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PRÓPOLIS VERMELHA DO BRASIL: PRODUÇÃO,
   COMPOSIÇÃO E ATIVIDADE BIOLÓGICA




                      Severino Matias de Alencar
                   Prof. de Bioquímica – ESALQ/USP
A                 A nova visão do Mundo

    Produtos naturais                            Novos medicamento
                                                 Novos conhecimentos


                                                          67%




          28%                       39%
    Produtos naturais           Derivado de PN
          (PN)
                                                       Provenientes
                         33%                           totalmente ou
                        Sintético
                        Si téti                       parcialmente de
                                                          i l      d
                                                      fontes naturais
Própolis
Substância resinosa, não tóxica, coletada de diversas partes das plantas como brotos,
    botões florais e exsudados resinosos por abelhas africanizadas Apis mellifera




 B. dracunculifolia                Populus sp.

  • Pro, em defesa de, e polis a cidade;
  • Civilizações Chinesa, Tibetana, Egípcia e Greco-Romana;
  • Utilizada no antigo Egito para embalsamar os mortos;
  •Confecção de violinos de qualidade;
   C f ã d i li            d      lid d
  • Utilizada na segunda guerra mundial em clínicas soviéticas;
Própolis


                           Apesar de seu uso milenar




                                 Própolis




       Alimento               Alimento Funcional       Medicamento

      Brasil   (1950)               Japão
EUA   (FDA – GRAS, 1988)
       UE   (1998)
                                    China
                                   Tailândia               X
                                      (
                                      (JETRO, 2003)
                                            ,     )
Própolis européia          x          Própolis brasileira


√ Alto teor de flavonóides       √ Alto teor de fenilpropanóides e
                                   derivados do ácido cinâmico
                                        (PRÓPOLIS VERDE)




Álamo (Populus sp.)
REGULAMENTO TÉCNICO PARA FIXAÇÃO DE IDENTIDADE E QUALIDADE
                         INSTRUÇÃO NORMATIVA N.º 3, DE 19 DE JANEIRO DE 2001


Própolis: Entende se por Própolis o produto oriundo de substâncias resinosas gomosas e
          Entende-se                                                 resinosas,
balsâmicas, colhidas pelas abelhas, de brotos, flores e exsudados de plantas, nas quais as
abelhas acrescentam secreções salivares, cera e pólen para elaboração final do produto


Requisitos mínimos de qualidade a que deve atender a Própolis

 1) Quanto ao teor de flavonóides:
      √ Baixo teor: até 1,0 % (m/m);
      √ Médio teor: >1,0% – 2,0 % (m/m);
      √ Alto teor: >2,0 % (m/m).
       Flavonóides: mínimo d 0 5 % ( / )
       Fl      óid      í i  de 0,5 (m/m);
       Compostos Fenólicos: mínimo 5 % (m/m)
2) Espectro de Absorção Ultravioleta Visível – a própolis deverá
apresentar picos característicos das principais classes de flavonóides
entre 200 e 400 nm;

3) Atividade de oxidação: máximo de 22 segundos;
 Atividade antibiótica e antioxidante

 Atividade anticâncer

 Outras substâncias químicas além de flavonóides e fenólicos
Própolis & Biodiversidade brasileira

