1. РЕСПУБЛИКА КАЗАХСТАН
(19) KZ (13) A4 (11) 29968
(51) C12N 1/20 (2006.01)
C12R 1/23 (2006.01)
C12R 1/225 (2006.01)
МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ
(21) 2014/0551.1
(22) 21.04.2014
(45) 15.06.2015, бюл. №6
(72) Воробьев Александр Львович; Дудикова
Галина Николаевна; Чижаева Анна Викторовна;
Титова Ираида Владимировна; Амангелді Алма
Аманқос қызы; Велямов Масимжан Турсунович
(73) Республиканское государственное казенное
предприятие на праве хозяйственного ведения
"Восточно-Казахстанский государственный
технический университет им. Д. Серикбаева"
Министерства образования и науки Республики
Казахстан
(56) Патент РФ №2326938, 20.07.2007
(54) КОНСОРЦИУМ МИКРООРГАНИЗМОВ
LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS 4Ш1,
LACTOBACILLUS FERMENTUM 3Ш1 И
LACTOBACILLUS PONTIS 9K3,
ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ
ПРЕПАРАТА ПРОБИОТИЧЕСКОГО
ДЕЙСТВИЯ, ПРЕДНАЗНАЧЕННОГО ДЛЯ
ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕЧЕБНО-
ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ ПРОДУКТОВ И
БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ДОБАВОК
(57) Изобретение относится к биотехнологии, в
частности микробиологии, и представляет собой
консорциум штаммов лактобактерий для
приготовления кисломолочных лечебно-
профилактических продуктов, биологически
активных добавок и пробиотических препаратов.
Технический результат, обеспечиваемый
изобретением, выражается в создании консорциума
лактобактерий, обладающего повышенным сроком
хранения, более высоким начальным содержанием
живых микробных клеток и эффективными лечебно-
профилактическими свойствами при желудочно-
кишечных заболеваниях животных и птиц.
Штаммы консорциума Lactobacillus acidophilus
4Ш1 (КазНИИППП, №В-400), Lactobacillus
fermentum 3Ш1 (КазНИИППП, №В-404) и
Lactobacillus pontis 9К3 (КазНИИППП, №В-426),
выделены из кумыса и шубата и депонированы в
коллекцию микроорганизмов Казахского НИИ
перерабатывающей и пищевой промышленности
(КазНИИППП).
В результате экспериментов по
конструированию комбинированного пробиотика
был создан консорциум, обладающий
пробиотическим действием и депонирован в
коллекцию микроорганизмов КазНИИ
перерабатывающей и пищевой промышленности за
№В-486.
(19)KZ(13)A4(11)29968

2. 29968
2
Изобретение относится к биотехнологии, в
частности микробиологии, и представляет собой
консорциум штаммов лактобактерий для
приготовления кисломолочных лечебно-
профилактических продуктов, биологически
активных добавок и пробиотических препаратов.
Консорциум состоит из следующих штаммов:
Lactobacillus acidophilus 4Ш1, Lactobacillus
fermentum 3Ш1 и Lactobacillus pontis 9K3, взятых в
соотношении 1:1:1, и предназначен для получения
кисломолочных лечебно-профилактических
продуктов, биологически активных добавок и
пробиотических препаратов, которые могут быть
использованы в пищевой промышленности и
ветеринарии для профилактики и лечения
желудочно-кишечных заболеваний человека,
сельскохозяйственных животных и птиц.
Известен консорциум штаммов молочнокислых и
бифидобактерий Lactobacillus acidophilus КМ-2,
Lactobacillus acidophilus КН-1, Bifidobacterium
bifidum-1, используемый для приготовления
биологически активных добавок и заквасок для
производства кисломолочных продуктов
(Инновационный патент РК №25088, опубл.
14.04.2011).
Основным недостатком кисломолочных
продуктов, изготовленных на основе консорциума
штаммов бифидо- и лактобактерий, является
недостаточный срок их хранения (не более 1 месяца)
вследствие того, что лактобактерии в процессе
хранения продукта способствуют быстрому его
закислению. Титр бифидобактерий в закисленном
продукте быстро падает, что снижает лечебно-
профилактические свойства этого продукта.
