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AVANCES EN EL ESTUDIO DEL 
 AVANCES EN EL ESTUDIO DEL
VANEAMIENTO DEL ARROZ EN 
        COLOMBIA
        Fitopatología de 
           Arroz‐CIAT
       Agosto 30 de 2011
        g
Añublo bacterial de la panícula del arroz
                       p

   Años 50” en Japón.
  1995‐1996 :China, Taiwán, Corea, India, Filipinas y 
Tailandia. 
  1996 2005: Lousiana y otras regiones arroceras del sur 
  1996‐2005: Lousiana y otras regiones arroceras del sur
Estados Unidos. 
  2006  Panamá.
  2010 Republica Dominicana recientemente en Costa
        Republica Dominicana, recientemente en Costa 
Rica, Nicaragua y Venezuela.
  1989 Colombia (baja incidencia).
  2007 Montería (Córdoba).
  2011 (13 departamentos).  
Periodo más susceptible a la infección 




                                     B. glumae
         Emergencia de la Panícula
Condiciones de invernadero
No es común en campo




                                           B. glumae




                   3‐5 DDI       14 DDI
Detección de B. glumae y B. gladioli, mediante
    PCR  en zonas  arroceras de Colombia.
    PCR en zonas arroceras de Colombia
                                                              Identificación  (PCR)1
                 Dpto               Localidades
                                                           B. glumae              B. gladioli
              Antioquia                    1                  22/13                  22/03
              Atlántico                    1                   1/0                    1/0
               Bolívar                     3                   5/4                    5/0
              Casanare                     1                   7/5                    7/0
               Cauca
               C                           1                   1/0                    1/0
                Cesar                      3                  22/16                   15/6
              Córdoba                      4                  21/16                   21/1
                 Huila                     3                   15/8                   14/1
               Meta                        8                  83/34                  68/11
             Santander                     1                   1/1                    NT
               Sucre                       1                   5/2                    5/0
                Tolima                    17                   /
                                                            160/102                 129/23
                                                                                       /
           Valle del Cauca                 4                 165/61                  83/14
                                                                                    351/56 
                 Total                    48          488/259 (53.0%4)
       1 Reacción en Cadena de la Polimerasa                                       (15.9%4)
                                            . 
       2 No total de muestras  analizadas. 

       3 No de muestras positivas

       4   Porcentaje de  muestras positivas por departamento,  para cada una de las especies
Colonias típicas de Burkholderia
                                              p
          horas de incubación)
Kim‐B, 48 h




                                   0.6 mm de diámetro                     1.6 mm de diámetro
                                   Elevación: Convexas                    Elevación: Pulvinatas
                                   Halo pronunciado                       Halo poco pronunciado
                                   Márgenes irregulares (mayoría de       Márgenes regulares
                                 veces)                                   Rango de producción de pigmento
                                   Producción de pigmento (no-          (Amarillo pálido, ligeramente intenso, muy
                                 pigmentadas-pigmentadas (ligeramente   intenso)
                                 intenso).
Frecuencia de especies de
   Frecuencia de especies de Burkholderia
      en muestras de semillas de arroz 
                                    B. glumaed                               B. gladiolid

                          No. de                                   No. de      No de
  Tipo de síntoma                      No de muestras
                        muestras                           (%)   muestras     muestras      (%)d
                                          positivas
                        evaluadas                                evaluadas    positivas


Grano decolorado a         188               160          85.1     160           34         21.3

Grano manchado b            87               26           29.9      78           11         14.1

 Asintomáticas c           213               73           34.3     113           11         9.7
       Total               488               256                   351           56

   a Síntomas  típicos causados por Burkholderia .
   b Síntomas comúnmente causado por Pseudomonas fuscovaginae
   c Semilla sin síntomas evidentes
   d Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR)
Comparación de la secuencia de B. gladioli con  
secuencias disponibles en el GenBank utilizando
secuencias disponibles en el GenBank utilizando 
                   BLASTN.