                  Brasil

Riqueza da Biodiversidade de vegetação
  q                            g   ç




  Muitos Tipos de própolis dependendo da
          Localização Geográfica




          Composições químicas
           variadas e distintas
Aspecto da própolis bruta in natura produzida no nordeste do
                            Brasil
S. aureus   S. aureus   Flavonóides
Amostra   Local de coleta
                                        (I)         (II)      totais %
CE1             Crato – CE            traço       traço         0,3
CE2             Crato – CE              -           -           0,3
PE2           Salgueiro – PE            -           -          <0,1
PE3           Salgueiro – PE            -           -          <0,1
PE5          Belo Jardim – PE          1,0         1,0          5,1
PE6          Belo Jardim – PE          1,0         0,5          2,7
BA4            Juazeiro – BA            -         traço         0,1
BA5            Juazeiro – BA            -         traço         0,1
BA10          Remanso – BA            traço         -           0,4
BA13          Salvador – BA           traço         -          < 0,1
BA14          Salvador – BA             -           -           0,1
BA15          Salvador – BA             -           -           1,8
BA16       Barra da Choça – BA        traço         -           1,5
BA17       Barra da Choça – BA        traço         -           0,6
BA20       Vitória da Conquista –     traço         -           0,2
                     BA
BA21       Vitória da Conquista –     traço         -           0,3
                     BA
BA24            Anagé – BA              -           -           0,1
BA25            Anagé – BA              -           -          <0,
                                                               <0 1
BA7       Senhor do Bonfim – BA       traço       traço         1,5
BA9       Senhor do Bonfim – BA       traço         -           2,1
BA36          Entre Rios – BA          5,5         2,0          0,0
BA43          Entre Rios – BA          3,5         5,0         <0,1
PI1              Picos – PI             -           -           0,4
PI2              Picos – PI             -           -           1,1
Cor dos extratos etanólicos das própolis nordestinas
Concentração (mg/g)
  Compostos fenólicos                      BA –    BA -               PE-
     identificados                         Entre   Sertã     PE -    Sertão       CE -     PI -
                                Européia    Rios     o      Sertão     G9        Sertão   Sertão   MG
1 (ácido cumárico)                1,2       -       -          -       0,5        0,2      0,2     8,5
2 (ácido ferrúlico)               1,4        -      -          -       -           -        -      2,4
6 (quercetina)                     -         -      -         6,8      -           -        -       -
7 (pinobanksina)                 37,4        -      -          -       -           -        -       -
8 (hisperetina)                    -         -      -          -       1,2         -        -       -
9 (k f
  (kanferol)
          l)                      5,1
                                  5 1        -     1,4
                                                   1 4         -       -           -        -      0,4
                                                                                                   0 4
10 (apigenina)                    7,9        -      2,2        -       -           -       0,3     0,3
11 (isoramnetina)                  -         -      -         3,4       -          -        -       -
13 (sakuranetina)                  -         -     18,1
                                                   18 1        -        -          -        -       -
14 (isosakuranetina)               -         -      -          -        -          -        -       -
15 (pinocembrina)                22,6        -      -        72,1       -          -        -       -
16 (éster                do
ácido    dimetil       dialil
caféico)                          9,8        -      -          -        -          -        -       -
17(pinobanksina-3-
acetato)
       )                         36,2
                                   ,         -      -        14,1
                                                               ,        -          -        -       -
18 (crisina)                     39,9        -      -        19,7       -          -        -       -
19 (acacetina)                     -         -      -          -        -          -        -       -
20 (galangina)                   33,6        -      -        21,1       -          -        -       -
21 (kanferide)                     -         -      -          -        -          -        -      12,3

22- Artepilin C                                                                                    38,6
PRÓPOLIS BRASILEIRA (12 Tipos)



                                                     Própolis
                                                     exportada




                   Mercado Mundial
O Brasil exporta setenta toneladas de própolis/ano
Um mercado que movimenta 25 milhões de dólares.
Os principais compradores são o Japão, Estados Unidos,
Alemanha e China.
Própolis Vermelha: um novo tipo de
         própolis brasileira




                     Preço por Kg: R$ 550,00
                                      550 00
Atividade antibiótica contra várias linhagens de bactérias
Pseudomonas aeruginosa     Bacillus cereus            Bacillus subtilis




  Klebisiella sp.          Staphylococcus aureus
√  Alta atividade antioxidante (anti-
envelhecimento)



√     Composição química nunca antes
relatada em uma própolis brasileira
Fracionamento da própolis vermelha

Atividade antibiótica

                        Tratamentos              S. aureus ATCC 25923       S. mutans UA159
                      Fração hexânica                    4,76                     4,76
                     Fração clorofórmica                 7,49                     7,98
                Etanol 80% (controle negativo)             -                        -




                                      1      2    3     4 5       6     7     8      9 10 11
TABELA 3: Valores das zonas de inibição (mm) contra os microrganismos S. aureus e S.
               mutans para as 11 sub-frações obtidas da fração clorofórmica, após eluição com
               um gradiente crescente de polaridade de solvente em coluna de sílica gel G60
                                                                                        G60.
               Sub-frações                  S. aureus ATCC 25923         S. mutans UA159
 1-clorofórmio(100%)                                 3,84                          5,94
 2- clorofórmio/acetato de etila (1:1)
                                 ( )                 6,26                          7,57
 3-clorofórmio/acetato etila (1:1)                   5,99                          8,76
 4- clorofórmio/acetato de etila (1:1)               4,98                          6,69
 5-acetato de etila (100%)                           3,80                          5,58
 6-
 6 acetato etila/etanoll (1 1)
        t t til / t      (1:1)                       6,14
                                                     6 14                            0
 7-acetato de etila/etanol (1:1)                       0                             0
 8-acetato de etila/etanol (1:1)                       0                           4,47
 9
 9- etanol (100%)                                    2,09
                                                     2 09                            0
 10-etanol (100%)                                      0                           4,12
 11-etanol (80%)                                       0                           4,25
Atividade antioxidante

