Guía de actividades y rúbrica de evaluación - Unidad 3 - Escenario 4 - Rol de...
Artículo trichoderma ssmp
1. BIOCONTROL DE Fusarium spp. EN EL CULTIVO DE TOMATE DE MESA CON Trichoderma spp.
BIOCONTROL OF Fusarium spp. ON TOMATO WITH Trichoderma spp.
Sarango Flores Stalin1, Palta Zhanay María 2, Solano Castillo Tulio3*, Espinosa González Oswaldo4
Resumen
Se seleccionaron tres aislamientos de Trichoderma spp.: LC2, SB1 y ET2, provenientes de la parroquia El
5 6 8 8
Tambo, cantón Catamayo, provincia Loja. Entre las concentraciones de Trichoderma spp. (9 × 10 , 10 , 10 y 2 × 10
conidios/ml) probadas en cultivos duales con Fusarium spp. no hubo diferencias significativas. En plantas de tomate
en macetas, los tratamientos: C-TY1 DE (151,03 g de follaje) y LC2 SD (11,80 g de raíz) registraron los valores más
altos de peso seco con respecto al Testigo (follaje: 63,13 g; raíces: 4,60 g). Los tratamientos: MA DE, TB DE, LC2 DE,
SB1 DE y MA SD, alcanzaron 100 % de germinación en macetas; en semilleros, se destacó el tratamiento MA (91,84
%). La incidencia de Fusarium spp., no tuvo diferencias significativas entre tratamientos, tanto en macetas como en
campo abierto; sin embargo, en macetas los tratamientos: LC2 DE y MA SD tuvieron 25 % de incidencia; y, en
campo abierto, los tratamientos ET2 y MC alcanzaron 57,14 y 53,57 %, respectivamente. El porcentaje de
mortalidad de plantas entre los tratamientos a base de Trichoderma spp., Tricobiol y Benomil, en condiciones de
campo, no tuvieron diferencias significativas, pero el tratamiento C-TM4 registró el más bajo de 13,39 %; Tricobiol
obtuvo 20,54 % y Benomil 17,86 %. La producción de frutos más alta la obtuvo el tratamiento C-TM4 (113,08
kg/parcela); entre los tratamientos Tricobiol y Benomil no existió diferencias significativas.
Palabras clave: biocontrol, concentraciones, Trichoderma spp., Fusarium spp., tomate.
Abstract
There were selected three isolates of Trichoderma spp.: LC2, SB1 and ET2 from El Tambo town, Loja
province, Ecuador. Among Trichoderma spp. concentrations (9 × 105, 106, 108 and 2 × 108 conidia/ml) tested in dual
cultures with Fusarium spp. there was not significant differences. In tomato on plantpots, the treatments: C-TY1 DE
(151,03 g of foliage) and LC2 SD (11,80 g of root) registered values higher respect to control treatment (foliage:
63,13 g; roots: 4,60 g). The treatments: MA DE, TB DE, LC2 DE, SB1 DE and MA SD, reached 100 % in plantpots and
in germination trays, MA treatment got 91,84 %. Fusarium spp. incidence, did not get significant differences among
treatments both plantpots and field conditions. However, in plantplots the treatments: LC2 DE and MA registered
25 % of incidence; and in field conditions, treatments ET2 and MC reached 57,14 and 53,57 %, respectively. Plants
mortality percent among treatments based on Trichoderma spp., Tricobiol and Benomil, in field conditions, there
were not significant differences, but treatment C-TM4 registered lower value (13,39 %); Tricobiol got 20,54 % and
Benomil 17,86 %. Fruits production of C-TM4 treatment registered higher value (113,08 kg/plot); between Tricobiol
and Benomil treatments there was not significant differences.
Key words: biocontrol, concentrations, Trichoderma spp., Fusarium spp., tomato.
1
Tesista investigador Universidad Nacional de Loja (UNL) stanwlad@yahoo.es
2
Tesista investigadora Universidad Nacional de Loja (UNL) mafersin2003@yahoo.es
3
Coordinación de Investigaciones del Área Agropecuaria y de Recursos Naturales Renovables, UNL, ciudad
Guillermo Falconí, Loja, ECUADOR tulio_solano@yahoo.es
4
Laboratorio de Sanidad Vegetal, UNL, ciudad Guillermo Falconí, Loja, ECUADOR
* Autor para correspondencia.
1
2. Introducción antifungosas y antibacteriales como: 6-pentil-α-
pirona (6-PAP), trichordermina, dermadina,
Los marchitamientos vasculares y pudriciones suzukacilina, alameticina, trichotoxina,
radiculares causados por Fusarium spp., son acetaldehído, viridina, viridiol, gliovirina,
enfermedades de mayor incidencia en el tomate gliotoxina y ácido heptelídico; así como las
Solanum lycopersicum L. (Blancard 1990, Nuez enzimas β-1,3 glucanasa, quitinasa y celulasa;
2001). El control biológico es una alternativa al éstas facilitan la habilidad del antagonista para
control químico; sin embargo, su aplicación a los atacar las paredes celulares de un amplio rango
patógenos del suelo no ha trascendido de los de patógenos (Deacon 2006, Molina 2006).
laboratorios e invernaderos de investigación y
experimentación, a pesar de que la mayoría de La competencia de Trichoderma spp. puede
antagonistas provienen del suelo, lo cual dividirse en: competencia saprófita por
garantiza su sobrevivencia en este medio nutrientes en el suelo y la rizósfera; y,
(Solano 1994). competencia por sitios de infección en la raíz
(colonización de la rizosfera) (Kaewchai 2009).