                                                                                                               No de Accesión
                                                                            Homología (Acc. No)    Cepa     (publicada GenBank)

  El análisis de secuencia de los productos de PCR de 4 cepas B gladioli,    98%(EF552070.1)      3704-18        JF323578
mostro homologías (98‐100%) con otras secuencias de B. gladioli ya
          h     l í (98 100%)                       i d       l di li        99%(EF552070.1)      4228-2         JF323579
reportadas en el Genbank.
                                                                             98%(EF552070.1)      4194-4         JF323580

                                                                             100%(EF552070.1)     3848s-5        JF323581
Pruebas de patogenicidad

                                                                           4 panículas por cepa
                                                                           4 panículas por cepa
                                                                           5mL por panícula


     Cultivo puro
             p          OD=0,2 (10‐8 Ufc/ml)
                        OD 0,2  (10 8 Ufc/ml)




                                                      ‐Conteo de granos 
                                                      enfermos y totales
                                                               y
                                                      ‐Porcentaje de granos 
                                                      enfermos


24h de Incubación en               14 DDI (B. glu) 
Cámara de inoculación              30 DDI (B. gla) 
Reproducción de síntomas en invernadero 
               p
         en etapa de floración. 




B. glumae                             B. gladioli




            14 DDI         30 DDI  

                           COL XXI
Vaneamiento > 90%
     B. glumae




                     Vaneamiento < 30 %
                     Vaneamiento < 30 %




B. gladioli

                   Grano decolorado con
                 manchas color chocolate
                 oscuras que pueden cubrir
                 las glumas completamente
Efecto de la infección por B. glumae y
        B. gladioli en el rendimiento 
        B gladioli en el rendimiento
       (Condiciones de invernadero)
                                                                    Daño           Peso de semilla                 Contenido de Humedad  
 Especie          Cepa          Rango de pigmento
                                                                     (%)            (100 granos)                       (14%) (0.05gr)
B. glumae 3200‐12 Ligeramente intenso                              93.8 a                  0.58 b                         0.60 b 
            3704‐18    Amarillo pálido                             73.1 bc                  2.1 a                         1.91 a
             4228‐2     Muy intenso                                55.7 c                  2.2 a                          2.26 a
B. gladioli
             4194‐4     Muy intenso
                           y                                       79.6 ba                 2.37 a                         2.44a
            3848s‐5 Ligeramente intenso                            78.7 ba                 2.26 a                         2.31a
  Control (Col XXI)                                                  0                     2.36 a                         2.46a
  Letras distintas en una misma columna indican diferencias entre los promedios, según la prueba de Duncan (p<0.05).




                                2 y 4 semanas después de la inoculación de 
                                 B. glumae y B. gladioli, respectivamente.
EVALUACION DEL COMPORTAMIENTO DE
CULTIVARES DE ARROZ ANTE EL AÑUBLO
BACTERIAL DE LA PANICULA CAUSADA
POR Burkholderia glumae EN COLOMBIA
Materiales y métodos
→Siete genotipos de arroz seleccionadospor su 
reacción a B. glumae en condiciones de campo 
              g                           p
(Montería).

→Nueve cepas de B. glumae representativas de las 
→N             d B l                   t ti d l
diferente grupos genéticos encontrados en estudios 
previos de diversidad de la bacteria. 

→Se inocularon 4 panículas por genotipo con 3 
repeticiones en el tiempo. 
  p                    p

→Las evaluaciones se hicieron a los 14 DDI, teniendo 
que para calcular el  % de daño  se  relaciono el No. de 
            l l    l %d d ñ            l i      lN d
semillas afectadas / No. de semillas totales. 
Respuesta de 7 genotipos de arroz 
       evaluados en campo para B. glumae
          l d                  B l
               (Montería, 2010).
Evaluación en 
                 Incidencia (%)    Reacción                 Cultivar
   campo 

      1              1‐10         Tolerante     Fed. 733, LV 1063 (Mocarí), SC112


      3              11‐20         Tolerante                Oryzica 1

                                                           FL0268‐2P‐6 
      5              21‐30        Intermedia
                                                        (Línea avanzada)
      7              31‐6         Susceptible
      9               >60         Susceptible           Fed 2000, Col XXI

