Tamaño 300nm a 400nm 800nm a 1000nm
Fase Extracelular Intracelular
Metabolismo Inactivos Activos
Estructura Resistentes Frágiles
Fase infectiva Si No
Fase replicativa No Si
Síntesis de ATP No Si
C.Reticular
C.Elemental
Cuatro cuerpos elementales rodeada por el cuerpo reticulado que los produjo De la Universidad de Southampton Escuela de Medicina.

9. Ciclo de crecimiento de la Chlamydia

10. Ciclo de desarrollo de la Chlamydia
trachomatis
célula
cuerpo
elemental núcleo
inclusión
Cuerpo
reticular

12. Complicaciones de la Chlamydia trachomatis
en la mujer
por orden de aparición:
1) Infección vaginal: Al inicio del contacto, portadora asintomática.
2) Cervicitis: Inflamación del cuello de la matriz por la infección.
3) Endometritis: Infección de la mucosa de la cavidad de la matriz.
4) Salpingitis: Inflamación de las trompas de Falopio.
5) Enfermedad Inflamatoria Pélvica (Linfogranuloma venéreo):
Infección de la cavidad peritoneal y estructuras anexas

13. Chlamydia trachomatis
En las mujeres embarazadas, si no es tratada la enfermedad
puede provocar partos prematuros.
Cérvix con secreción

14. Chlamydia trachomatis
La Chlamydia puede provocar en el hombre:
• Epididimitis (esterilidad).
• Linfogranuloma venéreo.
• Uretritis, cuyos síntomas son:
-Dificultad para orinar.
-Micción dolorosa.
-Sensación de orinar.
-Secreción del pene.
-Sensibilidad testicular.

15. Chlamydia trachomatis
En los niños la Chlamydia puede causar:
Conjuntivitis neonatal.
Neumonía temprana
Conjuntivitis purulenta
Rinitis
Vulvitis
Otitis
Rinofangitis

16. Manifestación clínica y Serotipos
Manifestaciones clínicas
Especie Serotipo Enfermedad
A,B,C Tracoma
Conjuntivitis
Uretritis
Cervicitis
Chlamydia tracomatis D,E,F,G,H,I,J Salpingitis
Endometritis
Epididimitis
Neumonía
Linfogranuloma
L1, L2, L3 venéreo

17. TECNICA DE PAPANICOLAOU
REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA(PCR)
ENSAYO INMUNOENZIMATICO (EIA)
INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA (DIF)

18. Citología
Para Shinna y Gupta, la imagen que da mayor sensibilidad diagnostica es
al inicio del ciclo celular, en la que se puede observar una fina
vacuolación del citoplasma en forma de mordidas de polilla o como
inclusiones nebulares, sumado a esto se puede observar una gran
presencia de polimorfonucleares

19. No se le considera positivo a presencia de Chlamydia

20. Reacción en cadena de la polimerasa
(PCR)
Técnica de biología molecular desarrollada en 1983 por
Kary Mullis. Bioquímico estadounidense que imita el
fenómeno de replicación del ADN que ocurre de
manera natural en las células vivas
Para llevar a cabo esta técnica los científicos aíslan el
fragmento que va a ser amplificado en un tubo de
ensayo y le aplican calor para separar las dos cadenas
de la molécula
La PCR utiliza una enzima llamada
Polimerasa para multiplicar rápidamente
el pequeño fragmento de ADN.
Termociclador

21. Ciclo de la PCR
Se divide en 3 fases:
1)Desnaturalización
Donde se calienta el ADN para separar las cadenas que lo forman
2)Templado
La temperatura de la mezcla se rebaja para que los cebadores o
fragmentos iniciadores del ADN se enlacen con las cadenas
separadas de esta molécula
3) Polimerización
La temperatura de la mezcla se eleva hasta los 75 °C para que la
polimerasa copie rápidamente la molécula de ADN

22. Ciclo de la PCR

23. Inmunoensayo enzimático (EIA)
• El fundamento de esta técnica consiste en que la Chlamydia
trachomatis cuando está presente en la muestra, se une al
anticuerpo monoclonal anti-LPS usado como el reactivo
detector presente en la placa comercial, formando un
complejo que se revela al adicionar el conjugado del
anticuerpo anti-inmunoglobulina humana con la peroxidasa y
posteriormente el sustrato de enzima.
• Se desarrolla un color amarillo a naranja en proporción a la
cantidad de antígeno presente en la muestra, por medio de
un detector espectrofotométrico.