Наиболее близким техническим решением -
прототипом - является консорциум штаммов
лактобактерий, содержащий Lactobacillus acidophilus
57S (ВКПМ В-5863), Lactobacillus plantarum П-75
(ВКПМ В-3962), Lactobacillus casei Сб (ВКПМ В-
5724), взятые в соотношении 2:0,5:0,5,
используемый для получения кисломолочных
лечебно-профилактических продуктов (Патент РФ
№2326938, опубл. 20.07.2007).
Однако срок хранения такого консорциума
штаммов лактобактерий в кисломолочных
продуктах составляет 30 дней, что недостаточно при
приготовлении биологически активных добавок в
жидкой форме.
Задачей изобретения является создание
консорциума микроорганизмов пробиотического
действия, используемого для приготовления
бактериальных препаратов и биологически
активных добавок для животных и птицы.
Техническим результатом настоящего
изобретения является тот факт, что заявляемый
консорциум является высокотехнологичным,
накапливает биомассу на питательных средах в
короткие сроки с высокой концентрацией
пробиотических микроорганизмов, обладает
кислотообразующими и антагонистическими
свойствами в отношении патогенной и условно-
патогенной микрофлоры. Синергидный эффект
совместного использования штаммов в консорциуме
проявляется в повышении всех перечисленных
свойств по сравнению с отдельными штаммами.
Штаммы консорциума Lactobacillus acidophilus
4Ш1 (КазНИИППП, №В-400), Lactobacillus
fermentum 3Ш1 (КазНИИППП, №В-404) и
Lactobacillus pontis 9К3 (КазНИИППП, №В-426),
выделены из кумыса и шубата и депонированы в
коллекцию микроорганизмов Казахского НИИ
перерабатывающей и пищевой промышленности
(КазНИИППП).
В результате экспериментов по конструированию
комбинированного пробиотика был создан
консорциум, обладающий пробиотическим
действием и депонирован в коллекцию
микроорганизмов КазНИИ перерабатывающей и
пищевой промышленности за №В-486.
Штаммы микроорганизмов, входящие в состав
консорциума, не являются антагонистистами в
отношении друг друга, что позволяет их совместно
культивировать.
Изобретение позволяет получить консорциум с
устойчивым соотношением гомоферментативных и
гетероферментативных культур, высоким
содержанием живых микробных клеток, титруемой
кислотностью, антагонистической активностью,
широким спектром продуцируемых органических
кислот в получаемом препарате.
Предлагаемый консорциум обладает высокой
активностью в отношении патогенов, что позволяет
использовать его для приготовления пробиотиков и
биологически активных добавок. Установлено, что
при совместном культивировании указанных выше
микроорганизмов проявляется синергический
эффект.
Штаммы Lactobacillus acidophilus 4Ш1,
Lactobacillus fermentum 3Ш1 и Lactobacillus pontis
9K3, входящие в состав консорциума, обладают
высокой кислотообразующей активностью,
биохимической и антагонической активностью, т.е.
способностью влиять на возбудителей кишечных
заболеваний, что гарантирует подавление в
кишечнике патогенных микроорганизмов и
нормализацию его микрофлоры.
Данные штаммы отбирались путем скрининга
культур молочнокислых бактерий по параметрам
культивирования на среде МРС - таких как
антагонистическая активность, энергия
кислотообразования, титр клеток, устойчивость к
антибиотикам.
В процессе селекционной работы создали
консорциум микроорганизмов, обладающий
следующими микробиологическими и
биохимическими показателями:
1. При росте на среде МРС консорциум имеет
высокий суммарный титр (не менее 1012
КОЕ/г).
2. При пересевах на питательной среде МРС
консорциум способен сохранять свои свойства не
менее 10 пассажей.
3. Консорциум обладает высокими
антагонистическими свойствами - диаметр зоны
угнетения роста В. subtilis 18 мм (таблица 1).