El hongo Trichoderma spp., es un agente
biocontrolador de hongos patógenos como: El micoparasitismo incluye las siguientes etapas:
Fusarium spp., Rhizoctonia spp., Pythium spp., 1) el crecimiento quimiotrófico del antagonista
Sclerotium spp., Sclerotinia spp., Phythophthora hacia el hospedero; 2) reconocimiento del
spp. en cultivos hortícolas y ornamentales; hospedero por el micoparásito; 3) adhesión; 4)
además incrementa el crecimiento y desarrollo excreción de enzimas extracelulares; 5) lisis y
de varios cultivos por el complejo enzimático beneficio del hospedero (Fernández-Larrea
que se origina en la rizósfera de las plantas 2001, Kaewchai 2009, Infante et al. 2009,
(Rincón et al. 1992, Pérez 2001, Cupull et al. Omann y Zeilinger 2010).
2003).
La inducción de resistencia a las plantas por
En el mercado existen productos a base de Trichoderma spp., puede ser el resultado de un
Trichoderma spp.; no obstante, el uso de cepas incremento de la concentración de metabolitos
comerciales presenta dificultades con su y enzimas relacionadas con los mecanismos de
persistencia en el suelo. Por ello, se debe defensa como fenil-alanina amonio-liasa (PAL) y
considerar aislamientos nativos que están mejor sintasa chalcona (CHS), las cuales están
adaptados a las condiciones edafoclimáticas de implicadas en la biosíntesis de fitoalexinas,
la zona; es recomendable usar mezclas de cepas quitinasas y glucanasas, que inhiben el
antagonistas, a fin de controlar la acción de las desarrollo de patógenos (Bourguignon 2008,
poblaciones patogénicas (González et al. 1999b, Kaewchai 2009, Morales 2009).
Universidad del Zulia 2001, Infante et al. 2009).
La presente investigación se orientó a conocer la
En general, son conocidos cuatro mecanismos eficacia del control biológico de Fusarium spp.
de acción de Trichoderma spp.: La antibiosis, en tomate con aislamientos y cepas nativas de
consiste en la producción y liberación de Trichoderma spp. en condiciones de laboratorio,
metabolitos específicos y no específicos o semicontroladas y campo abierto. De los
antibióticos (Molina 2006, Kaewchai et al. resultados obtenidos se puede inferir que la
2009). Trichoderma spp. produce sustancias cepa C-TM4, los aislamientos: SB1 y ET2, la
2
3. mezcla de cepas y la mezcla aislamientos de meses de edad; en las cuales se inyectó en dos
Trichoderma spp., pueden ser utilizados como hojas desarrolladas y en el cuello 0,2 ml de una
estrategia de control de Fusarium spp. suspensión conidial de Fusarium spp. (107
conidios/ml) de cada aislamiento encontrado,
Materiales y Métodos además se inoculó el sustrato con 100 ml de la
suspensión. Se hicieron observaciones de
Aislamiento de Trichoderma spp.
síntomas durante 7 d a partir de la inoculación.
Se aisló Trichoderma spp. de muestras de suelo Al séptimo día se realizaron observaciones en
de la rizosfera de tomate provenientes de los las raíces y se hizo un reaislamiento.
sectores del cantón Catamayo: San Francisco, El Selección de aislamientos de Trichoderma spp.
Tambo, La Capilla, San Bernabé y La Era; y, de la
parroquia Taquil del cantón Loja. Se hizo una Se hicieron cultivos duales en cajas petri usando
suspensión homogénea con 2 g de suelo de cada discos de 9 mm de diámetro de cada uno de los
muestra en 200 ml de agua destilada estéril, de aislamientos de Trichoderma spp. frente a un
la cual se tomó 2 ml y se mezcló con 20 ml de disco de 9 mm de Fusarium spp. ubicado a
medio de cultivo PDA en caja petri, de esta aproximadamente 50 mm. Se incubó a 25 ± 1 °C.
mezcla se obtuvo entre 15 a 20 discos de 9 mm
de diámetro, que se colocaron sobre medio PDA Se midió el crecimiento radial diario de
en otra caja petri y se incubó a 25 ± 1 °C hasta Trichoderma con una regla milimetrada durante
obtener crecimiento de las colonias de 7 días; se evaluó la clase de antagonismo
Trichoderma spp. La identificación de mediante la clave de Bell et al. (1982) (Cuadro 1)
Trichoderma spp. se realizó en base a las y, se determinó el tipo de parasitismo mediante
características culturales y morfológicas macro y la clave de Rivas (1994) (Cuadro 2). Se utilizó un
microscópicas, mediante las claves taxonómicas diseño completamente aleatorizado con 13
de Barnett (1960) y de Rifai (1969), citada por tratamientos y cinco repeticiones. La unidad
Ludeña y Regalado (2004). experimental estuvo constituida por cada
cultivo dual en caja petri.