25. Inmunofluorescencia (DIF)
• La inmunofluorescencia (DIF) es una técnica que emplea
anticuerpos conjugados a fluorocromos.
• Sobre un porta se deposita una muestra en la que se busca la
presencia de un determinado antígeno.
• Se añade un suero específico del antígeno problema marcado
con isotiocinato de fluoresceína (conjugado).
Detención de antígeno por Inmunofluorescencia Directa

26. Si el antígeno problema se encuentra presente en la
muestra, se une el conjugado. En caso contrario el
conjugado se elimina con un lavado del porta.
La lectura se realiza en un microscopio de fluorescencia,
que emite luz ultravioleta de una determinada longitud de
onda.

27. ESTUDIO

28. Material y métodos
Material biológico
• 2 muestras fueron tomadas a cada
una de las 125 mujeres
embarazadas al acudir a su
primera revisión medica
• Las muestras fueron tomadas con
un hisopo de algodón esterilizado
• Todos las muestras fueron
encontradas satisfactorias para su
evaluación citopatológica. De las
que 105 mostraban síntomas de la
infección y 20 no mostraban
ningún síntoma

29. Estudio citológico
El primer hisopo de algodón fue extendido en una laminilla
fue teñida usando la técnica de Papanicolaou y observada en
un microscopio de luz.
Se encontró:
Células de metaplasia infectadas con
Chlamydia que contenían múltiples o
sencillas inclusiones al interior del
citoplasma. Los cuerpos de inclusión
tenían una homogénea distribución de
apariencia nebular.
Además se observo una sustancial
cantidad de polimorfonucleares

30. •Células de metaplasia donde se observan múltiples inclusiones nebulares dentro del citoplasma
•el contorno de las vacuolas no está claramente definido.
•Polimorfonucleares.

31. •Inclusiones nebulares se observa al interior de la célula de metaplasia.
•Nucleos excentricos
•el contorno de la célula está bien definido.

32. Inmunoensayo enzimático (EIA)
• El segundo hisopo de algodón
fue puesto en el medio de
transporte incluido en el equipo
de EIA.
• Todas las muestras se probaron
para el antígeno según las
instrucciones incluidas en el
Detector de inmunoensayo
equipo
• La muestra fue considerada positiva si la densidad óptica
estuviera más allá del límite calculado usando un control negativo

33. Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
Termociclador
• 500 micro litros de la mezcla
preparada para EIA fueron tomados
y procesados.
• Fueron centrifugadas por 15
minutos a 4 C, se des-ionizó y se
lavaron por 10 minutos.
• Se volvió a centrifugar y se
incubaron a 54 C con proteinasa
por 10 minutos
Tubos de PCR

34. Inmunoflourescencia directa (DIF)
• Las muestras cuyos resultados difirieron
fueron testeados (probados) por DIF.
• Las muestras fueron analizadas con un
microscopio de fluorescencia.
• El criterio usado para determinar positivo a
Chlamydia fue la presencia de 5 o más
cuerpos elementales.
Una muestra fue considerada como
Verdadera positiva cuando 2 o más
de las técnicas de diagnostico
comparadas, demostraron la
presencia de Chlamydia

35. RESULTADOS

36. Detección De Chlamydia trachomatis
Grupo
Sintomáticas Asintomáticas
(112) (13)
Método Positivos Positivos Total positivos
Papanicolaou 2 2 4
EIA 11 1 12
PCR 2 1 3
sintomáticas asintomáticas
Papanicolaou EIA PCR NEGATIVAS Papanicolaou EIA PCR NEGATIVAS
2% 10% 2%
15% 8%
8%
69%
86%

37. Muestras Positivas para Chlamydia trachomatis
Por los 4 diferentes métodos
MUESTRA PAPANICOLAOU EIA PCR DIF
24
25
47
50
71
72
74
77
89
99
101
103
104
POSITIVO
NEGATIVO

