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Genotypic study documents divergence in the pathogenesis of bloodstream infection related central venous catheters in neonates
1. Danny Arroyave Zuluaga
Estudiante de III semestre, Medicina
Universidad Pontificia Bolivariana
2. Morphologically Staphylococcus are gram-positive
cocci.
It grows best in the middle mannitol salt
agar and blood.
It is a facultative anaerobic coco.
Producing catalase.
Has medical significance especially S.
aureus, and human addition to it, the S.
saprophyticus and S. epidermidis.
3. Consisting of Gram-positive cocci.
Grows by aerobic respiration.
We can found in the skin of humans and
animals and mucous membranes.
It is sensitive to the antibiotic novobiocin.
4. It is used to determine the genetic
information of an organism, or genotype, and
to distinguish it from the rest.
Viruses or bacteria: extension pathogen-associated
gene characterization diseases.
Human: paternity tests to determine the
existence of kinship.
5. Genotyping can be applied in this case, since
you have to investigate the genetic
information in order to know the genus and
species of the organism, and it is also
important to know that disease can be
associated and patient treatment.
6. To investigate the pathogenesis of
bloodstream infection by Staphylococcus
epidermidis, using the molecular
epidemiology, in high-risk neonates.
7. Sólo se incluyeron 63 de 318 neonatos, de forma
aleatoria.
Sólo neonatos de alto riesgo.
Que tuvieran un CVC por mas de 24h.
Por cada 1000 catéteres, el 15.1 presentaban la
infección, y el 12.6 de los neonatos pesaban
menos de 1500g.
La tasa de mortalidad fue diferente en los
neonatos que tenían un peso menor a 1500g.
8. Catéter Característica
Umbilical Permite tomar sangre de un bebé
en diferentes momentos
Flebotomía
Es la extracción de sangre desde
una vena periférica.
PICC
(Catéter central de inserción
periférica)
Es una forma de acceso
intravenoso que se puede utilizar
durante un período prolongado
de tiempo.
9. Se obtuvieron muestras de sangre de PICC.
Se realizaron hemocultivos con 1.0ml de sangre
del paciente.
Los cultivos que dieron un resultado positivos se
subcultivaron adicionalmente en placas con agar
sangre.
Se determino su pureza y se observar su
morfología y color específico.
10. Las cepas fueron sometidas a pruebas de
catalasa y coagulasa para determinar la
especie.
Los análisis moleculares se realizaron en
Staphylococcus coagulasa negativa.
Se utilizó el sistema RapID STAPH PLUS
(Oxoid) para confirmar su identidad.
11. Son reacciones que amplifican
simultáneamente diferentes secuencias
diana.
Nos permite la detección e identificación
simultanea de distintos genes de interés.
12. Es una técnica de electroforesis en gel de
campo pulsado que permite la resolución de
grandes fragmentos de ADN que no pueden
ser resueltos por electroforesis en gel
convencional.
13. mecA: Le permite a una bacteria la resistencia
a los antibióticos, tales como la meticilina,
penicilina y otros antibióticos similares.
icaAD: Produce una biofilm la cual le da una
multiresistencia a la bacteria
14. Pte 1
Pte 2
Pte 3
Pte 4
Pte 5(negro)
Pte 6
Fig. 1.
Dendogram of genotypic strains of Staphylococcus
epidermidis after fragmentation with restriction enzyme
SmaI and computer analysis of PFGE
15. AUTHOR WHAT DID HE SAY? THEY ARE AGREE? YES
OR NOT
Garland et al...
2008
“Most catheter-related
BSIs in neonates with
PICCs are caused by
CoNS and derive from
intraluminal
contamination”
NO
Mahieu et al..
2001
“Certain manipulations
and disconnection of the
central venous catheter,
which necessitates
disinfection of the
catheter hub, increase
the risk of CABSI, while
other, protect against
CABSI in neonates.
YES
16. 1. Even knowing that it must have a very
good asepsis in these procedures, do not
respect, and something that can cause an
alteration in patients, and therefore the
results.
2. You have to study very well by other adults
and infants, because the pathogenesis is
very different, and the sources of infection
of the CVC can be very different.
17. 3. The study CVC used by phlebotomy, and we
know that this type of puncture presents high
risks of infection and can cause other diseases,
having other ways like PICC having a much
higher margin of safety should be used these to
a study of more reliable results.