Aislamiento de Fusarium spp.
Cuadro 1. Escala de antagonismo en cultivos duales, según
Bell et al. (1982), citada por Pérez (2001).
Se sembró en medio de cultivo PDA, entre tres y
cuatro segmentos de tejidos de raíces y cuello Clase Nominación
de tomate de 0,05 cm2, desinfectados en una 1
Trichoderma spp. crece completamente sobre la colonia
del patógeno y cubre la superficie del medio de cultivo.
solución de alcohol y luego en hipoclorito de
Trichoderma spp. crece al menos sobre las dos terceras
Sodio; se incubó a 25 ± 1 °C hasta observar 2
partes de la superficie del medio de cultivo.
crecimiento de colonias. La identificación de Trichoderma spp. y el patógeno cubren
3 aproximadamente la mitad de la superficie del medio de
Fusarium spp. se hizo con la utilización de la cultivo.
clave taxonómica de Leslie et al. (2006) El patógeno crece al menos en las dos terceras partes
4 del medio de cultivo limitando el crecimiento de
mediante la caracterización de colonias y
Trichoderma spp.
observaciones microscópicas. El patógeno crece sobre la colonia de Trichoderma spp.
5
ocupando toda la superficie del medio de cultivo.
Las pruebas de patogenicidad de Fusarium spp.,
se realizaron en plantas de tomate de uno y dos
3
4. Cuadro 2. Clave de identificación visual (reacción cada tratamiento, equidistantemente a 50 mm
antagonista-patógeno) del tipo de parasitismo (Rivas 1994,
de una gota de 0,02 ml de Fusarium spp. sobre
citado por Ludeña y Regalado 2004).
Tipo Determinante
medio PDA en caja petri.
Las hifas de los dos hongos forman un relieve en la zona
A Se midió el crecimiento radial diario de
de contacto (antagonismo físico).
B
Las hifas dan origen al fenómeno de lisis en la zona de Trichoderma spp. con una regla milimetrada por
contacto (antagonismo químico).
Las hifas del antagonista recubren las del patógeno
7 d; la clase de antagonismo según la escala de
C entrelazando o entrecruzándose con éstos y ocupando Bell et al. (1982) y, el tipo de parasitismo de
el espacio vital (antagonismo hiperparasitario). acuerdo a la clave de Rivas (1994). Se utilizó un
Las hifas de los dos hongos no alcanzan a tomar
D contacto, dando origen a un espacio vacío (antagonismo
diseño experimental completamente al azar con
físico-químico). 24 tratamientos y cuatro repeticiones dispuesto
Las hifas de los hongos dan origen a comportamientos
E en un esquema bifactorial 6 × 4 (Trichoderma
variables (antagonismo variable).
spp. × concentraciones). La unidad experimental
estuvo constituida por cada una de las cajas
Pruebas de antagonismo in vitro de
petri que contenían los cultivos duales.
Trichoderma spp. en varias concentraciones
Pruebas de biocontrol de Fusarium spp. con
Se prepararon suspensiones conidiales de las
Trichoderma spp. en condiciones
cepas del Laboratorio de Sanidad Vegetal de la
semicontroladas
Universidad Nacional de Loja UNL (2004): C-TM4
(T. harzianum) y C-TY1 (T. koningii); un Se probaron los tres aislamientos seleccionados:
aislamiento de Trichoderma sp. de LC2, SB1 y ET2; las cepas del Lab. San. Vegetal-
AGROCALIDAD-Loja (AC); y, los tres mejores UNL: C-TM4 (T. harzianum) y C-TY1 (T. koningii);
aislamientos seleccionados: LC2, SB1 y ET2. Las el aislamiento de Trichoderma sp. de
concentraciones probadas fueron: 2 × 108; 108; AGROCALIDAD-Loja (AC); mezcla de los tres
106; 9 × 105 conidios/ml en cultivos duales con mejores aislamientos seleccionados (MA);
Fusarium spp. (2 × 108 conidios/ml). mezcla de cepas del Lab. San. Veg. UNL y
aislamiento AGROCALIDAD-Loja (MC); un testigo
La suspensión conidial, tanto de Trichoderma
comercial biológico (TB: Tricobiol); un testigo
como de Fusarium, se preparó mediante lavado
químico: (Benomil); y, un Testigo absoluto. Se
de inóculo con agua destilada estéril, mezclada
probaron en sustrato desinfectado (DE) con
con 0,2 ml de dispersante Tween 80. De esa
agua hirviendo (95 °C) y en sustrato sin
suspensión, se tomó una muestra y se utilizó la
desinfectar (SD). Ambos sustratos fueron
cámara de Neubauer para realizar el conteo de
inoculados con Fusarium spp. (5 × 107
conidios y calcular la concentración mediante la
conidios/ml), a razón de 20 ml por cada hoyo. Se
ecuación presentada por French y Hebert
utilizó la concentración de Trichoderma spp. de
(1982): con/ml = suma 8 cs × 31 250. Donde:
9 × 105 conidios/ml.