38. Características sociales y demográficas de las
pacientes
• La edad promedio de las personas infectadas fue de 24 años
• 2 de las pacientes infectadas eran solteras
• Las pacientes eran sexualmente activas con una edad
promedio de 21 años
• 100% de los participantes estaban en el tercer trimestre de su
embarazo
• El número de embarazos promedio fue de 3
• El número promedio de parejas sexuales fue de 1
• El nivel socioeconómico promedio fue medio
• Solo una paciente tenia historia de ETS

39. Análisis Comparativo para la detección de Chlamydia por los 3
diferentes métodos
Positivos
Método Sensibilidad Especificidad Precisión
verdaderos
Papanicolaou 100 99.18 75 99.2
EIA 100 92.62 25 92
PCR 100 100 100 100

40. Hallazgos citológicos adicionales
Diagnostico citológico
Negativas 2
Cándida spp 17
Coco bacilar 5
Actinomyces spp 1
Proceso inflamatorio 96
chlamydia 4
Total muestras 125
80
70 Negativas 1.6%
60 Candida spp 13.6%
50
Cocobacilar 4.0%
40
Actinomyces spp 0.8%
30
20 Proc. Inflamatorio 76.8%
10 Chlamydia 3.2%
0
Porcentaje de casos

41. RESUMEN

42. En resumen, a pesar de que la técnica de Papanicolaou no es
considerada fiable para el diagnostico de la Chlamydia ésta
puede ser superior a el Inmunoensayo enzimatico y ofrecer un
diagnostico adecuado en mujeres embarazadas cuando la
muestra es satisfactoria para ser diagnosticada y es realizada
por citotecnólogos muy experimentados y calificados.
Por otra parte, PCR demostró ser la prueba diagnóstica con
mas especificidad y sensibilidad

43. Varios autores como, Geerling, Kapur y Waters no consideran a la
técnica de Papanicolaou lo suficientemente especifica debido a la
dificultad para diferenciar entre una real inclusión de
Chlamydia, de otros con características morfológicas o estructuras
parecidas, como núcleos degenerados, gránulos de lípidos, detritus
bacteriana.
Por consiguiente han sugerido que la Chlamydia es encontrada solo
en casos donde las inclusiones son de tipo nebular y no en las de
tipo de tiro al blanco, ya que estas representan material celular
amorfo, según Michelle Henry

44. En este estudio el tipo de inclusiones encontrados en las
muestras positivas fueron del tipo nebular y tales inclusiones
fueron encontradas en un número limitado
Esta observación es respaldada por varios investigadores
como Kellogg y Foster que han reportado que tales
inclusiones son muy frágiles y por lo tanto rara vez son
encontradas intactas

45. CONCLUSIÓN

46. La técnica de Papanicolaou y PCR son adecuadas pruebas
diagnosticas para la detección de Chlamydia trachomatis en
mujeres embarazadas. EIA no es una prueba diagnóstica
confiable

47. BIBLIOGRAFIA
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Chlamydia trachomatis in women by the Papanicolaou technique, enzime immunoassay and
polimerase chain reaccion. Acta Cytologica.2000. 44(2). 114-123
Henry M. Jensen K.Skoglund C. Armstrong D. Clamydia trachomatis in routine cervical
smears. A microscopic and ultrastructural analysis. Acta Cytologica. 1993. 37: 343-352
Reacción en cadena de la polimerasa. Microsoft® Student 2009 [DVD]. Microsoft Corporation, 2008.
Barnes. R. Infecciones causadas por Chlamydia trachomatis . Enfermedades de Transmisión
Sexual. Philadelphia , USA. Cap 6. 1999.
Murray P. Drew W. Kobayashi G. Thompson J. Microbiología médico 1ª edición Española 1992. p.
354-378.
Masson-salvat Diccionario medico.3ª edición. Barcelona: Salvat editores, S.A. 1971: p.45.
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Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 51: 203 -204. 2001

49. I go to Zacatecas to honey moon

50. Licha
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Christian

51. Mi regalo de bodas