Este documento describe métodos para identificar proteínas, enzimas y ADN mediante experimentos de laboratorio. Se explica cómo la desnaturalización de proteínas mediante calor o ácidos provoca cambios en su estructura y composición que revelan información sobre su función. También se detallan protocolos para realizar reacciones que identifican proteínas en la clara de huevo, enzimas como la catalasa en el hígado, y para extraer ADN del núcleo de las células de pollo.

1. ¿CÓMO IDENTIFICAR UNA PROTEÍNA Y SU RESPECTIVA FUNCIÓN?
Las proteínas cumplen un papel fundamental en los seres vivos y es
necesario realizar un reconocimiento de su estructura y función. Por medio del
análisis de resultados experimentales de laboratorio tales como la
desnaturalización de la proteína que se produce al suministrar calor o al
reaccionar con ácidos o álcalis, sufre un cambio en su composición del cual se
puede obtener información fundamental sobre la función que ésta cumple en el
organismo. Las enzimas son moléculas de naturaleza proteica que catalizan
reacciones químicas en el organismo y que también pierden su función al sufrir
desnaturalización como es el caso de la catalasa (una importante enzima que
cataliza la descomposición de H2O2) que pierde su función fundamental al
suministrarle calor ;Además se encupor otro lado se halla las moléculas de ADN
que se encuentran en el núcleo de la célula , específicamente dentro de la
membrana nuclear , en el cual se encuentra unido a proteínas , formando
proteínas conjugadas ; para identificar el ADN se debe homogenizar el tejido y
romper las células para separar el núcleo , romper este para liberar el ADN ,
separarlo de las proteínas y precipitarlo para extraerlo de la solucion .
El objetivo principal de éste estudio es realizar un reconocimiento experimental de
algunas moléculas muy importantes en el organismo de los seres vivos, tales
como las proteínas, las enzimas y el ADN, para sustentar estos resultados se usan
los métodos que se presentan a continuación.
Coagulación de una proteína
1. Colocar en un tubo de ensayo una pequeña cantidad de clara de huevo.
2. Añadir 5 gotas de ácido acético y calentar el tubo a la llama del mechero.
Reacciones coloreadas
1.Reacción xantoproteica
- Poner en un tubo de ensayo 3 centímetros cúbicos de clara de huevo.
- Añadir 1 centímetro cúbico de ácido nítrico concentrado.
- Calentar al baño maría a 100°C
-Enfriar en agua fría

2. -Añadir gota a gota una disolución de hidróxido de sodio al 40%
1.1
-Poner en el tubo de ensayo de 3 centímetros cúbicos de clara de huevo
-Añadir 2 centímetros cúbicos de solución de hidróxido de sodio al 20%
- Añadir 10 gotas de solución de acetato de plomo al 5%
- calentar el tubo hasta ebullición
2. Reacción de Biuret
- Tomar un tubo de ensayo y poner 3 centímetro cúbicos de albúmina de huevo
- Añadir 20 centímetro cúbicos de solución de hidróxido de sodio al 20%
-Agregar 5 gotas de solución de sulfato cúprico diluida al 1%.
ENZIMAS
1. Reconocimiento de la catalasa
- Colocar en un tubo de ensayo unos trocitos de hígado.
- Añadir 5 mililitros de agua oxigenada.
2. Desnaturalización de la catalasa.
-Colocar en un tubo de ensayo unos trocitos de hígado.
- Anadir agua y hervir durante unos minutos.
- Retirar agua sobrante y añadir agua oxigenada.
3. Hidrólisis de almidón
-poner en una gradilla cuatro tubos de ensayo, numerados del 1 al 4.
- Añadir a cada tubo 5 mililitros de una solución diluida de almidón.
- A los tubos 3 y 4 añadir una pequeña cantidad de saliva.
- En el tubo 1 se realiza la reacción de fehling
- En el tubo 2 se realiza la reacción de Lugol.
- A los tubos 3 y 4 se llevan al baño maría evitando que el agua realice ebullición.

3. - En el tubo 3 se realiza la reacción de fehling y en el tubo 4 la prueba de Lugol.
Reacción de fehling
-Tomar 3 centímetros cúbicos de la muestra que se quiere analizar.
- Añadir 1 centímetro cúbico de fehling A y 1 centímetro cúbico de fehling B.
-Calentar el tubo a baño maría o en un mechero de laboratorio.
Reacción de Lugol
-Poner en un tubo de ensayo 3 centímetros cúbicos del glúcido a investigar.
- Añadir unas gotas de Lugol.
EXTRACCIÓN DE ADN
-Triturar medio hígado de pollo en un mortero. Añadir arena al mortero y continuar
con la trituración.
- Añadir 50 centímetros cúbicos de agua y remover hasta hacer un puré.
-Filtrar varias veces sobre una tela.
- Medir con una probeta el volumen del filtrado
- Agregar al filtrado un volumen igual de cloruro de sodio 2M.
- Añadir 1 centímetro cúbico de dodecil sulfato de sodio (SDS)
- Añadir mediante una pipeta 50 centímetros cúbicos de alcohol 96°.
- Introducir una varilla de vidrio e ir removiendo en la misma dirección.
En la prueba de coagulación de la proteína se obtiene una
solución coloide, en la cual la proteína forma coágulos y se
hace insoluble en el agua. Esto se debe a que la proteína del
huevo sufre una desnaturalización producida por el ácido
acético y el calor que se suministro, de este modo los
aminoácidos que la componen se desordenan generando un
cambio de su estructura.

4. En la reacción xantoproteica se forma un compuesto
aromático nitrado de un color amarillo y cambia a
anaranjado oscuro al agregar hidróxido de sodio. Esto se
debe a que los aminoácidos de la proteína presente en la
clara de huevo son portadores de grupos bencénicos
especialmente en presencia de tirosina.
En esta práctica se obtuvo un precipitado de color
negruzco. El color oscuro se debe a que se formó sulfuro
de plomo tomando como base principal la composición
azufrada de los aminoácidos que componen la proteína de
la albúmina huevo.
En la reacción de Biuret se forma una solución decolor
violeta producida por el contacto de la proteína de la clara
de huevo con el hidróxido de sodio que a la vez hace
contacto con el sulfato de cobre.
Se observa un intenso burbujeo debido al desprendimiento
de oxígeno que produce la acción de la enzima catalasa
sobre el agua oxigenada
En este caso no se observa ninguna reacción entre el agua
oxigenada y el hígado porque el calor que se le suministro
hizo que la enzima catalasa contenida en los tejidos se
desnaturalizara y por eso no pudo catalizar la
descomposición de agua oxigenada.

5. En la primera práctica la proteína sufre una desnaturalización debida a la acción
del ácido acético y el calor los cuales desordenan la estructura terciaria y
cuaternaria y generan una solución coloide en la cual aparecen los coágulos de
las proteínas. En la reacción xantoproteica se realiza una sustitución electrolítica
aromática de los residuos de la tirosina de las proteínas por el ácido nítrico dando
un compuesto coloreado de color amarillo de un pH muy ácido.