                                                 DPPH

              Subfração 12                             31,71
              Subfração 11                              33,56
              Subfração 10                     22,45
              Subfração 09                                 39,58
              Subfração 08                              35,88
                                                        35 88
              Subfração 07                                 39,58
              Subfração 06                                  38,89
    tras




              Subfração 05                                  37,81
              Subfração 04                             33,68
                                                       33 68
Amost




              Subfração 03                        27,54
              Subfração 02                        26,93
              Subfração 01                          30,68
                 Fração 02
                     ç                                                       62,03
                     Fração                                                    65,12
           Fração Hexânica                                                             75,93
             Própolis Bruta                                                    66,22           88,68
               α - tocoferol
                       BHT                             32,23
                                                       32 23
                               0     10   20      30      40    50     60       70     80        90
                                                  % Atividade sequestrante
Cromatografia gasosa com espectrometria de massas (CG-MS) dos
extrato etanólico d própolis vermelha d lit l d estado d Al
  t t t óli da ó li               lh do litoral do t d de Alagoas


                                                                                       22




                                                                                 20

                                                                                                   24
                                                                                            23
                                                                                  21
                                            9 10
                                  6 7                11        14                     ?
            1                                                                                25
                    3       5           8                 13        15      18                26
                        4                   ?   ??   12               16 17
                2




 Resultado inexperado: alta concentração de isoflavonas (um tipo
 específico de flavonóide)

 Ex: medicarpina,               vestitol,            isoliquiritigenina,              formononetina,
 daidzeina etc.
De onde vem a própolis vermelha???




Dalbergia Ecastophyllum (Rabo-de-bugio)
Compostos isolados com atividade antioxidante e antibiótica

                                                    8
                                   OH           7       O
                                                            2            OH
                                                                          ,
                                                            3             2
                                            6                                          ,
                                                        4                          3
                                                    5       H
                                                                ,                  ,
                                                                6              4           OCH3
                                                                          ,
                                                                          5




               8
CH3O       7       O
                       2       OH
                                ,
                       3       2
       6                                ,
                   4                3
               5       H                                                                                    3       OH
                           ,
                           6        ,                                                                   2       4
                               ,
                                    4       OH
                               5
                                                            HO                5
                                                                              5'                        1
                                                                     4'                                         5
                                                                                           6'
                                                                                                    β       6
                                                                                           1'
                                                                    3'                              α
                                                                               2
                                                                               2'
                                                                              OH                O
TRABALHOS FUTUROS

- Aumentar a produção         de   própolis   com   qualidade   e
responsabilidade;

- Divulgar as boas qualidades desta matéria prima nos meios de
comunicação;

- Continuar as pesquisas na Universidades e Centros de Pesquisa;

- INDICAÇÃO GEOGRÁFICA DA PRÓPOLIS VERMELHA
                                   VERMELHA.
√ Aumento da biopirataria (Perda de direitos de uso de substâncias
química b il i
  í i brasileiras para outros países).
                                í   )
Contato:

