1. Overexpression and purification of GST, DP4A, and MBP
趙朝欽
長榮大學生物科技學系
指導老師：鄭宏祺 老師
成功大學
生物化學暨分子生物學系研究所
摘要：
本實驗主要是進行GST、DP4A和MBP的純化，在鄭老師的實驗室中，這三個蛋白質經常被使用在學長姊的實驗中，所以
當實驗有需要的時候，學長姐就會動手開始純化製備足量的protein來進行實驗。
一個完整的蛋白質純化實驗要先由製作一段plasmid開始，plasmid製備好了以後要再進行transfer的步驟，成功之後就可以把
這些菌出來並留作stock，上述所有步驟都完成了之後，就可以開始大量養菌並且開始進行純化，純化方式是利用beads和
protein之間的親和性，在lysate通過beads的時候會因此被抓住，之後再利用親和性更高的東西將protein從beads上抓下來，
最後純化出來的protein再進行Bio-red和SDS-PAGE定量，確認是否有純化出所需要的protein和protein的濃度。
實驗步驟：
養菌 Induction 破菌 Beads純化 Elute SDS-PAGE
實驗結果：
 GST純化結果（26 kDa）
M B W A 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 M W A 1 2 3 4 5 6 7 M B W A 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
第一管：5.83 mg /ml 第一管：5.09 mg /ml 第一管：2.55 mg /ml
第二管：6.31 mg /ml 第二管：7.90 mg /ml 第二管：3.19 mg /ml
第三管：1.24 mg /ml 第三管：0.86 mg /ml 第三管：1.67 mg /ml
 DP4A純化結果
M B W A 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 M B W A 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
第一管：0.29 mg /ml 第一管：0.21 mg /ml
第二管：0.61 mg /ml 第二管：0.47 mg /ml
 MBP純化結果（42 kDa）
A 1 2 3 4 5 6 7 8 M B A 1 2 3 4 5 6 A 1 2 3 4 5 M
第一管：0.4 mg /ml 第一管：0.6 mg /ml 第一管：0.8 mg /ml
第二管：0.7 mg /ml 第二管：0.8 mg /ml 第二管：0.4 mg /ml
第三管：0.6 mg /ml
結論：
1. 整體來說純化的protein濃度較高的都會集中在前面三管，後面的sample因為beads上的protein都已經被elute掉了，所以濃度會
逐漸的降低。
2. GST純化的效果最好原因可能是因為純化GST用的beads是全新的，所以beads的親和性還很強可以抓到很多protein，而且beads
裡面也沒有什麼雜質會影響beads和protein之間的結合，所以GST的純化效果和純化速率遠比DP4A和MBP好很多。
致謝：
感謝學校提供實習的機會可以讓我到學校以外的地方學到新的東西；也感謝鄭宏祺老師的指導和生化所所有學長姊的教學和幫
住，有大家的不斷持續的教導實驗才能順利的完成，感謝大家。