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Desde la prehistoria, el hombre ha seleccionado y mejorado
 especies vegetales, animales y microbianas basándose en el
    fenotipo. Las mejoras genéticas eran posible gracias a la
 variabilidad genética, a la heredabilidad del carácter que se
      quería aislar, a la eficacia e intensidad de la selección
    aplicada, y al tiempo necesario para realizar un ciclo de
         selección. Sin embargo, quedan muchos aspectos
   desconocidos, como son el número y efecto de los genes
 implicados en la expresión de un carácter, la localización de
        estos genes, y su función fisiológica. Por otra parte, la
taxonomía siempre ha estudiado características morfológicas,
       lo cual requiere observaciones muy exhaustivas de los
  organismos en diferentes estadios de desarrollo. Los criterios
 utilizados carecen muy a menudo de definición y objetividad
 y, en cualquier caso, son marcadores ambiguos debido a las
                        influencias ambientales
son biomoléculas que se pueden relacionar con un rasgo
   genético. Las biomoléculas que pueden ser marcadores
moleculares son las proteínas (antígenos e isoenzimas) y el DNA
   (genes conocidos o fragmentos de secuencia y función
                        desconocida).

     Cuando varios marcadores moleculares se asocian
inequívocamente con un rasgo genético, se dice que forman
    un QTL (loci de rasgos cuantitativos o cuantificables).

Un marcador molecular monomórfico es invariable en todos los
organismos estudiados, pero cuando presenta diferencias en el
  peso molecular, actividad enzimática, estructura, o sitios de
  restricción, se dice que es polimórfico. A veces el grado de
        variación es tal que se denominan hipervariable.
 Los primeros marcadores desarrollados a finales de los 70 se
   basaron en la identificación de proteínas e isoenzimas por
 electroforesis en geles de almidón o poliacrilamida. Con ellos
  se abrió el conocimiento de la estructura y heterogeneidad
 genética entre diferentes especies, variedades, y poblaciones
   de distinto origen geográfico. Pero esta técnica tenía una
     limitación muy importante: no era capaz de detectar
 suficiente polimorfismo entre variedades o especies próximas
   debido a que las proteínas son el resultado de la expresión
 génica, que puede ser distinta de unos tejidos a otros, de una
  etapa de desarrollo a otra, de un medio ambiente a otro, y
                   de una época del año a otra.
PCR
(Reacción en Cadena
   de la Polimerasa)
RFLP (Polimorfismo en el
tamaño de los fragmentos
      de restricción).
                                              En cambio, para moléculas de DNA
                                                de mayor tamaño, como el DNA
                                             cromosómico, el patrón de bandas es
                                             tan complejo que es necesario utilizar
                                             sondas específicas para visualizar sólo
                                                 ciertos fragmentos mediante la
                                              técnica de Southern Blot. Las sondas
                                                de DNA para esta técnica suelen
                                               corresponder a genes previamente
                                              conocidos, aunque a veces se usan
se basa en la detección de fragmentos              DNA preparados a partir de
 de DNA de distinto peso molecular en             amplificaciones inespecíficas.
 diferentes organismos. Los fragmentos
      más fáciles de analizar son los
pequeños derivados de la digestión del
    genoma de las mitocondrias o los
 cloroplastos, puesto que delecciones,
  sustituciones o mutaciones pueden         Aunque la RFLP evalúa sólo un tipo de
 alterar significativamente el patrón de        polimorfismo en cada ensayo, el
 bandas identificable por electroforesis    resultado es muy preciso. Los primeros
en geles de agarosa, donde migran de           mapas genómicos basados en la
    acuerdo con su peso molecular.         distribución física de los genes en vez de
                                             la frecuencia de entrecruzamiento se
                                           hicieron utilizando esta técnica. Cuando
                                             se emplea la PCR en lugar de sondas
                                                   radiactivas para visualizar los
                                           polimorfismos, se le denomina PCR-RFLP
Se usa una
                                            colección de
                 RAPD (DNA                decanucleótidos
                                         para amplificar por
                 polimórfico                  PCR áreas
              amplificado al azar)           específicas
                                         distribuidas al azar
                                           por el genoma



MAAP
(Múltiples                            La idea es similar a la
                                           de la RAPD,
 perfiles       AP-PCR (PCR con      desarrollándose a la vez
                                      que ésta, aunque se
arbitrarios     oligonucleótidos
                                     cambia el diseño de los
                    arbitrarios)
   de                                 oligonucleótidos y el
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amplifica
  ción)                                  combina el uso de
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                                         y oligonucleótidos
                                        para PCR, de manera
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               de la longitud de             marcadores
                                          moleculares muy
                los fragmentos              específicos sin
                 amplificados)              necesidad de
                                        conocer la secuencia
                                          con anterioridad
aprovecha las secuencias conocidas, únicas dentro del genoma, para amplificarlas
  por PCR. El polimorfismo se suele encontrar fácilmente cuando lo que se amplifican son
  intrones en lugar de exones. La ventaja principal es la velocidad con la que se pueden
     realizar los análisis una vez que las parejas de oligonucleótidos se han establecido
                                           claramente.