          Escala   de     evaluación    adaptada
                                           p          p
                                                      para
          Burkholderia glumae en arroz (Pérez, 2008).
9 cepas de B. glumae representativas 
                       de la diversidad genética encontrada 
                       de la diversidad genética encontrada
                                    en Colombia

                                                                                                                        Grupo 
                                                           No   Registro     Dpto          Localidad       Variedad
                                                                                                                       genético
                                                           1     3862‐3      Meta          Santa Rosa     RD‐FLAR 28    Meta
                                                           2     3864‐4
                                                                 3864 4      Meta          Santa Rosa
                                                                                           Santa Rosa     RD‐FLAR 68
                                                                                                          RD FLAR 68    Llano
                                                                                                          Fedearroz 
                                                           3     3880‐7      Cesar        Tamalameque                   Mixto
                                                                                                            2000
                                                                                                          Fedearroz 
                                                           4     3459‐4     Bolívar       María la baja                 Mixto
                                                                                                             473
                                                                                                          Fedearroz
                                                           5     3200‐12    Córdoba        La victoria                  Norte
                                                                                                            2000
                                                                                                          Fedearroz 
                                                           6    3866B‐10   Santander         Cúcuta                     Mixto
                                                                                                             733
                                                                                                          Cimarron 
                                                           7     3722‐1      Tolima         Guamo                      Centro
                                                                                                           Barinas
                                                           8     3861‐2      Meta          Santa Rosa     RD‐FLAR 18    Llano
                                                                                                          Fedearroz 
                                                           9     3650‐3     Córdoba          Lorica                     Norte
                                                                                                             733


              Centro           Llanos                                                                      Bravo, D. 2010. Tesis
                                                Mixto
              Meta            Norte
Representación tridimensional de los grupos de la población de B. glumae con la técnica
rep‐PCR, a partir del ACM.
Condiciones de invernadero
Temperatura y Humedad Relativa 
Temperatura y Humedad Relativa




  Temperatura promedio de 24°C (rango 22‐27°C)
  Humedad relativa promedio de 75% (rango 71‐95%)
Promedio del porcentaje de  daño causado por 
 las nueve (9) cepas de B. glumae, sobre  siete 
 las nueve (9) cepas de B. glumae, sobre siete
             (7) cultivares de arroz. 




      Letras distintas indican diferencias entre los promedios, según la prueba de
      Duncan (p<0.05).
Síntoma en invernadero a partir de la inoculación en panícula  
                 causados por B . glumae 
       inoculado con B . glumae (3864-4)   Inoculado con agua estéril.
Reacción de los genotipos de arroz 
          frente a cada cepa de B. glumae. se 
          frente a cada cepa de B glumae se
                 incluyen Jupiter y LM1 
100

 90
                                                                                                                      G3: SC 112
 80

 70
                                                                                                                      G5: LV 1063

 60                                                                                                                   G6: Fed. 733
 50
                                                                                                                      G28: FL0268
 40

 30                                                                                                                   G78: Oryzica 1
 20

 10

  0
      3862‐3 (1)
      3862 3 (1)   3864‐4(2)
                   3864 4(2)    3880‐7(3)
                                3880 7(3)    3459‐4(4)
                                             3459 4(4)   3200‐12(5) 3866B‐10(6) 3722‐1(7)
                                                         3200 12(5) 3866B 10(6) 3722 1(7)     3861‐2(8)
                                                                                              3861 2(8)   3650‐3(9)
                                                                                                          3650 3(9)

                      G3       G5   G6      G28   Fed. 2000    Col XXI   G78    Jupiter     LM‐1
Conclusiones
Las temperaturas y la H.R. con las que se manejo este ensayo 
fueron similares a las reportadas en condiciones de campo.
                         p                              p

Los genotipos que mostraron tolerancia en condiciones de 
campo son altamente susceptibles bajo condiciones 
controladas de invernadero.

La variedad Jupiter y la línea LM1 mostraron reacciones 
contrastantes  (Susceptible y Tolerante) entre replicas, contrario 
a lo mostrado por los genotipos indica que mostraron ser 
altamente susceptibles a la mayoría de las cepas inoculadas en 
            p
todas las repeticiones. 
Actividades en curso
Jupiter, LM1, y Nipponbare  serán inoculadas con un 
  p ,       , y pp
número mayor de cepas.