con/ml: concentración conidios/ml; suma 8 cs:
sumatoria de ocho cuadrados secundarios (cs); Se sembraron en forma directa cuatro semillas
31 250: constante utilizada cuando se hace el de tomate var. Acerado en una maceta de 15 l
conteo de esporas en ocho cs. de capacidad con sustrato 1:1:2 (suelo agrícola:
arena de mina: humus); a los 20 d se dejó una
Los cultivos duales estuvieron constituidos por
plántula por maceta. Las semillas de los
una gota de 0,02 ml de Trichoderma spp., por
4
5. tratamientos a base de Trichoderma spp. fueron el caso del Testigo y Benomil se las sumergió en
remojadas por 10 min en la suspensión conidial agua corriente. Luego de la siembra se adicionó
de los respectivos tratamientos y además se en cada celda, 2 ml de Trichoderma spp.,
colocó 20 ml de la suspensión conidial al suelo Tricobiol y Benomil, según cada tratamiento. La
por cada hoyo. Se aplicó 20 ml del producto solución de Tricobiol y Benomil se preparó en
químico y del biológico en cada hoyo a la dosis dosis de 1 g de producto/litro de agua.
de 1 g de producto/l de agua.
Para trasplantar, se hizo una inmersión de las
Se realizó la evaluación de: porcentaje de plántulas durante 10 min en la suspensión
germinación a los 14 d después de la siembra; y conidial de Trichoderma spp. (9 × 105
a los 98 d después de la siembra, se evaluó: conidios/ml), de acuerdo a los respectivos
porcentaje de incidencia de Fusarium spp. tratamientos; a las plántulas de los tratamientos
(amarillamiento de hojas bajeras); peso seco Benomil y Tricobiol, se hizo una inmersión en la
foliar y peso seco radicular (g). Se utilizó un solución respectiva a la dosis de 1 g de
diseño experimental completamente al azar con producto/l de agua. Luego del trasplante, se
20 tratamientos y cuatro repeticiones. La unidad aplicó en cada hoyo 20 ml de Trichoderma spp.,
experimental estuvo constituida por cada Benomil y Tricobiol, según cada tratamiento.
maceta que contenía una planta.
A los 45 d después del trasplante, se aplicó
Pruebas de biocontrol de Fusarium spp. con nuevamente Trichoderma spp., Tricobiol y
Trichoderma spp. en condiciones de campo Benomil en una cantidad de 40 ml por cada
planta, cerca del cuello en la misma
Se estableció un cultivo de tomate var. Acerado concentración y dosis empleadas al trasplante.
en la parroquia El Tambo, cantón Catamayo,
sector La Loma vía a El Verdum. Se probaron los Se evaluó la germinación a los 14 d después de
aislamientos de Trichoderma spp.: SB1, LC2, la siembra, incidencia de Fusarium spp.,
ET2, AC; las cepas: C-TM4 y C-TY1; el mortalidad de plantas y producción de frutos. Se
aislamiento de AGROCALIDAD (AC); mezcla de utilizó un diseño experimental en bloques al
aislamientos (MA); mezcla de cepas y azar con 11 tratamientos y cuatro réplicas. La
aislamento AGROCALIDAD (MC); Tricobiol; y, unidad experimental estuvo constituida por 28
Benomil. plantas en una parcela de 15,48 m2.
Se inoculó cada hoyo con 20 ml de Fusarium En todos los ensayos, el análisis de varianza y la
spp. (107 conidios/ml) y se adicionó en el hoyo separación de medias con la prueba de Duncan
de trasplante, aproximadamente 5 g del al 5 % de significancia, se realizó con la
sustrato de arroz en donde se masificó utilización del software MSTAT-C 2.10 y
Fusarium. Microsoft Office Excel 2007.
Se hizo un semillero en bandejas germinadoras Resultados
con sustrato desinfectado. Las semillas fueron
sumergidas, según el tratamiento respectivo, en Selección de aislamientos
la suspensión conidial de Trichoderma spp. (9 ×
Se capturó Trichoderma spp. en todas las
105 conidios/ml) y Tricobiol durante 10 min. En
muestras de suelo, excepto en la muestra
5
6. número 1 del sitio San Francisco y en la muestra mayor a 75 % del medio de cultivo) y
2 del sitio San Bernabé, en las cuales se parasitismo Tipo C (hiperparasitismo) (Figura 3).
encontró colonias correspondientes al género
Penicillium. Además se obtuvo dos aislamientos
de Trichoderma spp. de raíces de tomate de los
sectores San Francisco y La Era: 46 (SF3) y 5455
(LE1) (Figura 1).
Figura 2. Estructuras fungosas de Fusarium spp. aislado de
raíces de tomate provenientes de la parroquia El Tambo.
0,841 a
0,804 a
0,844 a
0,836 a
0,833 a
0,833 a
0,830 a
0,819 a
0,813 a
0,790 a
0,787 a
0,900
Crecimiento radial diario (cm/d)
0,627 b
0,800
0,553 b
0,700
0,600
0,500
0,400
0,300
Figura 1. Aislamientos de Trichoderma spp. capturados de 0,200
suelo y raíces de tomate procedentes de la parroquia El 0,100
Tambo, cantón Catamayo.