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            0xx19 3429 4150
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Obrigado!   E-mail: alencar@esalq.usp.br
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  • 1. PRÓPOLIS VERMELHA DO BRASIL: PRODUÇÃO, COMPOSIÇÃO E ATIVIDADE BIOLÓGICA Severino Matias de Alencar Prof. de Bioquímica – ESALQ/USP
  • 2. A A nova visão do Mundo Produtos naturais Novos medicamento Novos conhecimentos 67% 28% 39% Produtos naturais Derivado de PN (PN) Provenientes 33% totalmente ou Sintético Si téti parcialmente de i l d fontes naturais
  • 3. Própolis Substância resinosa, não tóxica, coletada de diversas partes das plantas como brotos, botões florais e exsudados resinosos por abelhas africanizadas Apis mellifera B. dracunculifolia Populus sp. • Pro, em defesa de, e polis a cidade; • Civilizações Chinesa, Tibetana, Egípcia e Greco-Romana; • Utilizada no antigo Egito para embalsamar os mortos; •Confecção de violinos de qualidade; C f ã d i li d lid d • Utilizada na segunda guerra mundial em clínicas soviéticas;
  • 4. Própolis Apesar de seu uso milenar Própolis Alimento Alimento Funcional Medicamento Brasil (1950) Japão EUA (FDA – GRAS, 1988) UE (1998) China Tailândia X ( (JETRO, 2003) , )
  • 5. Própolis européia x Própolis brasileira √ Alto teor de flavonóides √ Alto teor de fenilpropanóides e derivados do ácido cinâmico (PRÓPOLIS VERDE) Álamo (Populus sp.)
  • 6. REGULAMENTO TÉCNICO PARA FIXAÇÃO DE IDENTIDADE E QUALIDADE INSTRUÇÃO NORMATIVA N.º 3, DE 19 DE JANEIRO DE 2001 Própolis: Entende se por Própolis o produto oriundo de substâncias resinosas gomosas e Entende-se resinosas, balsâmicas, colhidas pelas abelhas, de brotos, flores e exsudados de plantas, nas quais as abelhas acrescentam secreções salivares, cera e pólen para elaboração final do produto Requisitos mínimos de qualidade a que deve atender a Própolis 1) Quanto ao teor de flavonóides: √ Baixo teor: até 1,0 % (m/m); √ Médio teor: >1,0% – 2,0 % (m/m); √ Alto teor: >2,0 % (m/m). Flavonóides: mínimo d 0 5 % ( / ) Fl óid í i de 0,5 (m/m); Compostos Fenólicos: mínimo 5 % (m/m) 2) Espectro de Absorção Ultravioleta Visível – a própolis deverá apresentar picos característicos das principais classes de flavonóides entre 200 e 400 nm; 3) Atividade de oxidação: máximo de 22 segundos; Atividade antibiótica e antioxidante Atividade anticâncer Outras substâncias químicas além de flavonóides e fenólicos
  • 7. Própolis & Biodiversidade brasileira Brasil Riqueza da Biodiversidade de vegetação q g ç Muitos Tipos de própolis dependendo da Localização Geográfica Composições químicas variadas e distintas
  • 8. Aspecto da própolis bruta in natura produzida no nordeste do Brasil
  • 9. S. aureus S. aureus Flavonóides Amostra Local de coleta (I) (II) totais % CE1 Crato – CE traço traço 0,3 CE2 Crato – CE - - 0,3 PE2 Salgueiro – PE - - <0,1 PE3 Salgueiro – PE - - <0,1 PE5 Belo Jardim – PE 1,0 1,0 5,1 PE6 Belo Jardim – PE 1,0 0,5 2,7 BA4 Juazeiro – BA - traço 0,1 BA5 Juazeiro – BA - traço 0,1 BA10 Remanso – BA traço - 0,4 BA13 Salvador – BA traço - < 0,1 BA14 Salvador – BA - - 0,1 BA15 Salvador – BA - - 1,8 BA16 Barra da Choça – BA traço - 1,5 BA17 Barra da Choça – BA traço - 0,6 BA20 Vitória da Conquista – traço - 0,2 BA BA21 Vitória da Conquista – traço - 0,3 BA BA24 Anagé – BA - - 0,1 BA25 Anagé – BA - - <0, <0 1 BA7 Senhor do Bonfim – BA traço traço 1,5 BA9 Senhor do Bonfim – BA traço - 2,1 BA36 Entre Rios – BA 5,5 2,0 0,0 BA43 Entre Rios – BA 3,5 5,0 <0,1 PI1 Picos – PI - - 0,4 PI2 Picos – PI - - 1,1
  • 10. Cor dos extratos etanólicos das própolis nordestinas