Otros genotipos japónica serán también incluidos para 
evaluar si inconsistencias susceptibilidad/tolerancia son 
obtenidos en estos cultivares al igual que Jupiter, LM1, y 
obtenidos en estos cultivares al igual que Jupiter LM1 y
Jupiter.

Adicionalmente se esta determinando las posibles causas 
de la falta de correlación entre evaluación de campo Vs 
invernadero.
Q
       Qué se debe tener en cuenta?

Otros patógenos asociados al vaneamiento del cultivo en 
Colombia y tal vez en otros países de ALC.

La inestabilidad climática esta favoreciendo el desarrollo 
de estos otros patógenos.
de estos otros pató enos
AGRADECIMIENTOS 
        AGRADECIMIENTOS


→FLAR

→FEDEARROZ‐ Cuota de Fomento Arrocero 

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  • 1. AVANCES EN EL ESTUDIO DEL  AVANCES EN EL ESTUDIO DEL VANEAMIENTO DEL ARROZ EN  COLOMBIA Fitopatología de  Arroz‐CIAT Agosto 30 de 2011 g
  • 2. Añublo bacterial de la panícula del arroz p Años 50” en Japón. 1995‐1996 :China, Taiwán, Corea, India, Filipinas y  Tailandia.  1996 2005: Lousiana y otras regiones arroceras del sur  1996‐2005: Lousiana y otras regiones arroceras del sur Estados Unidos.  2006  Panamá. 2010 Republica Dominicana recientemente en Costa Republica Dominicana, recientemente en Costa  Rica, Nicaragua y Venezuela. 1989 Colombia (baja incidencia). 2007 Montería (Córdoba). 2011 (13 departamentos).  
  • 3. Periodo más susceptible a la infección  B. glumae Emergencia de la Panícula
  • 5. Detección de B. glumae y B. gladioli, mediante PCR  en zonas  arroceras de Colombia. PCR en zonas arroceras de Colombia Identificación  (PCR)1 Dpto Localidades B. glumae B. gladioli Antioquia 1 22/13 22/03 Atlántico 1 1/0 1/0 Bolívar 3 5/4 5/0 Casanare 1 7/5 7/0 Cauca C 1 1/0 1/0 Cesar 3 22/16 15/6 Córdoba 4 21/16 21/1 Huila 3 15/8 14/1 Meta 8 83/34 68/11 Santander 1 1/1 NT Sucre 1 5/2 5/0 Tolima 17 / 160/102 129/23 / Valle del Cauca 4 165/61 83/14 351/56  Total 48 488/259 (53.0%4) 1 Reacción en Cadena de la Polimerasa (15.9%4) .  2 No total de muestras  analizadas.  3 No de muestras positivas 4 Porcentaje de  muestras positivas por departamento,  para cada una de las especies
  • 6. Colonias típicas de Burkholderia p horas de incubación) Kim‐B, 48 h 0.6 mm de diámetro 1.6 mm de diámetro Elevación: Convexas Elevación: Pulvinatas Halo pronunciado Halo poco pronunciado Márgenes irregulares (mayoría de Márgenes regulares veces) Rango de producción de pigmento Producción de pigmento (no- (Amarillo pálido, ligeramente intenso, muy pigmentadas-pigmentadas (ligeramente intenso) intenso).
  • 7. Frecuencia de especies de Frecuencia de especies de Burkholderia en muestras de semillas de arroz  B. glumaed B. gladiolid No. de No. de No de Tipo de síntoma No de muestras muestras (%) muestras muestras (%)d positivas evaluadas evaluadas positivas Grano decolorado a 188 160 85.1 160 34 21.3 Grano manchado b 87 26 29.9 78 11 14.1 Asintomáticas c 213 73 34.3 113 11 9.7 Total 488 256 351 56 a Síntomas típicos causados por Burkholderia . b Síntomas comúnmente causado por Pseudomonas fuscovaginae c Semilla sin síntomas evidentes d Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR)