0,000
SB1
Taquil
SF2b
ET2
SF3
ET1
SF2a
LC2
LC1
5455 (LE1)
LE2
LE1
46 (SF3)
Se aisló Fusarium spp. en dos de las muestras de
tomate del sector San Francisco (40 y 46) y en
una muestra del sector La Era (5455). Según las
Figura 3. Crecimiento radial diario (cm/d) de Trichoderma
características macro y microscópicas de las spp. y orden de mérito según la prueba de Duncan
colonias aisladas y su posterior comparación con (p<0,05).
la clave taxonómica de Leslie et al. (2006), se
Los aislamientos de Trichoderma spp. SF3 y 46
determinó F. oxysporum en los casos: 40 y 5455;
(SF3), presentaron la Clase 1 de antagonismo
y, F. solani en el caso 46 (Figura 2). Estos
(100 % de cubrimiento de la colonia de
aislamientos dieron resultados positivos en las
Fusarium spp. y del medio de cultivo). El Tipo C
pruebas de patogenicidad realizadas.
de parasitismo fue evidente en 12 aislamientos
Se seleccionaron los aislamientos LC2 (0,844 de Trichoderma spp., el aislamiento LE1
cm/d), SB1 (0,841 cm/d) y ET2 (0,836 cm/d), por presentó el Tipo B (antagonismo químico o lisis
registrar los valores más altos de crecimiento en la zona de contacto antagonista-patógeno)
radial diario, antagonismo Clase 2 (cubrimiento (Figura 4).
6
7. Fusarium spp. mientras LC2 DE y MA SD
registraron el 25 %. En el peso seco foliar, se
destacó el tratamiento C-TY1 DE (151,03 g),
aunque los tratamientos: C-TM4 DE, SB1 SD, LC2
SD, también superaron los 100,0 g de peso seco.
En el peso seco radicular, el tratamiento LC2 SD
registró el valor más alto (11,8 g) (Cuadro 4).
0,865
0,859
Crecimiento radial diario (cm/d)
0,860
0,855
0,850 0,849
0,845 0,844
0,842
Figura 4. Cultivos duales de Trichoderma vs. Fusarium.
0,840
Eficacia de concentraciones de Trichoderma
spp. en el antagonismo de Fusarium spp. 0,835
0,830
El análisis de varianza de la variable crecimiento 9,00E+05 2,00E+08 1,00E+08 1,00E+06
radial diario (cm/d), indicó que las Concentración (conidios/ml)
concentraciones probadas de Trichoderma spp.,
en el rango de 9 × 105 a 2 × 108 conidios/ml son Figura 5. Crecimiento radial diario (cm/d) de Trichoderma
spp. en cuatro concentraciones diferentes.
iguales estadísticamente al 5 % de significancia.
Sin embargo, la concentración 9 × 105 con/ml
alcanzó el valor más alto de crecimiento radial
diario (0,859 cm/d) (Figura 5).
Todos los tratamientos de Trichoderma spp.
presentaron la Clase 2 de antagonismo y el Tipo
C de parasitismo (Figura 6).
Eficacia de Trichoderma spp. en la regulación
de Fusarium spp. en tomate en condiciones
semicontroladas
Los tratamientos: MA DE, TB DE, LC2 DE, SB1 DE
y MA SD, tuvieron 100 % de germinación y el
tratamiento Testigo 50 %. El porcentaje de
incidencia de Fusarium spp., no presentó
diferencia estadística al 95 % de confianza entre
los tratamientos; sin embargo, el tratamiento Figura 6. Cultivos duales de Trichoderma spp. con
Testigo presentó el 100 % de incidencia de Fusarium spp. en cuatro concentraciones diferentes.
7
8. Eficacia de Trichoderma spp. en condiciones de spp. en raíces, debido a que las hifas de
campo Trichoderma spp. pueden penetrarlas sin causar
daño (Harman 2006).
El porcentaje de germinación, resultó
estadísticamente diferente entre tratamientos; De los 13 aislamientos de Trichoderma spp.
el tratamiento MA y C-TY1 superaron el 88 % y encontrados, 85 % tuvo aproximadamente 0,8
no difieren estadísticamente entre sí según la cm/d de crecimiento radial. Todos los
prueba de Duncan (p<0,05); el tratamiento aislamientos presentaron alto grado de
Testigo alcanzó 72,79 %. El porcentaje de antagonismo en cultivos duales, por ubicarse en
incidencia de Fusarium spp., no tuvo diferencias las Clases 1 y 2 de antagonismo y por el
significativas al 5 % entre tratamientos, sin hiperparasitismo a Fusarium spp. Estos valores
embargo el tratamiento MC tuvo 53,57 %, en son similares a los obtenidos por Ludeña y
comparación con el Testigo (74 %). Regalado (2004) y por González y Villavicencio
(2008), quienes registraron una velocidad de
El porcentaje de mortalidad de plantas tuvo crecimiento promedio de 0,82 cm/d en cepas de
diferencias significativas entre tratamientos al Trichoderma spp. del cantón Catamayo. El alto
nivel del 5 %. De acuerdo a la prueba de Duncan grado de antagonismo que presentó
(p<0,05), el tratamiento Testigo (41,07 %) y LC2 Trichoderma spp. coincide con los resultados de
(28,57 %), obtuvieron los valores más altos de los autores antes citados y los de Michel (2001),
mortalidad y son diferentes estadísticamente Suárez et al. (2008), Paredes-Escalante (2009),
entre sí. Los tratamientos restantes de Michel et al. (2009), Fernández y Suárez (2009).