3. 29968
3
Таблица 1
Физиолого-биохимическая характеристика консорциума
Показатели культивирования Характеристика консорциума
Титруемая кислотность,°Н 38,2±2
Активная кислотность, pH 4,8±1
Антагонистическая активность, диаметр зоны подавления
роста В. subtilis, мм 14±4,1
Культурально-морфологические и физиолого-
биохимические признаки микроорганизмов,
входящих в состав консорциума:
Штамм Lactobacillus pontis 9К3 выделен из
кумыса. Аэро-толерантный анаэроб, обладает
высокой кислотообразующей способностью
(титруемая кислотность 23,6±1,8 град) и
антагонистической активностью по отношению к
спорообразующей микрофлоре (диаметр зоны
подавления роста В. Subtillus - 16±1,5 мм). В той или
иной мере чувствителен к антибиотикам. Устойчив
к 6% NaCl. Не обладает протеолитической
активностью.
Клетки в виде палочек средних размеров
3-6 мкм, расположенные одиночно или в виде
коротких цепочек. Колонии средней величины,
куполообразные, белые. При неблагоприятных
условиях форма клеток более вытянутая. Продукт,
синтезируемый штаммом D, L- молочная кислота.
Среда для культивирования - МРС, молочный
гидролизат агаризованный.
Штамм Lactobacillus acidophilus 4Ш1 выделен из
шубата. Палочки размером 3-5 мкм, расположены
попарно, короткими цепочками, неподвижные, спор
не образуют. На поверхности агара с
гидролизованным молоком образует гладкие
беловатые колонии S-формы диаметром 2-3 мм.
Продукты, синтезируемые штаммом – D, L -
молочная кислота, бактериоцины. Среда для
культивирования - среда МРС, среда №10,
молочный гидролизат агаризованный, обезжиренное
молоко, температура культивирования 35-37°С.
Титруемая кислотность 38,8±1,8 град, зона
протеолиза на молочном агаре 4±1 мм; зона
подавления роста В. subtilis составляет 14±1,6.
Устойчив к канамицину. Не растет на средах с 6%
NaCl. Тест на каталазу - отрицательный.
Штамм Lactobacillus fermentum 3Ш1 изолирован
из шубата. Палочки размером 3-5 мкм, расположены
попарно, короткими цепочками, неподвижные, спор
не образуют. На поверхности агара с
гидролизованным молоком образует гладкие
беловатые колонии S-формы диаметром 2-3 мм.
Продукты, синтезируемые штаммом - D, L -
молочная кислота, бактериоцины. Среда для
культивирования - среда МРС, среда №10,
молочный гидролизат агаризованный, обезжиренное
молоко, температура культивирования 35-37°С.
Титруемая кислотность 28,8±1,5 град; зона
протеолиза на молочном агаре отсутствует; зона
подавления роста В. subtilis составляет 17±0,2. Не
растет на средах с 6% NaCl. Тест на каталазу –
отрицательный.
Культуры консорциума сохраняют в
лиофилизированном виде в ампулах при минус
30±2°С или под вазелиновым маслом в пробирках со
средой МРС-агар.
Пример использования консорциума для
приготовления препарата пробиотического
действия:
Получение консорциума осуществляют в два
этапа:
1. Приготовление жидкой биомассы
консорциума.
Чистые культуры Lactobacillus acidophilus 4Ш1,
Lactobacillus fermentum 3Ш1 и Lactobacillus pontis
9K3 в соотношении 1:1:1 вносят в питательную
среду МРС. Термостатируют при температуре
35±2°С в течение 24 часов до титруемой
кислотности 20 град Неймана. Полученный
консорциум используют для приготовления
пробиотического препарата.
2. Приготовление пробиотического препарата.
Пробиотический препарат готовят путем
смешивания 25 мл жидкой биомассы консорциума с
500 мл зерновой питательной среды, помещают в
термостат для заквашивания при температуре
35±2°С на 24 часа и получают готовый продукт.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Консорциум микроорганизмов (КазНИИППП,
№В-486), состоящий из штаммов Lactobacillus
acidophilus 4Ш1 (КазНИИППП, №В-400),
Lactobacillus fermentum 3Ш1 (КазНИИППП,
№В-404) и Lactobacillus pontis 9К3 (КазНИИППП,
№В-426), содержащихся в соотношении 1:1:1,
используемый для приготовления препаратов
пробиотического действия.
Верстка Н.Киселева
Корректор К.Нгметжанова