  • 8. Comparación de la secuencia de B. gladioli con   secuencias disponibles en el GenBank utilizando secuencias disponibles en el GenBank utilizando  BLASTN. No de Accesión Homología (Acc. No) Cepa (publicada GenBank) El análisis de secuencia de los productos de PCR de 4 cepas B gladioli, 98%(EF552070.1) 3704-18 JF323578 mostro homologías (98‐100%) con otras secuencias de B. gladioli ya h l í (98 100%) i d l di li 99%(EF552070.1) 4228-2 JF323579 reportadas en el Genbank. 98%(EF552070.1) 4194-4 JF323580 100%(EF552070.1) 3848s-5 JF323581
  • 9. Pruebas de patogenicidad 4 panículas por cepa 4 panículas por cepa 5mL por panícula Cultivo puro p OD=0,2 (10‐8 Ufc/ml) OD 0,2  (10 8 Ufc/ml) ‐Conteo de granos  enfermos y totales y ‐Porcentaje de granos  enfermos 24h de Incubación en  14 DDI (B. glu)  Cámara de inoculación 30 DDI (B. gla) 
  • 10. Reproducción de síntomas en invernadero  p en etapa de floración.  B. glumae B. gladioli 14 DDI  30 DDI   COL XXI
  • 11. Vaneamiento > 90% B. glumae Vaneamiento < 30 % Vaneamiento < 30 % B. gladioli Grano decolorado con manchas color chocolate oscuras que pueden cubrir las glumas completamente
  • 12. Efecto de la infección por B. glumae y B. gladioli en el rendimiento  B gladioli en el rendimiento (Condiciones de invernadero) Daño  Peso de semilla  Contenido de Humedad   Especie Cepa Rango de pigmento (%) (100 granos) (14%) (0.05gr) B. glumae 3200‐12 Ligeramente intenso 93.8 a  0.58 b 0.60 b  3704‐18 Amarillo pálido 73.1 bc 2.1 a 1.91 a 4228‐2 Muy intenso 55.7 c 2.2 a 2.26 a B. gladioli 4194‐4 Muy intenso y 79.6 ba 2.37 a 2.44a 3848s‐5 Ligeramente intenso 78.7 ba 2.26 a 2.31a Control (Col XXI) 0 2.36 a 2.46a Letras distintas en una misma columna indican diferencias entre los promedios, según la prueba de Duncan (p<0.05). 2 y 4 semanas después de la inoculación de  B. glumae y B. gladioli, respectivamente.
  • 13. EVALUACION DEL COMPORTAMIENTO DE CULTIVARES DE ARROZ ANTE EL AÑUBLO BACTERIAL DE LA PANICULA CAUSADA POR Burkholderia glumae EN COLOMBIA
  • 14. Materiales y métodos →Siete genotipos de arroz seleccionadospor su  reacción a B. glumae en condiciones de campo  g p (Montería). →Nueve cepas de B. glumae representativas de las  →N d B l t ti d l diferente grupos genéticos encontrados en estudios  previos de diversidad de la bacteria.  →Se inocularon 4 panículas por genotipo con 3  repeticiones en el tiempo.  p p →Las evaluaciones se hicieron a los 14 DDI, teniendo  que para calcular el  % de daño  se  relaciono el No. de  l l l %d d ñ l i lN d semillas afectadas / No. de semillas totales. 
  • 15. Respuesta de 7 genotipos de arroz  evaluados en campo para B. glumae l d B l (Montería, 2010). Evaluación en  Incidencia (%) Reacción Cultivar campo  1 1‐10 Tolerante Fed. 733, LV 1063 (Mocarí), SC112 3 11‐20 Tolerante Oryzica 1 FL0268‐2P‐6  5 21‐30 Intermedia (Línea avanzada) 7 31‐6 Susceptible 9 >60 Susceptible Fed 2000, Col XXI Escala de evaluación adaptada p p para Burkholderia glumae en arroz (Pérez, 2008).