Trichoderma spp., Tricobiol y Benomil, no Esto se debe a que la competencia por espacio y
presentaron diferencias significativas entre sí. nutrientes de Trichoderma spp. es muy alta por
su naturaleza saprofítica; el hiperparasitismo de
En la variable producción de frutos, se evidenció
Trichoderma spp. le permite aprovecharse de
diferencias significativas entre tratamientos. Los
los componentes de la pared celular de
tratamientos C-TM4 y MC superaron los 100
Fusarium spp. mediante la secreción de enzimas
kg/parc. (64 599 kg/ha), mientras que el Testigo
(Deacon 2006, Kaewchai 2009).
llegó a 84,21 kg/parc. (54 399 kg/ha) (Cuadro 4).
Los resultados indican que las concentraciones
Discusión
utilizadas (9 × 105, 106, 108 y 2 × 108
Se encontró Trichoderma spp. en 83 % de las conidios/ml) ejercieron biocontrol a Fusarium
muestras de suelo procesadas, lo que concuerda spp.; éstas no difirieron estadísticamente entre
con los resultados de Ludeña y Regalado (2004) sí, sin embargo el crecimiento radial diario más
quienes encontraron Trichoderma spp. en 64 % alto lo obtuvo la menor concentración (9 × 105
de muestras de suelo del cantón Catamayo. conidios/ml). Lo cual se asemeja a los resultados
Estos resultados confirman que Trichoderma de González et al. (2004), González-Cárdenas et
spp., por su naturaleza cosmopolita, puede al. (2005) y Jaimes et al. (2009), quienes
encontrarse en un amplio rango de sustratos y encontraron que las concentraciones 105 y 106
los parámetros ambientales juegan un rol conidios/ml fueron más efectivas para el control
importante en su dispersión y proliferación de Fusarium spp. Según Yedidia et al. (2000),
(Bourguignon 2008). Se encontró Trichoderma citados por Howell (2003) y Adams (1990),
8
9. Cuadro 3. Porcentaje de germinación, porcentaje de incidencia de Fusarium spp., peso seco (g) foliar y radicular de plantas de
tomate en macetas y orden de mérito de las medias según la prueba de Duncan (p< 0,05).
No. Tratamiento Germinación (%) Incidencia Fusarium (%) PS follaje (g) PS raíces (g)
1 C-TM4 SD 68,75 cde 75,00 a 75,60 def 7,45 cdef
2 C-TM4 DE 62,50 de 75,00 a 120,00 b 7,63 cde
3 C-TY1 SD 87,50 abc 50,00 a 65,58 eg 8,83 bc
4 C-TY1 DE 81,25 abcd 75,00 a 151,03 a 8,73 bc
5 AC SD 93,75 ab 50,00 a 77,18 def 5,90 efg
6 AC DE 81,25 abcd 50,00 a 86,30 cdef 5,43 fg
7 LC2 SD 68,75 cde 50,00 a 100,88 bc 11,80 a
8 LC2 DE 100,00 a 25,00 a 67,25 ef 8,35 bc
9 SB1 SD 68,75 cde 50,00 a 115,48 b 8,90 bc
10 SB1 DE 100,00 a 75,00 a 75,78 def 7,23 cdef
11 ET2 SD 81,25 abcd 75,00 a 71,78 def 7,15 cdef
12 ET2 DE 75,00 bcd 50,00 a 66,80 ef 7,48 cdef
13 MC SD 81,25 abcd 75,00 a 70,75 def 5,80 efg
14 MC DE 75,00 bcd 50,00 a 86,53 cd 8,08 bcd
15 MA SD 100,00 a 25,00 a 88,15 cd 9,90 b
16 MA DE 100,00 a 50,00 a 73,00 def 6,13 defg
17 TB SD 75,00 bcd 75,00 a 79,00 def 7,20 cdef
18 TB DE 100,00 a 50,00 a 91,18 cd 6,95 cdef
19 Benomil 93,75 ab 50,00 a 70,90 def 6,15 defg
20 Testigo 50,00 e 100,00 a 63,13 f 4,60 g
Cuadro 4. Germinación, incidencia de Fusarium spp., mortalidad de plantas y producción de tomate en condiciones de campo.
Incidencia %
Germinación Producción
No. Tratamiento Fusarium mortalidad
(%) kg/parc.