                                                                      CAPS (Secuencia
SSR (Repetición de                    EST (Sitios
                                                                        polimórfica
    secuencias                   etiquetados por la
                                                                       amplificada y
     discretas)                      expresión)
                                                                         cortada)

SCAR (Regiones
                                    D/TGGE (Geles de               SSCP (Polimorfismo de
  amplificadas
                                electroforesis en gradiente          conformaciones
caracterizadas y                desnaturalizante/térmico)            monocatenarias)
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Trabajo colaborativo n.1 biotecnologia 1 grupo 2

  • 1.
  • 2. Desde la prehistoria, el hombre ha seleccionado y mejorado especies vegetales, animales y microbianas basándose en el fenotipo. Las mejoras genéticas eran posible gracias a la variabilidad genética, a la heredabilidad del carácter que se quería aislar, a la eficacia e intensidad de la selección aplicada, y al tiempo necesario para realizar un ciclo de selección. Sin embargo, quedan muchos aspectos desconocidos, como son el número y efecto de los genes implicados en la expresión de un carácter, la localización de estos genes, y su función fisiológica. Por otra parte, la taxonomía siempre ha estudiado características morfológicas, lo cual requiere observaciones muy exhaustivas de los organismos en diferentes estadios de desarrollo. Los criterios utilizados carecen muy a menudo de definición y objetividad y, en cualquier caso, son marcadores ambiguos debido a las influencias ambientales
  • 3.
  • 4. son biomoléculas que se pueden relacionar con un rasgo genético. Las biomoléculas que pueden ser marcadores moleculares son las proteínas (antígenos e isoenzimas) y el DNA (genes conocidos o fragmentos de secuencia y función desconocida). Cuando varios marcadores moleculares se asocian inequívocamente con un rasgo genético, se dice que forman un QTL (loci de rasgos cuantitativos o cuantificables). Un marcador molecular monomórfico es invariable en todos los organismos estudiados, pero cuando presenta diferencias en el peso molecular, actividad enzimática, estructura, o sitios de restricción, se dice que es polimórfico. A veces el grado de variación es tal que se denominan hipervariable.
  • 5.  Los primeros marcadores desarrollados a finales de los 70 se basaron en la identificación de proteínas e isoenzimas por electroforesis en geles de almidón o poliacrilamida. Con ellos se abrió el conocimiento de la estructura y heterogeneidad genética entre diferentes especies, variedades, y poblaciones de distinto origen geográfico. Pero esta técnica tenía una limitación muy importante: no era capaz de detectar suficiente polimorfismo entre variedades o especies próximas debido a que las proteínas son el resultado de la expresión génica, que puede ser distinta de unos tejidos a otros, de una etapa de desarrollo a otra, de un medio ambiente a otro, y de una época del año a otra.
  • 6.
  • 7. PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa)
  • 8. RFLP (Polimorfismo en el tamaño de los fragmentos de restricción). En cambio, para moléculas de DNA de mayor tamaño, como el DNA cromosómico, el patrón de bandas es tan complejo que es necesario utilizar sondas específicas para visualizar sólo ciertos fragmentos mediante la técnica de Southern Blot. Las sondas de DNA para esta técnica suelen corresponder a genes previamente conocidos, aunque a veces se usan se basa en la detección de fragmentos DNA preparados a partir de de DNA de distinto peso molecular en amplificaciones inespecíficas. diferentes organismos. Los fragmentos más fáciles de analizar son los pequeños derivados de la digestión del genoma de las mitocondrias o los cloroplastos, puesto que delecciones, sustituciones o mutaciones pueden Aunque la RFLP evalúa sólo un tipo de alterar significativamente el patrón de polimorfismo en cada ensayo, el bandas identificable por electroforesis resultado es muy preciso. Los primeros en geles de agarosa, donde migran de mapas genómicos basados en la acuerdo con su peso molecular. distribución física de los genes en vez de la frecuencia de entrecruzamiento se hicieron utilizando esta técnica. Cuando se emplea la PCR en lugar de sondas radiactivas para visualizar los polimorfismos, se le denomina PCR-RFLP
  • 9. Se usa una colección de RAPD (DNA decanucleótidos para amplificar por polimórfico PCR áreas amplificado al azar) específicas distribuidas al azar por el genoma MAAP (Múltiples La idea es similar a la de la RAPD, perfiles AP-PCR (PCR con desarrollándose a la vez que ésta, aunque se arbitrarios oligonucleótidos cambia el diseño de los arbitrarios) de oligonucleótidos y el tipo de PCR. amplifica ción) combina el uso de enzimas de restricción y oligonucleótidos para PCR, de manera AFLP (Polimorfismo que se obtienen de la longitud de marcadores moleculares muy los fragmentos específicos sin amplificados) necesidad de conocer la secuencia con anterioridad
  • 10. aprovecha las secuencias conocidas, únicas dentro del genoma, para amplificarlas por PCR. El polimorfismo se suele encontrar fácilmente cuando lo que se amplifican son intrones en lugar de exones. La ventaja principal es la velocidad con la que se pueden realizar los análisis una vez que las parejas de oligonucleótidos se han establecido claramente. CAPS (Secuencia SSR (Repetición de EST (Sitios polimórfica secuencias etiquetados por la amplificada y discretas) expresión) cortada) SCAR (Regiones D/TGGE (Geles de SSCP (Polimorfismo de amplificadas electroforesis en gradiente conformaciones caracterizadas y desnaturalizante/térmico) monocatenarias) secuenciadas)
  • 11. Es de urgencia para el país apostarle a una Política de Nación de Ciencia y de Tecnología, que identifique los nichos de conocimiento a ocupar, y promueva la adquisición de infraestructura necesaria y la formación de recursos humanos con capacidad de investigar, desarrollar y aprovechar tecnologías que ayuden a mejorar la calidad de vida de los colombianos.