  • 11. Concentração (mg/g) Compostos fenólicos BA – BA - PE- identificados Entre Sertã PE - Sertão CE - PI - Européia Rios o Sertão G9 Sertão Sertão MG 1 (ácido cumárico) 1,2 - - - 0,5 0,2 0,2 8,5 2 (ácido ferrúlico) 1,4 - - - - - - 2,4 6 (quercetina) - - - 6,8 - - - - 7 (pinobanksina) 37,4 - - - - - - - 8 (hisperetina) - - - - 1,2 - - - 9 (k f (kanferol) l) 5,1 5 1 - 1,4 1 4 - - - - 0,4 0 4 10 (apigenina) 7,9 - 2,2 - - - 0,3 0,3 11 (isoramnetina) - - - 3,4 - - - - 13 (sakuranetina) - - 18,1 18 1 - - - - - 14 (isosakuranetina) - - - - - - - - 15 (pinocembrina) 22,6 - - 72,1 - - - - 16 (éster do ácido dimetil dialil caféico) 9,8 - - - - - - - 17(pinobanksina-3- acetato) ) 36,2 , - - 14,1 , - - - - 18 (crisina) 39,9 - - 19,7 - - - - 19 (acacetina) - - - - - - - - 20 (galangina) 33,6 - - 21,1 - - - - 21 (kanferide) - - - - - - - 12,3 22- Artepilin C 38,6
  • 12. PRÓPOLIS BRASILEIRA (12 Tipos) Própolis exportada Mercado Mundial O Brasil exporta setenta toneladas de própolis/ano Um mercado que movimenta 25 milhões de dólares. Os principais compradores são o Japão, Estados Unidos, Alemanha e China.
  • 13. Própolis Vermelha: um novo tipo de própolis brasileira Preço por Kg: R$ 550,00 550 00
  • 14. Atividade antibiótica contra várias linhagens de bactérias Pseudomonas aeruginosa Bacillus cereus Bacillus subtilis Klebisiella sp. Staphylococcus aureus
  • 15. √ Alta atividade antioxidante (anti- envelhecimento) √ Composição química nunca antes relatada em uma própolis brasileira
  • 16. Fracionamento da própolis vermelha Atividade antibiótica Tratamentos S. aureus ATCC 25923 S. mutans UA159 Fração hexânica 4,76 4,76 Fração clorofórmica 7,49 7,98 Etanol 80% (controle negativo) - - 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
  • 17. TABELA 3: Valores das zonas de inibição (mm) contra os microrganismos S. aureus e S. mutans para as 11 sub-frações obtidas da fração clorofórmica, após eluição com um gradiente crescente de polaridade de solvente em coluna de sílica gel G60 G60. Sub-frações S. aureus ATCC 25923 S. mutans UA159 1-clorofórmio(100%) 3,84 5,94 2- clorofórmio/acetato de etila (1:1) ( ) 6,26 7,57 3-clorofórmio/acetato etila (1:1) 5,99 8,76 4- clorofórmio/acetato de etila (1:1) 4,98 6,69 5-acetato de etila (100%) 3,80 5,58 6- 6 acetato etila/etanoll (1 1) t t til / t (1:1) 6,14 6 14 0 7-acetato de etila/etanol (1:1) 0 0 8-acetato de etila/etanol (1:1) 0 4,47 9 9- etanol (100%) 2,09 2 09 0 10-etanol (100%) 0 4,12 11-etanol (80%) 0 4,25
  • 18. Atividade antioxidante DPPH Subfração 12 31,71 Subfração 11 33,56 Subfração 10 22,45 Subfração 09 39,58 Subfração 08 35,88 35 88 Subfração 07 39,58 Subfração 06 38,89 tras Subfração 05 37,81 Subfração 04 33,68 33 68 Amost Subfração 03 27,54 Subfração 02 26,93 Subfração 01 30,68 Fração 02 ç 62,03 Fração 65,12 Fração Hexânica 75,93 Própolis Bruta 66,22 88,68 α - tocoferol BHT 32,23 32 23 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 % Atividade sequestrante
  • 19. Cromatografia gasosa com espectrometria de massas (CG-MS) dos extrato etanólico d própolis vermelha d lit l d estado d Al t t t óli da ó li lh do litoral do t d de Alagoas 22 20 24 23 21 9 10 6 7 11 14 ? 1 25 3 5 8 13 15 18 26 4 ? ?? 12 16 17 2 Resultado inexperado: alta concentração de isoflavonas (um tipo específico de flavonóide) Ex: medicarpina, vestitol, isoliquiritigenina, formononetina, daidzeina etc.
  • 20. De onde vem a própolis vermelha??? Dalbergia Ecastophyllum (Rabo-de-bugio)
  • 21. Compostos isolados com atividade antioxidante e antibiótica 8 OH 7 O 2 OH , 3 2 6 , 4 3 5 H , , 6 4 OCH3 , 5 8 CH3O 7 O 2 OH , 3 2 6 , 4 3 5 H 3 OH , 6 , 2 4 , 4 OH 5 HO 5 5' 1 4' 5 6' β 6 1' 3' α 2 2' OH O
  • 22. TRABALHOS FUTUROS - Aumentar a produção de própolis com qualidade e responsabilidade; - Divulgar as boas qualidades desta matéria prima nos meios de comunicação; - Continuar as pesquisas na Universidades e Centros de Pesquisa; - INDICAÇÃO GEOGRÁFICA DA PRÓPOLIS VERMELHA VERMELHA.
  • 23. √ Aumento da biopirataria (Perda de direitos de uso de substâncias química b il i í i brasileiras para outros países). í )
  • 24. Contato: Ob i d ! 0xx19 3429 4150 0xx19-3429 -4150 Obrigado! E-mail: alencar@esalq.usp.br www.esalq.usp.br/lan