  • 16. 9 cepas de B. glumae representativas  de la diversidad genética encontrada  de la diversidad genética encontrada en Colombia Grupo  No Registro Dpto Localidad Variedad genético 1 3862‐3 Meta Santa Rosa RD‐FLAR 28 Meta 2 3864‐4 3864 4 Meta Santa Rosa Santa Rosa RD‐FLAR 68 RD FLAR 68 Llano Fedearroz  3 3880‐7 Cesar Tamalameque Mixto 2000 Fedearroz  4 3459‐4 Bolívar María la baja Mixto 473 Fedearroz 5 3200‐12 Córdoba La victoria Norte 2000 Fedearroz  6 3866B‐10 Santander Cúcuta Mixto 733 Cimarron  7 3722‐1 Tolima Guamo Centro Barinas 8 3861‐2 Meta Santa Rosa RD‐FLAR 18 Llano Fedearroz  9 3650‐3 Córdoba Lorica Norte 733 Centro Llanos Bravo, D. 2010. Tesis Mixto Meta Norte Representación tridimensional de los grupos de la población de B. glumae con la técnica rep‐PCR, a partir del ACM.
  • 17. Condiciones de invernadero Temperatura y Humedad Relativa  Temperatura y Humedad Relativa Temperatura promedio de 24°C (rango 22‐27°C) Humedad relativa promedio de 75% (rango 71‐95%)
  • 18. Promedio del porcentaje de  daño causado por  las nueve (9) cepas de B. glumae, sobre  siete  las nueve (9) cepas de B. glumae, sobre siete (7) cultivares de arroz.  Letras distintas indican diferencias entre los promedios, según la prueba de Duncan (p<0.05).
  • 19. Síntoma en invernadero a partir de la inoculación en panícula   causados por B . glumae  inoculado con B . glumae (3864-4) Inoculado con agua estéril.
  • 20. Reacción de los genotipos de arroz  frente a cada cepa de B. glumae. se  frente a cada cepa de B glumae se incluyen Jupiter y LM1  100 90 G3: SC 112 80 70 G5: LV 1063 60 G6: Fed. 733 50 G28: FL0268 40 30 G78: Oryzica 1 20 10 0 3862‐3 (1) 3862 3 (1) 3864‐4(2) 3864 4(2) 3880‐7(3) 3880 7(3) 3459‐4(4) 3459 4(4) 3200‐12(5) 3866B‐10(6) 3722‐1(7) 3200 12(5) 3866B 10(6) 3722 1(7) 3861‐2(8) 3861 2(8) 3650‐3(9) 3650 3(9) G3 G5 G6 G28 Fed. 2000 Col XXI G78 Jupiter LM‐1
  • 21. Conclusiones Las temperaturas y la H.R. con las que se manejo este ensayo  fueron similares a las reportadas en condiciones de campo. p p Los genotipos que mostraron tolerancia en condiciones de  campo son altamente susceptibles bajo condiciones  controladas de invernadero. La variedad Jupiter y la línea LM1 mostraron reacciones  contrastantes  (Susceptible y Tolerante) entre replicas, contrario  a lo mostrado por los genotipos indica que mostraron ser  altamente susceptibles a la mayoría de las cepas inoculadas en  p todas las repeticiones. 
  • 22. Actividades en curso Jupiter, LM1, y Nipponbare  serán inoculadas con un  p , , y pp número mayor de cepas. Otros genotipos japónica serán también incluidos para  evaluar si inconsistencias susceptibilidad/tolerancia son  obtenidos en estos cultivares al igual que Jupiter, LM1, y  obtenidos en estos cultivares al igual que Jupiter LM1 y Jupiter. Adicionalmente se esta determinando las posibles causas  de la falta de correlación entre evaluación de campo Vs  invernadero.
  • 23. Q Qué se debe tener en cuenta? Otros patógenos asociados al vaneamiento del cultivo en  Colombia y tal vez en otros países de ALC. La inestabilidad climática esta favoreciendo el desarrollo  de estos otros patógenos. de estos otros pató enos
  • 24. AGRADECIMIENTOS  AGRADECIMIENTOS →FLAR →FEDEARROZ‐ Cuota de Fomento Arrocero