(%) plantas
1 C-TM4 76,19 ef 72,32 a 13,39 d 113,08 a
2 C-TY1 88,44 a 58,93 a 18,75 cd 91,12 bc
3 AC 78,23 de 60,71 a 19,64 cd 91,29 bc
4 LC2 82,99 bcd 58,04 a 28,57 b 85,38 bc
5 SB1 86,39 bc 58,93 a 16,07 cd 95,84 bc
6 ET2 80,95 cde 57,14 a 16,07 cd 95,01 bc
7 MC 78,91 de 53,57 a 14,29 cd 103,27 ab
8 MA 91,84 a 65,18 a 16,96 cd 92,86 bc
9 TB 78,91 de 62,50 a 20,54 c 87,12 bc
10 Benomil 86,39 bc 56,25 a 17,86 cd 92,18 bc
11 Testigo 72,79 f 74,11 a 41,07 a 84,21 c
9
10. citado por Etebarian (2006) el biocontrol por probablemente debido a la concentración
Trichoderma spp. puede darse desde 105 utilizada y al número de aplicaciones de
esporas/ml. Trichoderma spp. Cifuentes (2001), logró
obtener 29,9 % de incidencia de F. solani en
El porcentaje de germinación en macetas fue plantas de tomate con la aplicación de T.
superior en los tratamientos a base de harzianum (109 conidios/ml), 60,5 % con el
Trichoderma spp.: MA (mezcla de aislamientos), producto comercial Trichodex y 65,5 % con
MC (mezcla de cepas) y TB (Tricobiol), los cuales
benomilo; Martínez-Medina et al. (2008)
registraron entre 75 y 100 %, tanto en sustrato encontraron que se redujo la incidencia y
desinfectado (DE) como sin desinfectar (SD). El severidad de la fusariosis del melón hasta 50 %
tratamiento químico Benomil también alcanzó en comparación con el testigo; y, Jaimes et al.
un alto porcentaje de germinación (93,75 %). La
(2009) consiguieron reducir la incidencia de
mezcla de aislamientos (MA) fue el tratamiento
Fusarium oxysporum en tomate a 35 % con
más efectivo en la germinación de semillas en
cinco aplicaciones de Trichoderma spp. (106
macetas y semilleros (97 % en promedio). El conidios/ml).
producto comercial Tricobiol (TB) superó el 75 %
y el químico Benomil el 85 % en ambos ensayos. No obstante, en los dos bioensayos,
Trichoderma spp. redujo la incidencia de
Estos valores concuerdan con Cubillos-Hinojosa Fusarium spp.: entre 25 y 75 % en macetas y
et al. (2009), cuyo estudio reveló que T. entre 2 y 28 % en campo abierto, con respecto
harzianum estimuló la germinación de semillas
al Testigo. La eficacia en la incidencia de
de maracuyá hasta el 93 %; así también, Guilcapi Fusarium spp. de las mezclas de aislamientos y
(2009) consiguió el 98 % de emergencia de cepas fue inverso en macetas y en campo. Esto
plántulas de café tratadas con T. harzianum y T. es posible por la variación de factores
viride; y, Cupull et al. (2003) obtuvieron el 68 %
ambientales que juegan un rol importante en la
de germinación de semillas de café inoculadas actividad biocontroladora de las especies de
con T. viride. Esto se debe principalmente a que Trichoderma, además de por sí tiene una alta
este Trichoderma spp. secreta metabolitos variabilidad antagonista (Bourguignon 2008).
como el 6PAP, que actúan como reguladores del
crecimiento. Además, la inhibición de En cuanto al peso seco, todos los tratamientos
fitopatógenos puede permitir que el proceso de de Trichoderma spp. superan los 65 g de peso
la germinación se cumpla sin contratiempos al seco del follaje y los 5 g de peso seco radicular,
mejorar el metabolismo de la plántula para su lo cual concuerda con Cupull et al. (2003),
emergencia (Harman 2006, Bourguignon 2008, quienes observaron incremento de la masa seca
Vinale et al. 2008). foliar de plántulas de café con la aplicación de T.
viride. Fernández et al. (2006) también
El porcentaje de incidencia de Fusarium spp. en comprobaron que la biomasa seca total de
tomate, tanto en macetas como en campo, no
plantas de tomate incrementó con un producto
tuvo diferencias significativas entre comercial de T. harzianum. Por su parte,
tratamientos. La incidencia de Fusarium spp. en Cifuentes (2001) no encontró diferencias
los tratamientos de los ensayos en macetas y a significativas entre el porcentaje de materia
campo abierto, un tanto discrepa de los valores seca de la raíz de plantas de tomate, pero sí en
obtenidos en varios trabajos realizados,
10
11. la materia seca foliar en la cual se destacó la Fusarium spp., puesto que la floración y
aplicación de una cepa nativa de Trichoderma fructificación del cultivo, son las fases
spp. en el incremento del porcentaje de materia fenológicas donde la enfermedad se desarrolla y
seca. Naseby et al. (2000) obtuvieron es más severa (Smith et al. 1988, Rodríguez
incremento de número de raíces en arveja con 2001, Herrera 2005). La segunda aplicación
la aplicación de Trichoderma spp. pudo contribuir a que Trichoderma spp.,
incremente su colonización en el sistema
Trichoderma spp. logró incrementar el peso
radicular e inducir mecanismos de defensa
seco de las plantas, debido a la mayor cantidad como la biosíntesis de compuestos (fitoalexinas,
de nutrientes asimilados. El tratamiento químico quitinasas y glucanasas) que inhiben el
Benomil no contribuyó a la ganancia de peso. El desarrollo de patógenos. Además, la mezcla de
empleo de Trichoderma spp. ejerce influencia
cepas antagonistas puede incrementar la acción
sobre el crecimiento vegetativo, puesto que la
controladora de las poblaciones patogénicas, ya
colonización de la rizósfera por parte de
que la producción de metabolitos secundarios o
Trichoderma spp., contribuye a estimular la de factores inhibidores depende más del
nutrición de la planta e incrementar su aislamiento que de la propia especie; siendo los
metabolismo (González et al. 1999a, Harman aislamientos nativos son los más eficaces
2006, Bourguignon 2008). (Universidad del Zulia 2001, Harman 2006,
La mortalidad de plantas tuvo diferencias Bourguignon 2008, Infante et al. 2009, Kaewchai
significativas entre tratamientos. La máxima 2009, Morales 2009).