4. It must be quickly identified as the mecA gene
and icaAD as to generate a resistance to
antibiotics, are decreasing the chance of survival
of the patient, and increasing the time of
treatment, therefore, cost.
Notas do Editor
2- esto puede llegar a dar problemas en el corazón ó hígado, tales como la perdida de un hígado.
3-esto significa que puede crecer tanto en condiciones con oxígeno como carente de éste.
4-, lo que los diferencia de los estreptococos
6-un concepto que lo distingue de otros organismos comunes de coagulasa negativa como S. saprophyticus.
Debido a contaminación, S. epidermidis es probablemente la más común especie hallada en análisis de laboratorio.
localizando el origen de los focos de infección
5-La tasa de mortalidad global fue del 13,5%, y en los recién nacidos con bajo peso fue del 16,1%
Umbilical:sin necesidad de punciones repetitivas con aguja
Flebotomia: extraccion de sangre desde una vena periferica
PICC: es una forma de acceso intravenoso que se puede utilizar durante un período prolongado de tiempo (por ejemplo, para los regímenes de quimioterapia, terapia de largo antibiótico prolongado, o nutrición parenteral total). es una alternativa a los catéteres venosos centrales, tales como líneas, líneas subclavia yugular interna o líneas femorales, que tienen las tasas más altas de infección - subclavia y colocaciones de vías yugulares pueden dar lugar a un neumotórax (aire en el espacio pleural de pulmón), mientras que las líneas PICC no tienen ese problema debido al método de colocación.
Los aislamientos obtenidos a partir de muestras clínicas se inocularon en agar sangre y Gram-tiñeron con el fin de determinar su pureza y observar su morfología y color específico. Después de determinar estas características, las cepas fueron sometidas a pruebas de catalasa y coagulasa.
Para identificar S. epidermidis, se utilizaron las pruebas descritas por Bannerman 23 y MacFaddin 24: producción de factor de coagulasa ligada ("agrupamiento") y la producción de coagulasa libre de hemólisis, enzima arilamidasa pirrolidonilo, la ureasa, la ornitina descarboxilasa, novobiocina y fermentación de la susceptibilidad los hidratos de carbono manitol, manosa y trehalosa. Los análisis moleculares se realizaron en Staphylococcus coagulasa negativo utilizando el sistema RapID STAPH PLUS (Oxoid) para confirmar su identidad.
El procedimiento implica la aplicación de campos eléctricos controlados que cambian de dirección en un ángulo predeterminado a las muestras de ADN que se han incrustado en una matriz de gel de agarosa y digerido con una endonucleasa de restricción. Ajuste de las condiciones de electroforesis permite la separación de fragmentos de ADN con longitudes de 10 kilobases hasta megabases 9 de una manera dependiente del tamaño en geles de agarosa. Los patrones de bandas se pueden utilizar para la tipificación epidemiológica, el ADN separado puede ser inmovilizado sobre una membrana y se utiliza para el mapeo genético, o fragmentos individuales puede ser extraído y utilizado para manipulaciones genéticas aguas abajo. El protocolo requiere equipo especializado y se puede completar en un máximo de 7 días.
Cebador: primer, es una cadena de ácido nucleico o de una molécula relacionada que sirve como punto de partida para la replicación delADN.
Los resultados de los análisis de ADN de S. epidermidis aislados por PFGE se resumen en la figura. 1. No se observó ninguna relación temporal. Macrorestriction análisis de ADN identificado la presencia de un clon prevalente en la unidad (clon A). Entre 12 aislamientos analizados, se observaron 8 patrones de PFGE. Tipo PFGE A fue positivo para los genes mecA y icaAD. En sólo un paciente se detectó el mismo clon (A) en la sangre y en la punta del CVC. Se observaron diferentes perfiles de clones de cepas en pacientes colonizados e infectados, y en CVC de algunos pacientes. Entre las muestras sensibles que no portan el gen icaAD, se observó un perfil policlonal sin tipos predominantes. Un clon estaba relacionada con las mismas muestras recuperadas de la sangre y CVC punta de la paciente (Tabla 4).
1-in our study with neonates, considering the genotypic analysis, we demonstrated that most BSI was indetermined and only one was from a confirmed extraluminal source
2-these procedures were not adhered to resulting again in an increase in infection rates, thus reinforcing the importance of measures to control and prevent infection at the unit.