mortalidad de los tratamientos a base de La producción en el cultivo de tomate se
Trichoderma spp. alcanzó 28,57 % (LC2) y la más incrementó en los tratamientos a base de
baja 13,39 % (C-TM4); la mezcla de aislamientos Trichoderma spp. (14 %) en comparación con el
tuvo el 17 %, la mezcla de cepas el 14 %, el
Testigo. El incremento de la producción con la
producto Tricobiol registró 21 % y Benomil 18 %. aplicación de Trichoderma spp. ha sido
Estos resultados concuerdan con los obtenidos investigado en varios cultivos como lechuga,
por Ludeña y Regalado (2004), quienes cebolla, tomate y pimiento, los resultados han
registraron entre 17,5 a 30 % de mortalidad de mostrado incrementos de hasta 300 % en
plantas de tomate bajo invernadero. González y comparación con el testigo (Vinale et al. 2008).
Villavicencio (2008) también obtuvieron Esto se debe a la capacidad de Trichoderma spp.
resultados similares que variaron entre 5 y 32 % de estimular la absorción de nutrientes en la
de mortalidad de plantas de pimiento, 13 % con planta; Trichoderma spp. permite que fosfatos,
la mezcla de siete cepas y 5 % con el producto micronutrientes y otros minerales, útiles para el
Tricobiol, en condiciones de campo abierto. metabolismo, sean asimilables por la planta
Los tratamientos a base de Trichoderma spp. (Harman 2006, Vinale et al. 2008, Kaewchai
indujeron resistencia a las plantas contra el 2009).
ataque de Fusarium spp. A pesar de que existió
Conclusiones
infección del patógeno, Trichoderma spp. limitó
la mortalidad de las plantas. Es probable que la Los aislamientos de Trichoderma spp. en
segunda aplicación de Trichoderma spp. al inicio cultivos duales con Fusarium spp. mostraron
de la floración haya influido en el control de un alto grado de antagonismo expresado
11
12. por el rápido crecimiento que cubrió más Bourguignon, E. 2008. Ecology and diversity of
del 75 % (en 168 h) del medio de cultivo y indigenous Trichoderma species in vegetable
por el hiperparasitismo evidenciado. cropping systems. Thesis Ph. D. Canterbury,
No existió diferencias significativas entre las NZ, Lincoln University. 252 p.
concentraciones de 9 × 105 y 2 × 108
conidios de Trichoderma spp. /ml ya que se Cifuentes Cuadra, JF. 2001. Evaluación de la
observó el mismo efecto antagónico para capacidad biocontroladora del hongo
Trichoderma harzianum cepa nativa Queule
Fusarium spp. en cultivos duales.
La aplicación de una suspensión conidial de sobre Fusarium solani en tomate (Lycopersicon
Trichoderma spp. en la concentración de 9 × esculentum Mill). Tesis Ing. Agr. Chile,
105 conidios/ml a semillas de tomate en Universidad de Talca. 41 p.
macetas estimuló la germinación e Cubillos-Hinojosa, J; Valero, N; Mejía, L. 2009.
incrementó el peso seco de las plantas. Trichoderma harzianum como promotor del
En condiciones de campo, con dos crecimiento vegetal del maracuyá (Passiflora
momentos de aplicación de Trichoderma edulis var. flavicarpa Degener). Agronomía
spp. a la concentración de 9 × 105 Colombiana 27 (1): 81-86.
conidios/ml, se redujo la incidencia de
Fusarium spp. y la mortalidad de plantas. Cupull Santana, R; Andreu Rodríguez, CM; Pérez
Los mejores niveles de eficacia para el Navarro, C; Delgado Pérez Y; Cupull Santana,
control de Fusarium spp., en base a MC. 2003. Efecto de Trichoderma viridae
mortalidad de plantas y producción de como estimulante de la germinación, en el
frutos, se obtuvo con la cepa C-TM4, los desarrollo de posturas de cafetos y el control
aislamientos: SB1 y ET2, la mezcla de cepas de Rhizoctonia solani Kuhn. Centro Agrícola.
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